猪瘟病毒E2亚单位蛋白与集落刺激因子的融合表达及其免疫效果分析

优化了工程菌BL21-E2 A/D-GM-CSF(含有783 bp的E2 A/D-GM-CSF融合基因)的原核表达条件,结果表明诱导的最佳时间和诱导剂IPTG的最佳用量分别为4 h和0.8 mmol/L。在此基础上,大量诱导表达融合蛋白后经Ni-IDA蛋白质层析柱纯化,Western-blot鉴定纯化蛋白具有抗原活性。将融合蛋白与福氏佐剂制成亚单位疫苗后免疫试验小鼠,并与E2 A/D蛋白、猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)进行免疫效果比较,结果显示E2 A/D-GM-CSF亚单位疫苗免疫小鼠后能够产生抗猪瘟抗体,并且抗体水平明显高于E2-A/D免疫组和HCLV免疫组。研究表明GM-CSF经融合表达后对E2-A/D蛋白有显著的免疫增强作用。

冻融胚胎移植周期中桑葚胚移植的可行性分析

目的探讨影响冻融胚胎移植(FET)结局的相关因素及桑葚胚移植的可行性。方法回顾性分析2019年1月1日至2021年12月31日北部战区总医院生殖医学科3557个FET周期的临床资料。包括女方年龄、体质量指数(BMI)、移植日内膜厚度、胚胎移植数目和移植胚胎的类型。采用单因素、多因素logistic回归及诺莫预测列线图分析不同因素对于FET临床结局的影响。结果女方年龄、移植日内膜厚度、BMI、胚胎移植数目以及移植胚胎的类型均影响FET结局,其中女方年龄≤35岁组、内膜厚度>1.0 cm组、BMI 18.5~25.0 kg/m2组、移植2个胚胎组临床结局相对更好,D5囊胚(65.1%)、桑葚胚移植组(57.0%)临床妊娠率均高于卵裂胚移植组(53.4%),差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论在FET周期中,女方年龄、移植日内膜厚度、胚胎移植数目以及移植胚胎的类型均是影响FET妊娠结局的重要因素。D5囊胚最容易妊娠,临床结局最好,桑葚胚次之,但两者都明显优于D6囊胚和D3卵裂胚,在FET周期中可考虑桑葚胚进行移植。

5756例孕妇外周血胎儿游离DNA无创产前筛查结果分析

目的:探讨无创产前基因检测(non-invasive prenatal testing,NIPT)技术在胎儿染色体非整倍体疾病筛查中的应用价值。方法:选择2014年12月—2016年12月于中国人民解放军第202医院行NIPT的孕妇5 756例,NIPT高风险的孕妇建议行羊膜腔穿刺及胎儿染色体核型分析,并对检测结果进行分析。结果:5 756例孕妇中NIPT提示高风险62例,阳性率为1.08%。其中48例孕妇行染色体核型分析,确诊21-三体24例、18-三体2例、13-三体1例、性染色体异常8例,阳性预测值分别为86%、40%、25%和73%。行NIPT的孕妇中,高龄、无明确指征坚持行NIPT及血清学筛查临界风险的孕妇所占比例较高,分别为37.70%、32.35%和16.09%。超声软指标异常组NIPT阳性率高于其他组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:NIPT对21、18、13-三体和性染色体异常具有较高的检出率,对21-三体和性染色体异常具有较高的阳性预测值。NIPT被高龄、无明确指征坚持行NIPT及血清学筛查临界风险的孕妇广泛接受,可大量减少侵入性产前诊断操作,具有较好的临床应用前景。

4204例高龄孕妇的无创产前基因检测结果分析

目的探讨无创基因检测技术(NIPT)在高龄孕妇产前筛查胎儿染色体非整倍体中的应用价值。方法选取2014年12月至2018年6月在北部战区总医院进行NIPT筛查的4 204例高龄孕妇,比较同时期未做NIPT直接羊水穿刺诊断的高龄孕妇的检测结果,评估NIPT对于胎儿染色体非整倍体疾病检测的准确性及检出效率。结果 4 204例高龄孕妇中,NIPT提示胎儿染色体异常36例,其中同意羊水穿刺诊断30例,确诊阳性25例,阳性预测值为83.3%(25/30),确诊的核型中21-三体22例、18-三体3例。对于高龄孕妇,NIPT对胎儿染色体非整倍体的检出率与未行NIPT直接羊水穿刺诊断的检出率比较,差异无统计学意义(0.86%vs. 1.51%,P>0.05)。结论 NIPT筛查高龄孕妇胎儿染色体非整倍体具有较高的准确性,且对于21-三体的准确性和检出率高于18-三体和13-三体。对于拒绝行羊水穿刺的高龄孕妇可以建议选择NIPT。

无创产前基因检测筛查胎儿性染色体异常

目的探讨无创产前基因检测产前筛查胎儿性染色体异常的临床意义。方法对在我院进行无创产前基因检测的6 283例孕妇采集外周血,提取纯化胎儿游离DNA。在Bioelectron Seq 4000上利用半导体芯片技术应用碱基互补原理对所有测序信号进行分析,对测序信号分析结果显示性染色体高危的孕妇进行侵入性产前诊断。结果 6 283例患者中筛查出性染色体异常14例,筛查阳性率为0.22%。其中3例患者拒绝诊断,其余11例患者进行了核型分析。11例患者中,5例XO高危中有2例确诊为胎儿性染色体异常(其中1例确诊为XO/XXX嵌合体,另外1例确诊为XO),3例确诊为正常核型;5例XXY高危均确诊为XXY;1例XXX高危确诊为XXX。无创产前基因检测性染色体的准确率为73%(8/11)。与2011年至2014年未开展无创产前基因检测相比,2015年至2016年我院胎儿性染色体异常检出率增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论无创产前基因检测对性染色体异常的筛查准确率较高,在提高胎儿性染色体异常检出率上起到关键作用。

精子DNA碎片指数对体外受精不同助孕方式妊娠结局的影响

目的探讨男性精子DNA碎片指数(DFI)对体外受精不同助孕方式妊娠结局的影响。方法回顾性分析683对不孕夫妇新鲜移植周期的临床资料,其中体外受精(IVF)367个周期、卵胞质内单精子注射(ICSI)316个周期。将全部研究对象、IVF周期和ICSI周期分别根据DFI值分为DFI≤15%组、DFI>15%~30%组、DFI>30%组。分析DFI与精液常规、精子形态学的相关性,DFI对IVF/ICSI新鲜移植周期妊娠结局的影响。结果随着禁欲天数增加,DFI升高,但精子浓度和前向运动精子百分率均显著下降(P<0.001)。IVF周期中,DFI≤15%组、DFI>15%~30%组、DFI>30%组比较,临床妊娠率(55.5%、57.6%、71.4%)和活产率(43.5%、45.8%、42.9%)的差异无统计学意义(P>0.05)。ICSI周期中,DFI>30%组的临床妊娠率和活产率(25.0%和16.7%)均显著低于DFI≤15%组(48.5%和36.9%)、DFI>15%~30%组(51.1%和39.4%)(P<0.05)。结论精子DFI与精子浓度、前向运动精子百分率呈负相关,与禁欲天数呈正相关。DFI对不同助孕方式新鲜移植周期的妊娠结局有一定影响。

Usher综合征1型家系PCDH15基因的突变分析与产前诊断

目的针对先天性耳聋家系进行致病基因突变鉴定及产前诊断。方法应用目标基因捕获和高通量测序技术(panel)对先证者进行耳聋相关基因全外显子和相邻内含子测序筛选致病基因;应用Sanger测序和生物信息学分析对致病突变做家系验证,并针对此突变进行产前诊断。结果先证者携带PCDH15基因第27号外显子c.3490_3491insA(p.M1164Nfs*12)和第31号外显子c.4115delG(p.G1372Efs*4)复合杂合突变,分别来源于父亲和母亲。这两种移码突变未见数据库和文献收录,均导致蛋白质翻译提前终止,形成截短蛋白,根据ACMG解读规则预测为致病性突变。产前诊断结果显示,胎儿携带与先证者相同的复合杂合突变。结论确诊Usher综合征1型家系,发现PCDH15基因2个新的致病突变位点c.4115delG和c.3490_3491insA,该复合杂合突变是此家系致病的分子基础,丰富了PCDH15基因的突变谱。

45,X/47,XXX嵌合型特纳综合征经IVF-ET成功妊娠1例报道

45,X/47,XXX嵌合型特纳综合征(TS)的临床症状相比纯合型45,X常常较轻,不需要激素治疗就可有正常的身高、初潮和规律的月经周期,预后也较好,少数可自发怀孕;但后期卵巢功能出现衰竭,往往需要借助辅助生殖技术助孕。本文报道1例45,X(48)/47,XXX(8)嵌合型TS女性患者,自然妊娠胚胎停育后,未避孕未孕3年,在卵巢功能已经出现衰退的情况下经IVF-ET助孕、移植1枚第7天囊胚成功妊娠后足月分娩一健康男婴。并结合文献探讨45,X/47,XXX嵌合型TS的形成机制、性腺功能以及行辅助生殖技术助孕治疗时的诊疗指导。

胚胎移植前的阴道微生态对辅助生殖患者妊娠结局的影响

目的探讨辅助生殖治疗患者在胚胎移植前的阴道微生态对妊娠结局的影响。方法选取1420例在北部战区总医院生殖医学科经体外受精/卵胞浆内单精子注射(IVF/ICSI)治疗并接受冻融胚胎移植的不孕患者。在胚胎移植前取阴道分泌物涂片、革兰染色、显微镜镜检检查阴道微生态情况,回顾性分析阴道微生态对辅助生殖患者妊娠结局的影响。结果微生态失衡患者的HCG阳性率、临床妊娠率、胚胎种植率、流产率和早产率与微生态正常患者相比差异无统计学意义(P>0.05)。708例微生态失衡患者中,菌群正常功能下降335例、菌群抑制141例、白细胞异常127例、BV中间型52例、BV 30例、VVC 23例。BV患者的流产率与其他几种微生态失衡情况相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论微生态失衡对辅助生殖患者的妊娠率影响有限;BV患者在胚胎移植后可能有流产的风险,建议调整阴道微生态的平衡防止流产发生。

应用高通量基因捕获技术筛查Joubert综合征新突变

目的诊断Joubert综合征致病基因。方法应用高通量基因捕获技术对曾怀过Joubert综合征胎儿的夫妻进行基因筛查,并采用荧光定量PCR和Sanger测序法对疑似突变进行验证。从生物学意义、遗传学意义及临床特征吻合度三方面预测新突变的致病性。结果夫妻均为表型正常的Joubert综合征6型AHI1致病基因携带者。妻子为AHI1基因(NM-017651.4)Ex5-6del杂合突变,丈夫为AHI1基因c.1799-1802delAACA杂合突变。AHI1基因是已知的Joubert综合征致病基因,与临床症状相符。这两种突变既往未见数据库及文献收录,按照ACMG解读规则属于致病性突变。结论 AHI1基因(NM-017651.4)是该家系的致病基因,Ex5-6del和c.1799-1802delAACA是AHI1基因新的致病突变,对Joubert综合征诊断及病因筛查具有重要的临床价值。