手动组织芯片仪在髓母细胞瘤中的应用

临床病理研究通常需要收集大量的组织样本，进行多组、多类病理项目检测，现今国内依然普遍采用普通切片技术进行实验操作，消耗大量的劳动力及资金成本。我科采用简易手动组织芯片仪制作多组织芯片蜡块，应用于髓母细胞瘤分型实验，可大幅降低实验工作量及成本，现介绍如下。

商用淀粉酶在肝穿刺活检标本糖原染色中的应用

肝穿刺活检技术已广泛应用于临床肝病的诊断与治疗，是肝脏炎症、肿瘤、代谢性、遗传性等疾病的重要诊断方法。常规PAS染色不能正确区分代谢性肝脏疾病的阳性物质与正常肝脏纤维素及黏液物质，易导致代谢性肝病的误、漏诊。本科室采用进口商用淀粉酶试剂盒，建立新的操作规范与流程，对肝脏穿刺活检标本进行标准化处理，较好地解决该问题，保证了肝脏代谢性疾病诊断的正确率，现报道如下。

Survivin基因在胚胎性横纹肌肉瘤RD细胞中的作用

目的:探讨survivin基因在儿童胚胎性横纹肌肉瘤(embryonal rhabdomyosarcoma,ERMS)中的生物学作用。方法:采用survivin免疫组织化学检测ERMS肿瘤组织和正常骨骼肌组织的表达情况,小干扰RNA(siRNA)介导的survivin抑制对ERMS RD细胞凋亡的影响,原位末端标记法(TUNEL)检测RD细胞凋亡率,Western印迹法检测RD细胞caspase-3和caspase-9蛋白表达水平。结果:Sur vivin在ERMS中高表达而在正常骨骼肌组织中不表达,特异性siRNA干扰sur v iv in表达导致RD细胞凋亡显著增加,survivin表达的下调导致更高的凋亡率,survivin表达的下调增加了caspase-3的活性,对caspase-9的活性无影响。结论:Survivin过表达可能通过抑制细胞凋亡而与ERMS发病机制有关。

免疫组织化学标记在儿童髓母细胞瘤分子分型中的应用及其临床意义

目的:探讨免疫组织化学标记在儿童髓母细胞瘤分子分型中应用的可行性,分析分子分型相关蛋白的表达与肿瘤临床病理特点及预后的关系。方法:应用组织芯片技术及免疫组织化学Elivision法检测β-catenin,Gli-1,NPR3及KCNA1在40例儿童髓母细胞瘤中的表达,分析根据表达结果行分子分型的可行性及蛋白表达与年龄、性别、肿瘤部位、病理分型及预后的关系。结果:40例肿瘤组织中β-catenin,Gli-1,NPR3及KCNA1的阳性率分别为10%,55%,50%及30%,Gli-1阳性表达与患儿年龄及病理类型相关(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析提示<3岁年龄组及Gli-1阳性组患儿预后较差(P<0.05)。Cox比例风险回归分析显示患儿年龄、病理分型、Gli-1蛋白及NPR3蛋白表达是儿童髓母细胞瘤的独立预后因子(P<0.05)。22例髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)行分子分型,其中WNT型4例,SHH型10例,3型6例,4型2例,Kaplan-Meier生存分析提示分子分型与预后无关(P>0.05)。结论:β-catenin核阳或核浆阳可作为WNT型髓母细胞瘤的蛋白标志物,Gli-1表达与患儿年龄及病理学类型密切相关,阳性表达提示患儿预后较差,是独立的预后因子之一,但其表达与NPR3及KCNA1的表达有部分重叠,因此尚需结合SHH型、3型及4型髓母细胞瘤的其它分子检测方法进行准确的分子分型。

骨骼肌活检临床操作及染色质量控制

肌肉病理学是肌肉病学临床和基础的桥梁,属于临床病理学范畴。 Dubowitz是英国近代肌肉病理学的创始人,其制订的研究方法和规范简洁实用。1973年, Brooke把新建立的快速冷冻切片酶组织化学染色技术以及电镜技术引入常规肌肉活检研究中。1985年,Sewry和Fitzsimmons加入了免疫组化染色技术内容,并选定了一些特异性抗体[1]。早期的肌肉活检将肌肉组织直接固定于10%中性福尔马林中,其后会丧失很多可以检测的信息。现今的肌肉活检技术已经有了非常严格规范的操作程序。本文结合我科实际工作经验,提出提高肌肉活检制片质量的几点建议。

不同热修复抗原方法与胰腺导管腺癌分子标记物CD105免疫组化方法的研究

目的探讨不同热抗原修复方法与CD105染色阳性率的关系。方法病理切片进行不同热抗原修复方法的免疫组化染色。结果免疫组化染色结果显示,热修复能量越高,CD105阳性率越好,但同时非特异性染色的情况会极具增加,使得结果可信度降低;而低能量的热抗原修复会使得染色效果不好。结论对于CD105的染色来说,高温高压抗原修复2分钟,或者普通高温抗原修复6分钟,都能使得抗体特异性和灵敏度达到理想的效果。

胰腺癌细胞CD10基因表达与患者术后存活率的关系探讨

目的探讨CD10在胰腺癌中的表达及其与临床病理特征和术后存活率的关系。方法采用免疫组织化学方法,检测83例胰腺癌和10例正常胰腺组织中CD10的表达。分析CD10在胰腺癌中的表达与临床病理特征和预后之间的相关性。结果胰腺癌中CD10的表达率随着临床TNM分期的增加而明显增高;胰腺癌中CD10的表达阳性患者,其术后生存率明显低于CD10表达阴性患者(P<0.05)。结论胰腺癌中CD10的高表达与TNM分期高有关。CD10在胰腺癌的发展、转移及预后中可能发挥重要作用,可作为临床评价胰腺癌生物学行为及评估预后的指标之一。

儿童髓母细胞瘤组织中生长因子受体结合蛋白2的相关接头蛋白-1、胶质瘤相关肿瘤基因同源物-1表达的临床意义

目的探讨生长因子受体结合蛋白2的相关接头蛋白－1（Gab－1）、胶质瘤相关肿瘤基因同源物－1（Gli－1）在儿童髓母细胞瘤中的表达，分析其蛋白表达与肿瘤临床病理特点及预后的关系。 方法应用免疫组织化学Elivision法检测Gab－1、Gli－1在40例儿童髓母细胞瘤组织芯片中的表达，运用Chi－square检验或Fisher′s精确概率检验分析Gab－1、Gli－1蛋白表达与年龄、性别、肿瘤部位、病理分型的关系，结合随访资料进行Kaplan－Meier生存分析及Cox比例风险回归分析。 结果Gab－1及Gli－1蛋白在儿童髓母细胞瘤组织中的阳性率分别为35.0%和55.0%。髓母细胞瘤患儿肿瘤组织Gab－1阳性表达率在不同性别[男：30.4%（7/23例）比女：41.2%（7/17例）]、年龄[〈3岁：40.0%（6/15例）比≥3岁：32.0%（8/25例）]、肿瘤部位[小脑：25.0%（5/20例）比第四脑室：45.0%（9/20例）]及病理类型[经典型：33.3%（7/27例）比促纤维增生/结节型：50.0%（5/10例）比间变型/大细胞型：66.7%（2/3例）]之间差异均无统计学意义（χ2＝0.496、0.264、1.758、3.289，均P〉0.05）。不同年龄段[〈3岁：80.0%（12/15例）比≥3岁：40.0%（10/25例）]和不同病理分型[经典型：40.7%（11/27例）比促纤维增生/结节型：90.0%（9/10例）比间变型/大细胞型：66.7%（2/3例）]髓母细胞瘤患儿Gli－1阳性表达率差异均有统计学意义（χ2＝6.061、7.333，均P〈0.05）；不同性别[男：60.9%（14/23例）比女：47.1%（8/17例）]及肿瘤部位[小脑：55.0%（11/20例）比第四脑室：55.0%（11/20例）]髓母细胞瘤患儿之间Gli－1阳性表达率差异均无统计学意义（χ2＝0.753、0.000，均P〉0.05）。Kaplan－Meier生存分析提示患儿年龄、Gab－1、Gli－1蛋白表达均与儿童髓母细胞瘤的预后相关（均P〈0.05），Cox比例风险回归分析显示患儿年龄、病理分型和Gli－1阳性表达是儿童髓母细胞瘤的独立危险因素（均P〈0.05）。 结论Gab－1、Gli－1在儿童髓母细胞瘤中的表达与预后相关，阳性表达可作为肿瘤预后不良的指标。

miR-200c-3p对肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨miR-200c-3p对肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞株增殖与凋亡的调控作用。方法收集2015年1月至2019年8月深圳市儿童医院收治肾母细胞瘤患儿新鲜的瘤组织和瘤旁肾组织30例。实验分为模拟物阴性对照组、miR-200c-3p组及miR-200c-3p抑制剂组。采用实时荧光定量PCR法检测30例配对的肾母细胞瘤肿瘤组织、瘤旁肾组织及肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞和人胚肾293FT细胞系中miR-200c-3p的表达情况。采用细胞计数盒8(CCK-8)细胞增殖实验测定miR-200c-3p抑制SK-NEP-1细胞增殖的效果,流式细胞术检测miR-200c-3p对SK-NEP-1细胞周期及凋亡的影响。裸鼠原位移植实验检测miR-200c-3p过表达对体内成瘤的影响,对瘤体组织进行HE染色并病理形态的观察、免疫组织化学染色检测移植瘤组织中核增殖指数Ki-67的增殖情况;Western blot法检测3组裸鼠移植瘤组织中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)的表达水平。结果30例患儿miR-200c-3p的表达水平在肾母细胞瘤组织(0.420±0.587)中明显低于配对的瘤旁肾组织(1.500±0.504)(t=8.613,P<0.001)。miR-200c-3p的表达水平在SK-NEP-1细胞中(0.363±0.006)与人胚肾293FT细胞(0.807±0.186)比较也显著下降(t=4.136,P<0.05)。CCK-8法表明按照组间和时间交互效应miR-200c-3p可抑制SK-NEP-1细胞体外增殖(F=16.81,P<0.001)。流式细胞术检测肾母细胞瘤细胞周期与凋亡显示,miR-200c-3p能使SK-NEP-1细胞阻滞在G0/G1期及S期(t=-7.770,P<0.01;t=11.501,P<0.001),且促进早期凋亡率增加,晚期凋亡率降低(t=-22.270,P<0.001;t=4.612,P<0.01)。裸鼠原位移植实验显示与模拟物阴性对照组比较,miR-200c-3p组肿瘤体积[(2.469±0.914)cm^3比(0.419±0.16)cm^3]明显缩小(t=5.407,P<0.001),而miR-200c-3p抑制剂组[(1.627±0.189)cm^3]差异不明显(t=2.209,P=0.052)。Western blot实验示miR-200c-3p上调了凋亡蛋白cleaved Caspase-3和Bax的表达水平(t=-47.000、-82.730,均P<0.001),但下调了抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平(t=53.740,P<0.001)。结论miR-200c-3p能抑制SK-NEP-1细胞增殖及促进细胞凋亡,抑制裸鼠移植瘤的生长并起到抑癌基因的作用。

肺泡毛细血管发育不良伴肺静脉错位中FOXF1和Serotonin Transporter的表达及其鉴别诊断

目的探讨FOXF1和Serotonin Transporter(SERT)在肺泡毛细血管发育不良伴肺静脉错位(ACD/MPV)中的表达及诊断作用。方法采用免疫组织化学MaxVisionTM法检测ACD/MPV中FOXF1和SERT表达情况并分析其临床病理特征。高通量测序法检测2例ACD/MPV中FOXF1基因突变情况。结果2例ACD/MPV中,FOXF1均为阳性(2/2),SERT均为阴性。二代测序显示在16q24.1号染色体检测到FOXF1基因c.376-377insT(Pro126fs)杂合变异。结论FOXF1及SERT联合检测可有助于ACD/MPV的诊断。

婴儿黑色素性神经外胚瘤三例临床病理学观察

目的探讨婴儿黑色素性神经外胚瘤(MNTI)的临床病理特征、诊断及鉴别诊断。方法回顾性分析3例MNTI的临床资料、组织形态、免疫组织化学及分子病理特点,并复习相关文献。结果 3例患者均为男婴,平均年龄3.6个月,发生在颌骨2例,下肢1例。组织学表现为肿瘤由小的神经母细胞样细胞和较大的含黑色素的上皮样细胞组成,间质为含血管的致密纤维性间质。上皮细胞呈泡状或腺管状排列,常围绕在较小的神经母细胞样细胞形成的细胞巢周围。免疫组织化学染色显示大小肿瘤细胞均表达波形蛋白、突触素和神经元特异性烯醇化酶,上皮样细胞对广谱细胞角蛋白(CKpan)和HMB45也呈阳性,但对其他黑色素瘤标志物呈阴性。分子病理检测显示BRAF V600E基因例1及例2均呈野生型,荧光原位杂交检测例2 N-MYC基因扩增为阴性。结论 MNTI是罕见的起源于神经嵴的婴儿良性肿瘤,易误诊为恶性程度较高的小圆细胞肿瘤和黑色素瘤。掌握其临床病理特征对MNTI的诊断、鉴别诊断都有重要意义。

儿童异基因造血干细胞移植后淋巴组织增殖性疾病程序性死亡受体-1和程序性死亡配体-1的表达

目的探讨儿童异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后淋巴组织增殖性疾病(PTLD)中程序性死亡受体-1(PD-1)及程序性死亡配体-1(PD-L1)的表达及临床病理特征,明确PD-1/PD-L1抑制剂的检查点抑制是否可以作为一种治疗选择。方法回顾性分析2012年1月1日至2019年12月30日深圳市儿童医院13例病理确诊的allo-HSCT后PTLD的临床资料,采用免疫组织化学MaxVision™法染色、EB病毒(EBV)原位杂交及淋巴瘤基因重排检测,分析PD-1及PD-L1的表达与PTLD临床病理特征的关系。结果肿瘤细胞PD-1表达与患儿性别、年龄、基础疾病、组织学类型、移植方式及EBV原位杂交表达无关(均P>0.05)。而PD-L1的表达与组织学类型有关(P<0.05),其中PD-L1阳性率重型β-珠蛋白生成障碍性贫血(90.0%,9/10例)高于重型再生障碍性贫血(66.7%,2/3例),单形性PTLD(100.0%,2/2例)高于多形性PTLD(83.3%,5/6例),EBV阳性PTLD(90.9%,10/11例)高于EBV阴性PTLD(50.0%,1/2例)。13例PTLD中PD-1及PD-L1在肿瘤细胞中的阳性率分别为46.2%(6/13例)和61.5%(8/13例),在微环境细胞中的阳性率分别为92.3%(12/13例)和76.9%(10/13例),EBV阳性率为84.6%(11/13例)。结论PD-L1在单形性PTLD的肿瘤细胞中有更高的阳性率;且在标准免疫治疗和化疗无效的情况下,可对所有类型的PTLD进行PD-1和PD-L1的常规染色。