再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞遗传特性的影响

目的 :研究再生丝素膜 (WL组 ,HY组 ,SD组 )对大鼠鼠胚成纤维细胞的遗传物质的影响。方法 :采用浸提液法在体外培养鼠胚成纤维细胞 ,计算细胞的微核率 (MNF)和染色体畸变率 (CAF) ,用单细胞电泳法 (SCGEassay)检测基因组DNA的损伤程度。结果 :WL组、SD组再生丝素膜和空白对照组的细胞微核率 (MNF)和染色体畸变率(CAF)无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,无明显彗星现象 ;而HY组再生丝素膜与阴性对照比较有显著差异 (P <0 0 1)。结论 :WL组和SD组再生丝素膜对种子细胞的遗传学特性无明显影响 ,优于HY组。

人血管生成素1和血管内皮生长因子165重组腺病毒载体构建及目的基因表达

目的:拟构建人血管生成素1和血管内皮生长因子165腺病毒载体,观察靶细胞转染后目的基因的表达水平。方法:通过RT-PCR方法克隆人Ang-1全长编码基因,PCR法以pcDNA3.0-VEGF165质粒为模板扩增VEGF165基因,分别将目的基因酶切连接到带有GFP标记的pTrack-CMV质粒上,构建重组质粒pTrack-CMV-Ang-1和pTrack-CMV-VEGF165,经PCR、酶切和测序鉴定后将其PmeI线性化与腺病毒质粒pAdeasy-1共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒载体pAdeasy-1-pTrack-CMV-Ang-1/VEGF165,经PacI线性化后转染QBI-293A包装细胞,收获重组腺病毒Ad-Ang-1及Ad-VEGF165。结果:PCR﹑双酶切和测序鉴定结果证实成功构建pTrack-CMV-Ang-1/VEGF165重组转移质粒,PmeI线性化后重组腺病毒载体获得成功包装。脂质体转染QBI-293A细胞后光镜下可见由腺病毒引起的细胞圆缩、聚集呈菌落状的典型细胞病理性改变;荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的表达,且荧光强度随培养时间延长而逐渐增强;经多轮感染、扩增后,病毒效价可达(2.0～5.0)×1010pfu/mL。转染48h后,293A细胞中的血管生成素1与血管内皮生长因子含量均明显提高(F=427.93,17.93,P<0.05)。结论:成功构建并获得了Ad-Ang-1及Ad-VEGF165重组腺病毒,血管生成素1与血管内皮生长因子165均能在靶细胞中有效表达。

再生丝素膜对Ad-VEGF_(165)转基因成纤维细胞基因表达的影响(英文)

背景:前期实验已证实再生丝素膜可促进pcDNA3.0-VEGF165转染的L929细胞表达血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)。目的:进一步观察再生丝素膜对经腺病毒介导的人VEGF(Ad-VEGF165)转基因成纤维细胞基因转录表达的影响。设计、时间及地点:对比观察细胞基因工程实验,于2007-11/2008-04在苏州大学细胞与分子生物实验室完成。材料:再生丝素膜由苏州大学材料工程学院李明忠教授提供。方法:将Ad-VEGF165腺病毒感染培养在再生丝素膜、聚氯乙烯膜及聚乙烯膜上的QBI-293A人胚肾和WI-38人胚肺成纤维细胞,以空载体Ad-GFP腺病毒和未接种病毒的PBS组为对照。主要观察指标:通过实时定量RT-PCR法检测不同材料对成纤维细胞VEGF mRNA转录的影响;ELISA法检测其对VEGF、血管生成素1、碱性成纤维细胞生长因子、血小板衍化生长因子表达的影响。结果:再生丝素膜组成纤维细胞VEGF mRNA呈高水平表达,但聚氯乙烯膜组转录水平明显下降(P<0.05)。再生丝素膜组Ad-VEGF165转基因293A细胞及WI-38细胞不仅目的基因VEGF细胞因子的分泌呈高水平表达,并可促使血管生成素1基因表达水平明显提高(P<0.05),而且再生丝素膜还可使成纤维细胞自身分泌的碱性成纤维细胞生长因子、血小板衍化生长因子呈现正常表达水平。结论:再生丝素膜不仅利于VEGF目的基因在成纤维细胞中呈现高效表达,并促进血管生成素1基因的表达,而且能维持成纤维细胞自身分泌的与组织损伤修复相关基因碱性成纤维细胞生长因子、血小板衍化生长因子的正常表达。

Ad-VEGF165转基因成纤维细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成效应及其分子机制研究

目的研究经腺病毒介导的人血管内皮生长因子165(VEGF165)转基因细胞修饰的再生丝素膜(SF)诱导血管形成活性及其分子机制。方法将WI-38人胚肺成纤维细胞分别培养在有(SFC组)或无(PBS组)再生丝素膜的24孔培养板上,24h后用带绿色荧光蛋白(GFP)基因的空载体腺病毒Ad-GFP(Ad-GFP组/SFCG组)或含有VEGF165目的基因的重组腺病毒Ad-VEGF165(Ad-VEGF165组/SFCV组)感染培养细胞。通过形态学观察和ELISA法检测各组细胞培养上清液中VEGF165目的基因表达及其对细胞自分泌的血管生成素-1(Ang-1)、碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)、血小板衍化生长因子(PDGF)表达的影响,并用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)和在兔眼角膜上进行新生血管诱导实验。结果形态学观察发现WI-38细胞在再生丝素膜上不仅贴壁生长良好,而且易被Ad-GFP、Ad-VEGF165腺病毒感染,呈现强荧光。再生丝素膜利于Ad-VEGF165组中VEGF165目的基因在细胞中的高表达(P<0.05),而且还可使细胞自分泌的Ang-1表达水平明显升高(P<0.05),同时可维持细胞自分泌的FGF2及PDGF稳定表达。Ad-VEGF165组(SFCV组)具有促进CAM上血管生长活性和诱导兔眼角膜组织新生血管生成作用。结论 Ad-VEGF165感染WI-38成纤维细胞所修饰的再生丝素膜,具有诱导血管新生的功能。

几种丝素材料细胞毒性的实验研究

目的:研究不同交联方式的再生丝素膜(WL组,SD组,HY组)的细胞毒性及其影响细胞增殖的因素。方法:采用浸提液法,体外培养鼠胚真皮层纤维细胞,用MTT法检测细胞增殖活力和计算相对增殖率。结果:WL组,SD组再生丝素膜细胞毒性小于1级,有较强的增殖活力;HY组再生丝素细胞毒性0～2级;而用高浓度环氧交联剂交联的再生丝素膜对细胞生长有一定抑制作用;且随着环氧交联剂浓度的增加,细胞毒性增大。结论:WL组和SD组再生丝素膜无细胞毒性,HY组再生丝素膜无明显的细胞毒性,高浓度环氧剂交联的再生丝素膜对细胞有一定的毒性,有待于进一步改性。

抗人血管内皮生长因子发夹状核酶对人脐静脉内皮细胞ECV304的影响

目的观察抗人血管内皮生长因子(VEGF)发夹状核酶对人脐静脉内皮细胞ECV304生物学特性的影响。方法将抗人VEGF发夹状核酶(RZ)基因构建的pcDNA3.1+/RZ转染ECV304细胞,经G418筛选后,用RT-PCR法鉴定RZ基因在ECV304细胞中的转录,用MTT法和流式细胞仪检测转染前后ECV304细胞增殖活力和细胞周期,ELISA法检测细胞上清VEGF的表达水平。结果RZ基因在ECV304细胞中获得转录,它不改变细胞增殖活力和细胞周期,但能明显下调VEGF的表达。结论抗人VEGF发夹状核酶能够显著抑制ECV304细胞VEGF的表达,为进一步开展核酶的肿瘤基因治疗提供了实验依据。

节点可靠感知的差异保护虚拟航空网络映射算法

针对集成僵化的传统航空网络难以在节点出现故障后快速高效调度网络资源,从而恢复任务执行的问题,提出了无线网络虚拟化环境下节点可靠感知的差异保护虚拟航空网络映射(node reliability-aware protection-differentiated virtual airborne network embedding,NRPD-VANE)算法。首先,节点映射采用新的节点重要度评价方法,综合感知故障可能、无线干扰和网络资源,为虚拟节点映射可靠物理节点;其次,链路映射根据节点重要度,采用P圈保护技术对映射路径节点实行差异保护。仿真结果表明,相比传统的节点保护映射算法,所提算法在保持较低恢复时延的同时,提高了映射成功率。

快氢分子离子在碳膜中的能量损失测量

六十年代初发现H2+和H+在薄膜中的能损有差异。它反应了分子离子和原子离子在碰撞过程中有不同的规律。由于在薄膜中快粒子的入射和出射能量差值很小,透射能谱有一定的展宽,这给直接测量决定能损带来困难。本工作利用高分辨库能爆炸技术(能量分辨率为1.8×10-4FWHM)直接测量了H2+和H+在薄膜中的能量损失。

基于循环神经网络的SPMA协议信道状态智能检测改进算法

为实现对时敏目标的快速探测、定位和打击,战术瞄准网络技术(TTNT)对战术信息接入信道、交互传输的实时性、可靠性提出高要求。TTNT采用基于统计优先的多址接入(SPMA)协议,通过周期性计算统计平均的思想,估计当前信道状态,控制战术信息接入信道的时机。该思想仅适用于流量相对平稳的情况,在流量非平稳时会导致较大的信道状态检测误差。针对此问题,引入流量预测技术,提出基于循环神经网络的SPMA协议信道状态智能检测改进算法。利用循环神经网络的学习特点学习历史流量数据的隐含特征,构建流量预测器对瞬时时刻的流量脉冲到达数进行实时预测,从而准确获取当前信道状态。实验结果表明:所提算法对信道状态的检测结果更接近真实值,显著降低了信道忙闲状态的误判率。

集中式双非参量累积和的合作频谱感知技术

针对认知无线电网络频谱感知的检测时延降低问题,提出了一种采用双非参量累积和的合作频谱感知方法。在单主用户认知网络中,本地认知用户执行非参量累积和算法,处理能量观测数据,以缩短检测时延,减少对主用户先验信息的需求,同时为了降低带宽开销,只向融合中心传输1比特的预判决结果。融合中心在噪声干扰下接收融合预判决结果,执行非参量累积和算法,累加判决统计量,对主用户信号是否存在进行最终判决。仿真结果表明,在10%的虚警概率下,相比于传统的非参量合作频谱感知算法,双非参量累积和算法具有较低的检测延迟。

基于非参量累积和的合作频谱感知

针对认知无线电网络中频谱感知的检测时延降低问题,提出了基于非参量累积和的合作频谱感知算法。本地认知用户预处理频谱观测数据,获得观测数据相对于信念值的正向漂移和负向漂移。为了缩短检测延迟,认知用户只将数据的正向漂移同步传输至融合中心。融合中心融合正向漂移得到判决信息,采用非参量累积和算法依时间序列顺序累加判决信息,判断主用户是否正在使用授权频段。为了解决不传输负向漂移引起的虚警问题,改进算法提出融合中心可以保留首次判决,经过等待时间间隔后再作出最终判决。相对于传统的软融合算法,改进融合规则的合作频谱感知算法具有较低的检测延迟。

基于负载均衡的无线虚拟网络映射算法

针对网络僵化的问题,目前多采用网络虚拟化(NV)方法进行解决,其关键技术是虚拟网络映射(VNE)。为解决无线VNE过程中功率和带宽资源使用不均衡的问题,基于负载均衡原理提出一种联合资源分级的无线VNE算法。首先,采用新的节点资源排序方式,其中将节点功率和平均链路带宽作为排序依据;其次,对资源进行分级,以动态调整虚拟网络请求对功率和带宽资源的需求;最后,改进功率和带宽资源的单位成本,并以最小化成本为目标函数选择资源分配方案。与原有的无线VNE算法WVNE-JBP相比,所提算法的总体接受率提高了11.7个百分点,平均功率利用率提高了4.4个百分点,平均带宽利用率提高了1.6个百分点。实验结果表明,所提算法能有效提高虚拟网络接受率和资源利用率。

使用自组织增量径向基网络的在线网络流量分类算法

针对传统流量分类方法存在模型训练速度慢、样本标记成本高和难以满足分类实时性的问题,构建了一种在线的半监督流量分类算法——OSOINN-RBF。首先使用改进的自组织增量神经网络对数据进行在线增量式的无监督学习,获得代表流量数据分布的SOINN网络,SOINN中节点的权重和半径分别作为径向基网络隐藏层节点的中心和半径;径向基网络能够捕获数据中难以发现的规律性,具有良好的泛化能力和学习收敛速度;最后使用少部分标记样本调节径向基网络输出层的权重,提高径向基网络的分类性能。实验结果证明,与主流分类算法相比,OSOINN-RBF算法的分类性能都为最优,具有最小的时间开销;面对未知流量类别时,OSOINN-RBF算法相比SOINN算法的分类准确率提高了5%~7%。

再生丝素膜对转基因角膜上皮细胞表达细胞因子的影响

目的探讨再生丝素膜对转基因人角膜上皮细胞表达细胞因子的影响，以及转基因细胞修饰的再生丝索膜构建生物材料复合体的可能性。方法实验研究。兔角膜缘注射重组腺病毒载体血管内皮生长因子165（Ad-VEGF165）诱导新生血管，测量角膜新生血管生长面积，分析角膜组织血管内皮细胞生长因子免疫组织化学结果。用再生丝素膜培养角膜上皮细胞，观察细胞形态、生长曲线、Ad—VEGF165感染效率。收集再生丝素膜Ad—VEGF165转基因角膜上皮细胞培养上清，酶联免疫吸附试验法检测上清中血管内皮生长因子、血管生成素1、表皮生长因子、转化生长因子等细胞因子浓度。采用双因素方差分析基因感染和再生丝素膜材料两因素对HCECs细胞因子表达水平的比较。结果（1）角膜缘注射Ad-VEGF165后第1周、第1个月角膜新生血管面积分别为（7．60±1．12）mm^2、（12．28±2．54）mm^2，注射后第3天、第1周、第1个月角膜基质内可见血管内皮生长因子阳性表达。（2）再生丝素膜及无再生丝素膜两种培养条件，角膜上皮细胞细胞形态、生长曲线、Ad-VEGF165感染效率均无明显差异。（3）再生丝素膜培养Ad-VEGF165转基因角膜上皮细胞上清中各细胞因子浓度分别为血管内皮生长因子（721．67±66．97）ng／L、表皮生长因子（1042．67±315．81）ng／L、血管生成素1（2421．00±0．00）ng／L、转化生长因子（313．33±34．06）ng／L。无再生丝素膜Ad-VEGF165转基因角膜上皮细胞培养上清各细胞因子浓度分别为血管内皮生长因子（721．67±66．97）ng／L、表皮生长因子（860．33±315．81）ng／L、血管生成素1（1960．33±797．90）ng／L、转化生长因子（278．00±53．11）ng／L。Ad—VEGF165感染角膜上皮细胞培养上清中各细胞因子浓度均显著高于对照组，分别为血管内皮生长因子（F=168．16，P〈0．0001）、表皮生长因子（F=52．76，P〈0．0001）、血管生成素1（F=12．47，P=0．001）、转化生长因子（F=5．647，P=0．016）。再生丝素膜与无再生丝素膜两种培养条件下，血管内皮生长因子（F=0．071，P=0．793）、表皮生长因子（F=0．563，P=0．465）、血管生成素1（F=0．14，P=0．714）、转化生长因子（F=0．008，P=0．932）浓度比较差异无统计学意义。结论再生丝素膜与细胞培养板一样，Ad-VEGF165转基因角膜上皮细胞目的基因能获得高效表达，同时还使角膜上皮细胞自分泌的新生血管相关细胞因子表皮生长因子、血管生成素1、转化生长因子等获得高效表达。