树鼩独立换气笼具的设计

目的设计研究一种满足于树鼩感染性疾病动物模型实验生物安全要求的独立换气专用隔离笼具。方法根据树鼩的生物学特性、实验生物安全要求及有关实验动物笼具标准进行设计。结果该笼舍完全适用于感染性疾病实验树鼩的饲养和实验操作。结论该笼具能达到维护实验动物福利,保证实验动物质量,保障人身健康,保护环境的要求,对于使用树鼩开展人类重大传染病研究具有广泛的应用价值和市场前景。

猕猴肉瘤病毒SV40 T-ag-C基因克隆及序列分析

目的对来源于一株自然感染猕猴肉瘤病毒SV40的猴肾细胞培养物进行大T抗原C-羧基端(T-ag-C)基因克隆及核苷酸序列分析。方法采用PCR法分别从一株自然感染SV40病毒的猴肾细胞培养物和SV40776标准株接种的vero细胞培养物提取的总DNA中扩增出441bp的SV40大T抗原C-羧基端(T-ag-C)基因片段,分别将其克隆到PMD18-T载体中,转化至JM109感受态大肠杆菌细胞后,挑取阳性克隆进行测序鉴定,并对获得的目的基因核苷酸序列进行序列分析及同源性分析。结果来源于猴肾细胞培养物的SV40大T抗原片段与本实验室来源于云南野生猴群的猕猴外周血所得到的SV40大T抗原片段同源性为97.31%,与GenBank中登录号为NC_001669.1序列进行比对,同源性为96.33%;与SV40-776标准株接种的vero细胞培养物所扩增的大T抗原片段同源性为97.55%。结论对大T抗原基因克隆和序列分析是了解和掌握SV40病毒分子流行病学及其变异趋势的重要手段。

从猕猴肝脏组织扩增黄嘌呤脱氢酶／氧化酶基因片段

RT-PCR扩增猕猴黄嘌呤脱氢酶/氧化酶(XDH/XO)基因片段,为进一步开展相关研究提供实验资料。方法提取猕猴新鲜肝脏组织总RNA,用RT-PCR二步法进行XDH/XO基因片段扩增,对获得的目的片段进行序列测定,与GenBank上发表的人类(Homo sapiens)、小鼠(Mus musculus)、家鼠(Rattus norvegicus)、野猪(Sus scrofa)等物种XDH/XO基因进行该序列同源性比对分析,DNAMAN软件预测该段核苷酸的氨基酸序列,InterProScan及SWISS-MODEL工具进行XDH/XO的编码蛋白结构域及功能预测及三维结构构建。结果 RT-PCR产物电泳检测得到了与设计大小相一致的目的条带,序列测定共测到683个核苷酸,DNAMAN软件预测该段核苷酸的氨基酸序列包括了1个编码53个氨基酸的开放阅读框(ORF),通过该软件包中Multiple alignment对目的基因片段的核苷酸序列与NCBI报道的人类、小鼠、家鼠、野猪XDH/XO基因mRNA互补的cDNA核苷酸序列同源性进行同源性比较分析,结果显示所扩增得到的目的片段与人类同源性最高,为95.6%,与小鼠、家鼠、野猪的同源性分别为85.2%、84.3%、86.1%,说明获得的基因片段是猕猴的XDH/XO基因片段,且该基因在物种间具有较高的相似性。生物信息学预测该段XDH/XO编码蛋白含有醛氧化/脱氢酶的钼喋呤结合点结构域及黄嘌呤脱氢酶结构域。结论在体外成功扩增出猕猴XDH/XO基因片段,为进一步开展高尿酸血症致病机理研究,抗高尿酸血症新药研发奠定工作基础。

猴泡沫病毒SFV-1前病毒pol基因克隆及序列分析

采用nested-PCR从猕猴肾组织细胞中获得同源性较高、具有高度保守序列的、长度为465bp大小的猴泡沫病毒SFV-1的pol基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T载体中,并对其进行序列分析,分析结果表明所克隆的基因片断为猴泡沫病毒SFV-1pol基因片段,与文献中已发表的来源于灵长类动物SFV-1、SFV-1A、SFV-1B、SFV-2、SFV-mac、SFVkm的pol基因核苷酸序列进行比对,显示SFVkm1与上述病毒pol基因核苷酸同源性分别为91.06%、90.59%、90.82%、90.21%、89.41%、91.53%。对pol基因克隆和序列分析是了解和掌握SFV病毒分子流行病学及其变异趋势的重要手段,7种不同基因型的泡沫病毒的系统进化树分析显示了SFVkm1与它们之间的相互联系。