雷公藤甲素调控nSMase2-Cer鞘脂代谢信号通路发挥抗胰腺癌的作用及其相关机制研究

目的探究雷公藤甲素抑制胰腺癌细胞系PANC-1细胞增殖的作用机制,揭示其抗胰腺癌的作用与神经鞘脂之间的相互联系。方法用不同浓度梯度的雷公藤甲素处理胰腺癌PANC-1细胞后,检测细胞增殖、迁移能力及凋亡情况。通过PCR array实验筛选给药后PANC-1细胞上有变化的神经鞘脂基因,并通过q-PCR和Western blot实验验证所筛选基因的转录翻译情况。构建PANC-1细胞相关基因的过表达模型并进行细胞功能性实验验证。Western blot实验检测瞬时转染的PANC-1细胞给药前后及不同药物浓度下nSMase2蛋白水平的变化及Caspase-3蛋白水平的变化。免疫荧光实验检测不同药物梯度和过表达模型下神经酰胺(Cer)含量的变化。建立BALB/C裸鼠PANC-1皮下成瘤模型,在体内验证雷公藤甲素对裸鼠肿瘤大小的影响。提取肿瘤组织进行Western blot实验,肝组织进行HE染色实验。结果雷公藤甲素呈浓度梯度抑制PANC-1细胞的增殖、迁移能力并促进细胞凋亡。神经鞘脂相关基因SMPD3与雷公藤甲素抑制PANC-1细胞活力相关性最强,且雷公藤甲素可下调其在PANC-1细胞中的表达。过表达SMPD3后PANC-1细胞增殖、迁移能力明显增强,细胞凋亡减少。雷公藤甲素可促使PANC-1细胞内Cer含量的升高,而过表达SMPD3后是可以降低PANC-1细胞内Cer的含量,此外,雷公藤甲素还能够促进PANC-1细胞Caspase家族蛋白Caspase-3表达的上调。体内实验表明雷公藤甲素能够下调SMPD3蛋白的表达,促进Caspase-3活化进而促进肿瘤发生细胞凋亡,发挥抑制裸鼠体内肿瘤生长的作用。结论体内外实验均表明雷公藤甲素通过下调SMPD3的表达,影响nSMase2-Cer信号通路抑制PANC-1细胞的生长。