从历史的观点谈我国医学遗传学的出路

通过对医学遗传学的发展史进行回顾,可知医学遗传学是一门临床学科,临床遗传学是它的临床部分。它的飞速发展是由于基础学科与临床遗传工作的密切互动。不幸的是,在我国,临床遗传工作没有受到应有的重视。迄今,医学遗传学及其临床部分还不是一门医学专业。这种情况与发达国家相距甚远。目前应立即确认医学遗传学及其临床部分是一门医学专业,并在有条件的大医院内,积极推动临床遗传学服务工作。

中国人经典型苯丙酮尿症(PKU)突变基因的鉴定与产前诊断

经典型苯丙酮尿症(PKU)是由于苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因突变导致,患儿有严重智力低下等表现。

反向遗传学

20世纪80年代,重组DNA技术取得了飞速的发展,人们对遗传性疾病的认识取得了突破性的进展。许多遗传病已在基因DNA水平上确定了其突变部位与性质。今后必然会发现越来越多的遗传病的突变致病基因(也就是正常基因的突变等位基因)。这必将为遗传病的防治提供崭新的途径。

中国广西、广东、四川三省区β-地中海贫血基因突变类型及产前基因诊断研究

本文采用聚合酶链反应(PCR)技术及特异寡核苷酸探针斑点杂交,分析研究广西、广东、四川三省区95例β-地中海贫血患者150 条染色体的基因突变。发现发生率最高的前两种突变各有不同。广西的是编码子41-42框架位移与17(A→T)突变。广东的是编码子41-42框架位移与IVS-Ⅱ-654突变,四川的则是17与41-42(17稍高于41-42)。-29位突变在四川也很常见,但广东、广西不多。-30位的T→C突变,IVS-Ⅰ-1的G→T以及IVS-Ⅰ-5的G→C三种突变,在本研究的病例中没有发现。并在此基础上完成了14例β-地中海贫血病危胎儿的产前基因诊断。

成人型多囊肾病的基因诊断—APKD基因与α珠蛋白基因3’HVR的连锁分析

成人型多囊肾病(adult polycystic kidney disease,APKD)是一种常染色体显性遗传病,临床并不罕见,欧美发病率为1/1000,占慢性肾功能衰竭的9％;我国尚无确切统计.近年来随着B型超声在医学领域中的广泛应用,该病的检出率有所提高.由于APKD症状出现较晚.临床确诊为该病时患者往往已将其致病基因遗传给下一代,因此症状前基因诊断及产前诊断是控制本病的有效措施.1985年Reeders等报道,成人型多囊肾病基因与位于16号染色体短臂上的α珠蛋白基因簇下游(3’端)8 kb处的一高变区(The 3’hypervariable region,3’HVR)具有紧密连锁关系,其重组率为5％;用3’HVR为探针对APKD家系基因组PvuⅡ片段进行RFLP(限制性片段长度多态性)连锁分析,可成功地用于产前诊断.本文首次报道国内5个APKD家系及正常人RFLP分析结果.

5p缺失综合征的表型分类及各相关区域的细胞遗传图

目的将５号染色体短臂缺失（５ｐ缺失）综合征的表型进行分类并分别在染色体上进行区域定位。方法采用常规染色体显带和高分辨显带法，对１０６例患者及他们中大多数的父母和同胞进行了细胞遗传学分析，并结合患者的临床诊断资料进行分析。结果将５ｐ缺失综合征的表型分为８类，并将各个类型分别定位在５号染色体的相关区域。结论提出了“５ｐ缺失综合征”的概念与定义，为５ｐ缺失综合征的临床诊断、细胞遗传学以及表型相关基因的定位克隆等方面进一步的研究提供参考。

蛋白激酶Cξ亚型基因内SNP的连锁不平衡分析

目的对中国北方汉族人群2型糖尿病候选易感基因蛋白激酶Cξ亚型(PRKCZ)内的单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphismSNP)标记进行群体相关分析及连锁不平衡linkagedisequilibriumLD分析,寻找疾病相关单体型。方法通过生物信息学方法在公共SNP数据库中查找PRKCZ基因中的SNP位点,用单碱基延伸反应(singlebaseextensionSBE)法对北方汉族散发2型糖尿病患者173例及对照组152例进行分型及病例-对照关联分析和LD分析,构建SNP单体型区段(haplotypeblock)。结果PRKCZ基因中有多个SNP位点与疾病相关,它们在病例组和对照组构成不同的haplotypeblock结构。由5个SNP位点组成的单体型频率在两组人群间存在显著差异。结论PRKCZ基因内由5个SNP位点组成的单体型可能和中国北方汉族人2型糖尿病相关,进一步从统计学角度证实了PRKCZ基因为该人群疾病易感基因。

中国人D13S26位点的多态性及其在Wilson's病家系中的连锁分析

D13S26位点位于13q21.1～q21.2,与Wilson病基因位点相距约3.8分摩(centimor-gan,cm).中国人D13S26位点的多态等位片段与白种人相同,但各等位片段的频率两者差异明显,中国人HphI酶切点的多态信息最高,杂合率约0.5。应用D13S26位点对3个Wilson病家系进行连锁分析,证实D13S26/HphI可用于Wilson病的症状前诊断。

人体肝癌细胞株(7402)的细胞同步化和中期染色体分离方法

用人体肝癌细胞株(7402)和中国地鼠肺细胞系(CH-CL)的细胞建立了同步化方法:7402细胞在指数生长时,加入秋水仙胺处理后,用机械摇晃法收集中期细胞。或者在传代培养的7402细胞中加入TdR的DNA合成抑制剂,培养24小时后更换新的培养液解除细胞的抑制。同上加入秋水仙胺使细胞停止在分裂中期。这两种方法均可获得85~96%的中期细胞。此外,按上述方法加入秋水仙胺处理细胞并结合机械摇晃法,同样可收获70~90%的同步的中期细胞。染色体分离方法:按上述同步化收集的中期细胞,用Hanks液洗涤,TM低渗液处理,离心;去上清液,加入TMS缓冲液与细胞沉淀混匀,转入注射器或研磨器内,吸打或研磨细胞,使细胞膜破裂释放出染色体,再离心,收集上清液,在沉淀中再加入TMS缓冲液,低速离心,再收集上清液。这样反复离心,收集的上清液汇集于大离心管内,再离心,去上清液,加入TMS液混匀,低速离心,收集上清液。如此反复,就可获得纯度高的中期染色体。最后比较了两种同步化方法的优劣,并讨论了分离中期染色体的各种因素。

DMD/BMD 基因诊断的新体系—Amp-FLP 单体型连锁分析

应用同位素掺入的多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增抗肌萎缩蛋白(dystrophin)基因内含子44、45、49、50中的CA重复序列,在聚丙烯酰胺凝胶电泳后放射自显影检测扩增产物。中国人在这4个位点均具有长度多态性:各位点等位片段数目分别为9、7、11、4,多态性信息含量(PIC)分别为0.872、0.772、0.870、0.710。应用这4个位点及先前报道的5‘CA及3‘CA进行了非缺失型DMD家系的单体型连锁分析及产前基因诊断,并用此方法检出了1例缺失。由此建立了以PCR为基础的DMD/BMD基因诊断新体系—Amp-FLP(扩增片段长度多态性连锁分析),此方法简便快速、灵敏高效,使缺失型与非缺失型DMD/BMD的基因诊断连贯性一次完成,有效地提高了DMD/BMD基因诊断的效率和成功率。

肝豆状核变性的基因诊断

应用ｐＣＲ１３２４探针（Ｄ１３Ｓ３１）检测了中国人中ＴａｑⅠ和ＰｖｕⅡ位点的多态性、多态片段及频率，分别为：ＴａｑⅠ位点，４．２ｋｂ（０．６０）／６．５ｋｂ（０．４０）（ＰＩＣ０．３６）；ＰｖｕⅡ位点，４．６ｋｂ（０．６４）／６．５ｋｂ（０．３６）（ＰＩＣ０．３５）；与白种人相似。由此二位点组成４种单体型，频率分别为０．２６、０．３４、０．１５和０．２５，ＰＩＣ为０．７２。应用此二位点及ＲＢ／ＸｂａⅠ和Ｄ１３Ｓ２６／ＨｐｈⅠ位点对北方地区２０个肝豆状核变性家系进行ＲＦＬＰ单体型连锁分析，确定了相关个体的基因型。

蛋白激酶Cξ亚型基因内SNP功能分析

目的对中国北方汉族人群2型糖尿病易感基因蛋白激酶Cξ亚型(PRKCZ)基因内的5个单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphismSNP)标记在疾病发生中的作用进行分析。方法通过生物信息学比对及报告基因活性测定等方法分析PRKCZ基因内5个SNP位点对基因表达的影响。结果PRKCZ基因中rs427811和rs809912位点两种等位基因重组质粒报告基因活性存在明显差异,提示这两个位点可能影响PRKCZ基因表达。结论PRKCZ基因中两个SNP位点可能通过影响基因的表达水平而在中国人2型糖尿病发生中发挥作用。

中国人苯丙氨酸羟化酶基因的一个新的切接位点突变的鉴定

本文鉴定了苯丙氨酸羟化酶基因３５５位密码子上的一个新的错义突变Ｑ３５５Ｈ，此突变导致谷氨酰胺变成了组氨酸。此突变位点恰位于外显子１０和内含子１１的交界处，因此将引起ｍＲＮＡ形成过程中的剪接错误而产生异常的ｍＲＮＡ。

棉酚经加鼠肝S-9组份前、后诱发人体淋巴细胞SCE频率的研究

选择6例健康人(其中3例吸烟、3例无吸烟嗜好)为对象,研究棉酚诱发淋巴细胞SCE频率的影响。实验分为加或不加S-9的0.5,1,3,5,7μg/ml 5个棉酚剂量组,比较吸烟者与不吸烟者的各棉酚剂量组,诱发体外人体外周血淋巴细胞SCE频率的差异。结果表明除例2的1μg/ml,例3的1,7μg/ml等个别棉酚组SCE频率与各自的对照组比较,显示有统计学意义的改变(P<0.05)外,3例大部棉酚组的SCE频率变化,均无统计学意义(P>0.05)。用相同方法,改用二甲基亚砜作溶剂,对上述3例重复实验的结果,亦无显著差异(P>0.05)。有吸烟嗜好的3例正常人中,加S-9的各棉酚组SCE频率,差异非常显著(P<0.001)。不加S-9的各棉酚组,除少数棉酚组SCE频率有明显升高(P<0.001)外,大多数棉酚组SCE频率虽有变化,但无统计学意义的改变(P>0.05)。分析上述结果,棉酚对正常人无诱变作用。吸烟者3例,其SCE频率升高可能与人吸入烟凝结物中的苯并芘等致癌物与S-9相互作用形成环氧化物有关。

Duchenne型肌营养不良携带者检测方法的研究

对来自北方6省市的21名CMD肯定携带者、24名可能携带者及13名DMD患儿血清CK、LDH及Mb进行联合测定,建立Fisher判别方程,并与RFLP连锁分析进行对比研究。结果表明:三种血清酶联合测定,Fisher判别有较高的临床应用价值,值得推广;RFLP连锁分析结果准确,二者联合,效果更佳。

粘多糖贮积症Ⅵ型的病例诊断与产前诊断

建立了微量测定芳基硫酸酯酶Ｂ活性的方法。对二例粘多糖贮积症Ⅵ型进行病例诊断，并对其中一个家系的高危孕妇于孕中期进行产前诊断，结果判断胎儿正常，婴儿出生后验证正常。

甲基丙二酸尿症一例报告(简报)

甲基丙二酸尿症为最常见的先天性有机酸血症,因甲基丙二酸代谢障碍所致。本文报告一例患儿为第5胎,足月顺产。生后一般状况良好,第3天精神萎靡、吃奶少。次日,面色青、反应极差,血气分析发现严重代谢性酸中毒转入我院。其母曾妊娠5次,除第二胎流产外,其他三胎均于生后3～4天出现昏睡、呼吸困难或伴抽风,于生后第5天死亡。体检:体温35.6℃,脉搏130次/min,呼吸60次/min。足月儿外貌、反应极差,呼吸不规则有双吸气,口周绀,肌张力低,拥抱反射、吸吮反射、握持反射均未引出。心、

中国地鼠(Cricetulus griseus)染色体的三种带型

中国地鼠是产于我国北方的应用广泛的实验动物,早年由我国学者发现它对黑热病(LD小体)敏感^([1,2])。由此引起人们对这种动物的兴趣并试图进行人工繁殖^([3])。后来Yerganian^([4])花了较长时间把这种动物繁殖成纯系。伴随组织培养技术的发展,发现这种动物有染色体数少,细胞株易于获得,增殖传代快,二倍体细胞株稳定等优点,而被细胞遗传学和细胞生物学工作者广为利用。在六十年代初Bender和Gooch^([5])用这种动物进行了放射线与染色体畸变效应的研究,Hampar和Ellison^([6])用单纯疱疹病毒感染这种动物,研究了染色体的畸变。

PAH基因内一个A／C多态性位点的分析

在苯丙氨酸羟化酶基因ＩＶＳ３的３＇端－１１位有一个Ａ／Ｃ多态性位点，应用ＳＳＣＰ分析可进行简便检测。Ａ等位基因的频率为０．６５６，Ｃ等位基因的频率为０．３４４，此位点的多态性信息含量（ＰＩＣ）为０．３５１。Ａ／Ｃ位点与同一内含子中的ＳＴＲ位点间没有连锁不平衡性，联合应用这两个多态性位点进行单体型连锁分析，对ＰＫＵ家系进行产前基因诊断的诊断率可达７５％。

Wilson病基因区域cosmid克隆的分离（论著摘要）

Ｗｉｌｓｏｎ病基因区域ｃｏｓｍｉｄ克隆的分离（论著摘要）谢久永，刘国仰，黄尚志，杨焕明，方炳良，罗会元（中国医学科学院，中国协和医科大学，北京基础医学研究所，北京１００００５）Ｗｉｌｓｏｎ病（ＷＤ）是由铜代谢障碍所致的常染色体隐性遗传病。致病基因的分...