探针熔解曲线在耐药结核病快速筛查中的临床应用研究

目的研究探针熔解曲线在耐药结核病快速筛查中的临床应用价值。方法选取2020年1月—2021年3月镇江市第三人民医院收治的378例肺结核患者为研究对象,依次完成传统罗氏固体药物敏感性检测(比例法)、探针熔解曲线技术检测常用的6种药物耐药结果,包含利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星、阿米卡星,和比例法进行对比,计算探针熔解曲线技术检测6种药物的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率与约登指数。结果与比例法作比较,熔解曲线技术检测利福平耐药性的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率、约登指数分别为91.70%、98.10%、61.10%、99.70%、97.90%、0.898;异烟肼是87.90%、94.20%、59.20%、98.80%、93.65%、0.821;乙胺丁醇是87.50%、97.03%、38.89%、99.72%、96.83%、0.845;链霉素是91.30%、98.19%、87.50%、98.79%、97.35%、0.895;氧氟沙星是94.74%、98.89%、81.82%、99.72%、98.68%、0.936;阿米卡星是80.00%、99.46%、66.67%、99.73%、99.21%、0.795。结论探针熔解曲线在耐药结核病快速筛查中应用,具有较高敏感度及特异度,有利于临床早期识别耐药现象。

全血γ-干扰素释放试验联合GeneXpert结核分枝杆菌/利福平检测对肺结核的诊断效能

目的分析全血γ-干扰素释放试验联合全自动医用实时聚合酶链式反应系统(GeneXpert)结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)/利福平(rifampin,RIF)检测对肺结核的诊断效能。方法非随机选取镇江市第三人民医院于2022年2月—2024年2月收治的100例疑似肺结核患者为研究对象,均采取全血γ-干扰素释放试验检测、痰GeneXpert MTB/RIF检测,以固体培养结果作为金标准,分析单一及联合检测的诊断效能。结果100例疑似肺结核患者经临床诊断确诊为肺结核35例,检出率为35.00%(35/100)。联合检测的灵敏度为97.14%(34/35),高于γ-干扰素释放试验的74.29%(26/35)和GeneXpert MTB/RIF的77.14%(27/35),差异有统计学意义(χ^(2)=7.644,P<0.05)。联合与单一检测的特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。结论在肺结核的临床诊断中,全血γ-干扰素释放试验检测、GeneXpert MTB/RIF检测均有着良好的应用优势,两种检测方式联合诊断能够进一步提高诊断效能。

人颗粒溶素基因真核表达载体的构建及在肝癌细胞中表达的实验研究

目的:构建人颗粒溶素(GNLY)全长编码序列的真核表达载体,转染肿瘤细胞,观察GNLY在细胞内的表达及其对细胞增殖的抑制作用。方法:用RT-PCR技术获取人GNLY全长编码序列cDNA,克隆至pGEM-T载体进行测序,再将克隆片段插入质粒pcDNA3.1(+)中,构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/GNLY,用阳离子聚合物转染试剂转染肝癌细胞系SMMC-7721,检测目的基因mRNA的表达,W ST-8法检测细胞增殖活性。结果:获得人GNLY全长编码序列cDNA,并成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/GNLY;转染SMMC-7721细胞后,检测出目的基因mRNA的表达;重组质粒转染组与空质粒对照组细胞增殖活性有非常显著性差异(P<0.01和P<0.001),并且随着转染基因浓度的增加,细胞增殖活性逐渐降低,2.0μg/m l pcDNA3.1(+)/GNLY转染组细胞增殖活性下降至0.329。结论:pcDNA3.1(+)/GNLY真核表达载体构建成功,GNLY基因转染对SMMC-7721细胞能产生细胞毒性效应,对肝癌细胞具有一定的杀伤作用。

人精子蛋白17单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备抗精子蛋白17(Sp17)的单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:克隆人Sp17cDNA,表达带有6His标记的重组Sp17,用纯化的重组Sp17免疫BALB/c小鼠制备mAb。用ELISA筛选抗体阳性的细胞克隆。用免疫组化染色法及阻断试验鉴定mAb的特异性。结果:获得2株杂交瘤细胞系3C12和3D6,其分泌的mAb的Ig亚类(型)分别为IgG1和IgM(κ),杂交瘤细胞培养上清的ELISA效价分别为1∶64和1∶32;腹水mAb的效价分别为1∶1×105和1∶5×104。用人和大鼠睾丸组织以及人精液精子免疫组化染色及阻断试验证明,抗Sp17mAb具有良好的特异性。抗Sp17mAb也可识别卵巢癌组织中异常表达的Sp17。结论:成功地制备特异性的抗Sp17mAb,为研究该蛋白的功能、天然分布及异常表达奠定了基础。

不育患者血清精子蛋白17抗体的检测及临床意义

目的:检测抗精子抗体(AsAb)阳性不育患者血清中抗精子蛋白17(Sp17)的抗体,探讨该抗体在免疫性不育血清学诊断和免疫避孕方面的潜在应用价值。方法:用重组人Sp17作为抗原,ELISA法检测62例AsAb阳性血清中Sp17抗体阳性率及滴度,分析AsAb中抗Sp17的含量。结果:AsAb阳性血清中Sp17抗体阳性率为56.5%,男女之间差异无显著性。Sp17抗体占AsAb的(10.09±7.45)%,结果具有统计学意义(P<0.05)。结论:Sp17是重要的精子抗原组分,血清中Sp17抗体的检测可作为不育患者辅助诊断指标,同时也提示Sp17可能是一种免疫避孕候选抗原疫苗。

人精子蛋白17放射诱导表达细胞模型的构建

目的:构建pEgr-Sp17重组质粒,并检测其在人卵巢癌细胞系HO8910中的辐射诱导表达,探索Egr-1基因调控序列辐射诱导下游基因表达的功能,建立放射诱导表达人精子蛋白Sp17的细胞模型。方法:用双酶切、粘端连接的方法构建含有辐射诱导特性的早期反应因子Egr-1和人Sp17基因的pEgr-Sp17重组质粒,利用脂质体介导其转染人HO8910细胞,用免疫细胞化学方法检测X线照射后被转染细胞中Sp17的表达。在确证Sp17能瞬时表达后,继续用含G418的RPMI1640培养基培养细胞,筛选稳定表达Sp17的细胞株。结果:测序结果和酶切鉴定均证实pEgr-Sp17重组质粒构建正确;免疫细胞化学试验表明pEgr-Sp17重组质粒转染的人HO8910细胞表达Sp17蛋白。结论:X线可诱导pEgr-Sp17重组质粒在人HO8910细胞中表达Sp17蛋白,构建了Sp17蛋白放射诱导表达的卵巢癌细胞模型。

人穿孔素真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达

目的:观察克隆的人穿孔素(pfn)基因在COS-7细胞中的表达情况。方法:用PCR方法获取人pfn全长基因,将所获基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),转染COS-7细胞,RT-PCR检测pfn基因在COS-7细胞中的表达。结果:成功获得人pfn全长基因,并构建了真核表达载体。转染COS-7后,检测出pfn基因的表达。结论:人pfn全长基因可以在转染的COS-7细胞中表达。

血清精子蛋白17检测的双抗夹心ELISA法及在卵巢癌诊断中的应用

目的:建立双抗夹心ELISA法检测血清中精子蛋白17(sperm protein 17,Sp17)水平。方法:以重组Sp17蛋白为免疫原制备兔抗Sp17抗体,建立Sp17双抗夹心ELISA检测方法,鉴定其最小检出限、精确度、回收率,并检测42例正常人及28例卵巢癌患者血清Sp17水平。结果:该双抗夹心ELISA法敏感度高、特异性强、重复性好。卵巢癌患者与正常人血清Sp17含量有显著差别(P<0.01),正常人血清中存在少量Sp17蛋白,而卵巢癌患者血清中Sp17含量明显升高者占39.3%。结论:卵巢癌患者血清中Sp17含量明显升高。测定血清Sp17水平的ELISA方法学确立为阐明Sp17在卵巢癌患者中的免疫生物学意义提供了实验手段。

hSp17真核表达载体构建及其在卵巢癌细胞中的表达

目的构建人精子蛋白17(hSp17)基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/hSp17,为其临床应用奠定基础。方法用PCR方法获取hSp17基因片段,NheⅠ、KpnⅠ双酶切、粘端连接的方法构建含有hSp17基因的pcD-NA3.1(+)/hSp17真核表达载体。将该载体行脂质体介导转染卵巢癌细胞HO8910,免疫细胞化学方法检测转染细胞hSp17蛋白表达,G418筛选稳定表达hSp17蛋白的细胞株。结果酶切和测序结果均证实pcDNA3.1(+)/hSp17重组质粒的构建完全正确。免疫细胞化学方法证实外源性hSp17基因能够在卵巢癌HO8910细胞瞬时表达。经G418连续筛选,得到阳性克隆细胞株,并证实了外源性hSp17基因在卵巢癌HO8910细胞中稳定表达。结论成功构建了稳定表达外源性hSp17蛋白的卵巢癌细胞株;其可为卵巢癌的免疫治疗奠定基础。

颗粒酶A诱导Caspases非依赖性细胞死亡

颗粒酶A(granzyme A,GzmA),是存在于细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和天然杀伤细胞(NK细胞)的细胞毒颗粒中含量最多的一种丝氨酸蛋白酶,在穿孔素(perforin)协同作用下通过颗粒胞吐(granule exocytosis)释放进入在杀伤细胞和靶细胞之间形成的免疫突触(immunological synapse),然后进入靶细胞的细胞浆,并在细胞核聚集,诱导一种caspases非依赖性细胞死亡。GzmA靶向作用于一种与内质网结合的特殊的复合体——SET复合体,其包含3种GzmA底物:核小体装配蛋白SET、DNA结合蛋白HMG-2、具有碱基切除修复作用的核酸内切酶Apel。SET复合体还含有一种抑癌蛋白pp32和一种具有脱氧核糖核酸酶(DNase)活性的NM23-H1。当GzmA作用于SET复合体时释放出NM23-H1并激活其DNase活性,也阻断了Apel对DNA损伤的修复作用,在DNA上形成单链的缺刻。这是一种新发现的由GzmA诱导的细胞凋亡途径。

严重肝病患者血氨的变化及其意义

目的 :探讨严重肝病患者血氨变化及其意义。方法 :采用酶法测定 10 2例严重肝病患者 (重型肝炎 6 8例、失代偿肝硬化18例、原发性肝癌 16例 )和 5 6例一般慢性肝炎患者的血氨含量。结果 :慢性肝炎患者血氨正常 ,而严重肝病患者的血氨则显著增高。随着病情进展 ,严重肝病患者血氨浓度的增高与肝性脑病的严重程度呈明显正相关。结论 :血氨增高在肝性脑病发病机理中起着重要的作用。动态测定血氨对重型肝炎患者的诊断及治疗具有较为重要的临床意义。

案例点击:借壳上市

当下,企业上市筹资的热情依然十分炙热,IPO对众公司吸引力十足。但在一些特别的情况下,对于具体企业的具体情况,可选择的上市方式也许不止IPO。这里,就让我们登录投资银行的界面,点击经典案例,来认识一种独特的上市方式;

风险投资:狐狸与狼的合作

风险投资公司并不是及时雨、雪中炭,风险投资公司只对那些能迅速做大的企业感兴趣,最好是已经开始盈利、营业额节节上升的企业. 风险投资公司也并不是一般人所想象的是风险的追求者,他们总是在想办法把投资风险降至最低.

肺结核病患者颗粒溶素在外周血中表达水平降低

目的研究肺结核病患者外周血颗粒溶素的表达及其意义。方法收集肺结核患者112例(分为痰菌阳性57例,阴性55例),分离外周血单个核细胞,抽提总RNA,荧光定量PCR方法检测其颗粒溶素mRNA的表达水平。分析抗结核治疗前后颗粒溶素表达水平的变化。结果治疗前菌阳组PBMC颗粒溶素表达水平显著低于菌阴组(P<0.05);治疗前后菌阳组PBMC颗粒溶素表达水平有统计学意义(P<0.05)。结论肺结核患者外周血颗粒溶素表达水平降低。

对创业投资行业的分析

影响创业投资行业的因素 创业投资作为一个行业,除了需要有一个合适的社会人文环境(创新意识、信托意识和风险意识)、一个相对成熟的市场经济体系和比较发达的金融业外,还需要有以下条件来保证其持续的兴旺:

杠杆收购:小资金撬来大回报

随着经济改革的不断深入,中国的产业结构面临着整合和调整,企业也开始采取多种方式发展和壮大自己。兼并收购的浪潮开始席卷中国。而在兼并收购的过程中,必然涉及融资方式的选择。如果采取债务融资,就是杠杆收购。

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应用线性探针杂交技术快速检测结核分枝杆菌的多药耐药性

目的:评价线性探针杂交技术(HAIN技术,Geno Type MTBDR plus试剂盒)快速检测结核分枝杆菌多药耐药性的价值。方法:利用HAIN技术检测277例涂阳患者痰标本,并与比例法药敏试验作比较。结果:HAIN技术对肺结核患者耐多药的检出率和传统比例法药敏试验相比无显著差异(P>0.05)。HAIN技术检测耐利福平、耐异烟肼和耐多药结核的灵敏度、特异性分别为100%、81.69%、80.77%和100%、93.90%、95.74%。利福平耐药基因突变频率最高的是rpo B S531L位点[35/60(58.33%)];异烟肼耐药基因最常见的突变是kat G S315 T1位点[42/71(59.15%)],其次是inh A c15t位点[23/71(32.39%)]。结论:HAIN技术能快速、准确诊断结核分枝杆菌利福平、异烟肼的耐药性及多药耐药性。

乙肝病毒前S1抗原、乙肝病毒血清标志物和HBV-DNA联合检测的临床应用

目的探讨乙肝病毒前S1抗原(PreS1)、乙肝病毒标志物(HBVM)与乙肝病毒DNA(HBV-DNA)检测三者之间的关系,判断乙肝病毒在体内的复制情况。方法对550例乙型肝炎患者血清,用ELISA方法检测PreS1、两对半标志物,用荧光定量PCR方法定量检测HBV-DNA并分析3者之间的关系。结果HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)的模式中,PreS1与HBV-DNA检出率分别为52.3%与88.4%,HBsAg(+)、HbeAb(+)、HBcAb(+)的模式中PreS1和HBV-DNA检出率分别为31.1%和47.5%,HBsAg(+)、HBcAb(+)的模式中PreS1和HBV-DNA检出率分别为47.3%和63.4%。结论PreS1能较好的反映HBV病毒感染及复制情况,可作为一种新的HBV血清标志物和监测指标,三者联合检测互相补充,更有助于临床疾病的诊治。