四妙汤对类风湿关节炎大鼠维生素D系统及中性粒细胞胞外诱捕网的影响研究

背景 随着我国进入人口老龄化加速发展期,类风湿关节炎(RA)患病比例不断增加,给社会和家庭造成沉重负担。四妙汤中药物的有效成分确有改善RA的作用,但分析方剂的作用及机制缺乏相关研究。目的 观察四妙汤对胶原诱导法建立的类风湿关节炎大鼠的干预效果及其对维生素D系统及中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的影响。方法 2021年11月—2023年1月选取SD雌性大鼠70只,采用随机数字表法将大鼠分为空白组(Control组)、模型组(Model组)、甲氨蝶呤组(MTX组)、维生素D组(VD组)、四妙汤低剂量组(SMT-L组)、四妙汤中剂量组(SMT-M组)、四妙汤高剂量组(SMT-H组),每组10只。通过胶原诱导法建立滑膜型关节炎大鼠模型,于造模7 d后开始灌胃治疗。观察药物干预前后大鼠踝部肿胀程度,测量关节炎指数(AI)评分。采用免疫组化法检测滑膜组织髓过氧化物酶(MPO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达情况,检测大鼠血清中白介素6(IL-6)、25-羟基维生素D3[25(OH)D3]、NETs水平,检测关节滑膜组织24-羟基化酶(CYP24A1)、1-α羟化酶(CYP27B1)、MPO、维生素D受体(VDR)、弹性蛋白酶(NE)表达水平。结果 药物干预第第7天Control组、MTX组、VD组、SMT-L组、SMT-M组、SMT-H组踝部肿胀程度低于Model组,第14天Model组踝部肿胀程度高于Control组,SMT-M组踝部肿胀程度高于Model组,第21天Model组踝部肿胀程度高于Control组、MTX组,低于VD组、SMT-L组、SMT-M组、SMT-H组,第28天Control组、MTX组、VD组、SMT-L组、SMT-M组、SMT-H组踝部肿胀程度低于Model组(P<0.05)。第14天SMT-H组大鼠AI评分低于Model组,第21天MTX组、VD组、SMT-L组、SMT-H组AI评分低于Model组,第28天MTX组、VD组、SMT-L组、SMT-M组、SMT-H组AI评分低于Model组(P<0.05)。7组大鼠滑膜组织MPO、TNF-α表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中Model组MPO、TNF-α高于Control组,MTX组、VD组、SMT-H组MPO、TNF-α低于Model组,SMT-M组TNF-α低于Model组(P<0.05)。Model组IL-6、NETs高于Control组,25(OH)D3低于Control组;MTX组、VD组、SMT-H组IL-6、NETs低于Model组,25(OH)D3高于Model组;SMT-M组NETs低于Model组(P<0.05)。Model组CYP24A1高于Control组、MTX组、VD组、SMT-M组、SMT-H组,CYP27B1、VDR低于Control组、MTX组、VD组、SMT-M组、SMT-H组,MPO高于Control组、MTX组、VD组、SMT-L组、SMT-M组、SMT-H组,NE高于Control组、VD组、SMT-M组、SMT-H组(P<0.05)。结论 四妙汤可能通过调控维生素D系统抑制NETs的形成,进而治疗RA。

中药调节中性粒细胞治疗类风湿关节炎研究进展

类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis, RA)是以持续性反复发作的关节滑膜炎症为病理特征的慢性系统性自身免疫疾病,该病治愈率低且易反复,由于发病机制不明,临床上并无特效药。系统性自身免疫疾病是由于免疫损伤导致全身多器官损害。因此,调节机体异常的免疫反应是针对RA治疗的关键点。中性粒细胞作为人体主要的免疫细胞之一,通过分泌多种细胞因子在RA的病理过程中发挥了重要作用。近年来中药通过调节中性粒细胞活性治疗RA成为新的研究方向。

基于网络药理学及分子对接探讨四妙汤治疗类风湿关节炎的作用机制

目的:基于网络药理学及分子对接探讨四妙汤治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的潜在活性成分及可能的分子机制。方法:使用药理学数据库(TCMSP),预设生物利用度(OB) ≥ 30%,类药性(DL) ≥ 0.18,分别检索并筛选出四妙汤的有效成分及作用靶点,结合uniprot数据库确定标准化靶点的基因名称,利用GeneCard、OMIM、PharmGkb、TTD及DrugBank数据库,获取RA疾病靶点,制作RA疾病与四妙汤有效成分的相交靶点韦恩图,筛选出共同靶点,并以此为桥梁,采用CytoScape 3.9.1软件构建中药复方调控网络,通过数据库平台STRING 11.5绘制PPI网络图,运用R软件包clusterProfiler对治疗RA的核心靶点进行GO、KEGG富集分析。分子对接预测有效成分和靶点的结合活性。结果:筛选出四妙汤有效成分111种,相应基因靶点235个,RA差异基因3968个,靶点3824个。四妙汤治疗RA的潜在靶点144个,其中关键靶点为EGFR、FOS、TP53、MAPK3、STAT3等。KEGG富集分析显示关键信号通路包括AGE-RAGE、PI3k-Akt、IL-17、TNF、HIF-1等信号通路。分子对接结果显示槲皮素(quercetin)、山奈酚(kaempferol)、柚皮素(naringenin)、甘草查尔酮A (licochalcone a)、木犀草素(luteolin)等可能是四妙汤治疗RA的核心活性成分。结论:四妙汤多成分、多靶点、多通路协同机制治疗RA,和癌症相关通路、脂质与动脉粥样硬化、氧化应激、炎症信号通路、病毒感染等机制密切相关。

中性粒细胞胞外诱捕网在呼吸系统炎性疾病中的作用

中性粒细胞被称为先天免疫系统的第一反应细胞,参与感染或者损伤期间的初始早期宿主防御反应。中性粒细胞能够释放“中性粒细胞胞外陷阱”(neutrophil extracellular traps, NETs)参与防御反应,NETs是一种由脱氧核糖核酸(deoxyriboNucleic Acid, DNA)修饰的组蛋白和细胞毒性肽/蛋白质组成的胞外无膜纤维网状结构,其形成途径可分为氮氧化物(nitrogen Oxide, NOX)依赖性NETs形成及氮氧化物非依赖性NETs形成两大类。NETs是把“双刃剑”,除具有抗菌作用外,但过量聚集也会给细胞或组织造成损伤并影响呼吸系统疾病的最终转归。NETs参与慢性阻塞性肺疾病、哮喘、肺囊性纤维化、急性肺损伤等多种以气道炎症为主要特征的呼吸系统疾病过程。抑制NETs表达有助于缓解呼吸系统炎性疾病,为临床防治提供新的靶点和方法。

补肺汤对COPD大鼠模型中性粒细胞胞外诱捕网及维生素D的影响

目的:观察补肺汤对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)相关组分以及维生素D水平的影响,探究补肺汤治疗COPD的作用机制。方法:70只SD大鼠随机分为:正常对照组、模型对照组、乙酰半胱氨酸0.1 g/kg组、维生素D 3×10^(-8)g/kg组、补肺汤4.5、9、18 g/kg组,每组10只,除正常对照组外,其余各组采用脂多糖(LPS)联合烟熏法建立COPD大鼠模型。采用HE染色法对肺组织进行病理结构观察;ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、髓过氧化物酶(MPO)、25羟维生素D_(3)[25(OH)D_(3)]以及NETs含量;Western blot法和免疫组化(IHC)法检测肺组织中中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、瓜氨酸组蛋白H3(CitH3)、MPO、肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PAD4)和维生素D受体(VDR)蛋白阳性表达。结果:与正常对照组相比,模型对照组大鼠症状、体征表现较为严重,肺组织病理结构紊乱,肺泡肿大且部分肺泡膈断裂导致肺泡融合,气管周围有炎性细胞浸润并伴有增生结缔组织,血清中的TNF-α、MPO、NETs含量显著升高,25(OH)D3含量显著降低(P<0.01);肺组织中NE、CitH3、MPO、PAD4蛋白表达显著升高,VDR蛋白表达显著下降(P<0.01);与模型对照组相比,乙酰半胱氨酸0.1 g/kg组、维生素D 3×10^(-8)g/kg组以及补肺汤9、18 g/kg组大鼠症状、体征明显好转,肺组织病理损伤可见不同程度改善,血清TNF-α、MPO、NETs含量明显降低,25(OH)D3含量明显升高(P<0.05或P<0.01);肺组织中NE、CitH3、MPO、PAD4蛋白表达明显降低,VDR蛋白表达明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:补肺汤可有效减轻COPD炎症反应并改善肺损伤,其作用机制可能与调控维生素D水平从而抑制促炎因子的释放以及NETs相关蛋白表达有关。

基于“正邪”理论探讨肠道菌群的双向作用对慢性阻塞性肺疾病的影响

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是以咳嗽、咳痰和呼吸困难为主要临床表现的肺部疾病。肠道菌群及其代谢产物直接或间接参与以COPD为主的肺部疾病中宿主的免疫调节及炎症反应,与COPD的发生发展密切相关。中医正邪理论关于疾病进展与现代医学中肠道菌群失衡致病的观点相呼应,肠道菌群的失调代表着人体正虚邪实变化,不同菌群及其代谢产物的双向作用也会影响正邪平衡的变化。本文基于中医正邪理论联系现代医学观念讨论肠道菌群对COPD的作用影响,以期为中医理论的现代化提供更加科学客观的支持,同时也为中西医防治COPD提供新的思路与方法。