琥珀散对人MenSCs植入式子宫内膜异位症裸鼠异位病灶及Beclin1、ZEB1表达的影响

目的探究琥珀散对人经血源间充质干细胞(MenSCs)植入式子宫内膜异位症(EMT)裸鼠的异位病灶及Bcl-2同源结构域蛋白抗体(Beclin1)、锌指E盒同源结合蛋白1(ZEB1)表达的影响。方法将裸鼠随机分为对照组、模型组、地诺孕素(0.001 g·kg^(-1))组和琥珀散(29 g·kg^(-1))组,每组10只。从EMT患者及健康女性的月经血中提取MenSCs,并借助成脂、成骨诱导分化鉴定其干细胞属性。将EMT MenSCs注射至裸鼠腹部皮下,制备EMT裸鼠模型,对照组植入正常人MenSCs。至第7天每组随机抽取1只裸鼠,开腹观察异位病灶生长情况,并借助HE染色和人类白细胞抗原A(HLAA)免疫荧光法评价模型。自造模成功连续给药21 d,末次给药后第2日取材,观测EMT异位病灶体积及血管分布;切取异位病灶组织,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blotting、免疫组织化学及免疫荧光技术分别测定组织中Beclin1与ZEB1在mRNA及蛋白水平的表达。结果EMT源及正常MenSCs为长梭形,呈辐射状向周边集落扩散,且经成脂、成骨诱导分化后均有脂滴、钙结节形成。造模7 d后,对照组未见异位病灶形成,其余各组均有囊泡样病灶形成,且周围血管形成丰富,病理切片均可见子宫内膜腺体和间质,HLAA均阳性表达。与模型组比较,琥珀散能显著缩小EMT裸鼠异位病灶体积(P<0.001),改善周围血管分布。在mRNA水平,与模型组比较,地诺孕素组和琥珀散组ZEB1表达显著降低(P<0.001),Beclin1表达显著升高(P<0.001)。在蛋白水平,与模型组比较,Westernblotting结果显示,地诺孕素组和琥珀散组ZEB1表达显著降低(P<0.05),Beclin1表达显著升高(P<0.01、0.001);免疫组化结果显示,琥珀散组Beclin1大量分布在异位内膜、腺腔以及腺上皮细胞与间质细胞的胞核及胞浆中,Beclin1表达显著增加(P<0.01);免疫荧光结果显示,琥珀散组ZEB1蛋白在异位内膜、腺腔、腺上皮细胞及周围间质细胞的胞核与胞浆中的分布均明显减少,地诺孕素组、琥珀散组ZEB1蛋白表达阳性率显著降低(P<0.001)。结论琥珀散可能通过上调Beclin1、下调ZEB1表达,缩小EMT裸鼠异位病灶,改善周围血管分布。

琥珀散通过LncRNA MALAT1/miR-142-3p促进自噬缩小子宫内膜异位症裸鼠异位病灶的机制

目的:观察琥珀散对子宫内膜异位症(EMT)裸鼠异位病灶的干预作用,并从LncRNA MALAT1/miR-142-3p介导自噬研究其作用机制。方法:将30只7周龄雌性免疫缺陷小鼠随机分为模型组、琥珀散组(29 g/kg)与地诺孕素组(0.001 g/kg),每组10只。从5例寒凝血瘀型EMT患者月经血中提取经血源间充质干细胞(MenSCs)以制备人MenSCs植入式EMT裸鼠模型。采用HE染色法及人类白细胞抗原α(HLAA)免疫荧光法评价模型。造模成功后连续给药21 d。实时荧光定量PCR和免疫印迹法测定各组异位病灶组织中LncRNA MALAT1、miR-142-3p及自噬标志分子(Beclin1和LC3Ⅱ)的表达情况。结果:造模后,3组注射区均有囊泡样组织形成,病理切片见子宫内膜腺体和间质,免疫荧光示HLAA阳性,系造模成功。与模型组比较,琥珀散组异位病灶体积显著缩小(P<0.01),LncRNA MALAT1和Beclin1的RNA水平、Beclin1和LC3Ⅱ蛋白水平均显著升高(P<0.01,P<0.05),miR-142-3p被显著抑制(P<0.01)。结论:琥珀散能明显缩小EMT裸鼠异位病灶体积,其作用机制可能是其促进LncRNA MALAT1诱骗miR-142-3p以上调Beclin1进而增强异位内膜自噬。

基于“少阳为枢”探讨国医大师王庆国治疗妇科病的学术思想

少阳为气血之枢,调节气血运行分布;少阳为经络之枢,调节阳气生发出入;少阳为脏腑之枢,调节气机升降运动。枢机不利致气虚血少、营卫失和,枢机不利致阳虚阴结、胞脉不通,枢机不利致脏腑失调、气机不畅,均为虚、积冷、结气等导致妇科疾病的重要原因。王庆国教授认为妇人之病究其根本为少阳枢机不利所致,治疗当以调少阳之枢为要,调少阳之枢,首当调和营卫、重视生发阳气、强调肝脾同调,在此基础上,灵活运用柴胡剂治疗妇科月经病、带下病、杂病等疗效显著。