蛋白质组学研究方法及其在生物医学中的应用

蛋白质组学方法发展迅速 ,并日见成熟。蛋白芯片技术、双向电泳 -质谱技术、多维液相色谱 -质谱技术等 ,已被广泛应用于寻找疾病相关的差异表达蛋白质、疾病相关的生物标记分子以及药物靶点用于临床诊断、药物设计、以及疾病发病机理的研究等。本文对上述研究进展作了简要综述。

单链抗体2F3表达条件的优化及其提纯和性质研究

将构建好的单链抗体 2F3表达载体pTMF2F3ScFv转化到大肠杆菌BL2 1(DE3)。先挑选出表达量高的单克隆 ,然后让其在 37℃进行表达 ,并将表达时的培养条件进行优化。实验结果表明 :最佳诱导条件为开始诱导时的菌体密度OD590nm =1.0～ 1.8,所加异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)的浓度为 0 3～ 0 5mmol L ,诱导时间 7h ,优化后目的蛋白表达量占菌体总蛋白的 2 0 % ,并用发酵罐成功地进行了扩大培养 ,筛选了洗涤包涵体的最佳条件。采用两步法对包涵体复性进行了研究 ,用Westernblotting及ELISA法检测了所表达的单链抗体及其生物活性 。

具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的含硒单链抗体酶制备

利用RT PCR从分泌有谷胱甘肽结合部位的单克隆抗体杂交瘤细胞株 2F3中 ,扩增出单抗重链可变区和轻链可变区基因 .经DNA测序后 ,用Linker(Gly4 Ser1) 3 构建成单链抗体 (scFv)表达载体pTMF scFv ,将重组质粒pTMF scFv转化到大肠杆菌BL2 1(DE3) ,实现了单链抗体的高效表达 .表达的单链抗体占菌体总蛋白 2 5%～ 30 % .该重组蛋白以包涵体形式存在 ,分子量为 30kD .经过金属螯合亲和层析纯化、复性和凝胶过滤纯化 ,得到电泳均一的单链抗体 .再经化学诱变 ,得到含硒单链抗体酶 ,其谷胱甘肽过氧化物酶活性为 330 0U μmol.

犯罪行为和犯罪心理痕迹分析

犯罪心理痕迹是心理活动过程和个性特征的综合反映,是由于犯罪行为作用而引起。利用犯罪现场的时间和空间能揭示犯罪心理的现象和状态,分析作案人在作案时的心理活动过程。利用犯罪心理痕迹,是一种逆向地从作案人行为活动入手分析案情、刻画案犯特点、追溯犯罪行为人的方法。

运用思维导图促进高中英语阅读教学的有效性研究

近年来,随着我国经济发展的不断加速,人们的思想意识不断提升,对教育的重视度也越来越高。在新的时代背景下,传统教育教学模式已经难以匹配人们的需求,采取有效措施,改变教学现状已经成为＂当务之急＂。

应用蛋白质工程法制备含硒单链抗体酶

目的 制备一种具有谷胱甘肽过氧化物酬（ＧＰＸ）活性的含硒单链抗体酶。方法 利用ＲＴ－ＰＣＲ方 法从杂交瘤细胞株２Ｆ３中扩增出单克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因。经ＤＮＡ序列测定后，构建成表达载体 ｐＴＭＦ－ｓｃＦｖ，经过金属螯合层析纯化、复性和化学诱变，得到含硒单链抗体酶。结果 将重组质粒ｐＴＭＦ－ｓｃＦｖ分别转 化入大肠杆菌ＪＭ１０９（ＤＥ３）、ＢＬ２１（ＤＥ３）和 ＢＬ２１（ｃｏｄｅｎ ｐｌｕｓ），表达目的蛋白分别占菌体总蛋白的５％－１０％、１５％－ ２０％和 ２５％－３０％。该重组蛋白以包涵体形式存在，相对分子质量为３００００。其 ＧＰＸ活性为３４００Ｕ／μｍｏｌ，接近天 然酌水平。结论 为工业化制备含硒单链抗体酶奠定基础。

一个新葡萄糖淀粉酶基因的克隆与表达

根据已报道的米根霉葡萄糖淀粉酶基因序列,通过PCR方法,从天然少根根霉的总DNA中克隆到含有四个内含子的葡萄糖淀粉酶基因。通过设计引物并采取重叠PCR方法删除内含子,获得了新的少根根霉葡萄糖淀粉酶(Rhizopus arrhizu glucoamylase,RaGA)cDNA序列(Accession number:DQ903853)。该基因在毕赤酵母中成功表达,表达产物具有较高的葡萄糖淀粉酶活性。

论基层公安局的信息化警务应用——以长沙市公安局芙蓉区分局信息警务工作模式为视域

当前,传统的以属地侦查为核心的警务工作模式已远远不能适应现实斗争的需要,警力不足同人民群众对公安工作要求越来越高之间的矛盾日益突出,信息化警务作为一种积极主动型的警务模式,迅速被国内公安机关广泛接受。长沙市公安局芙蓉区分局信息化警务工作现状是众多基层公安分局的的缩影,近年来,信息化警务工作在基层取得了很大成绩,但这项工作依然存在诸多问题,需要采取积极措施加以应对。

智慧消防在防火监督业务中的应用现状与发展前景

智慧消防在防火监督业务中的应用,不仅能提高火灾预防扑救的精度和效率,而且能将消防工作和数字化、信息化、智能化等技术相结合,实现智能化管理。现从防火监督业务角度出发,重点研究智慧消防在火灾预防、火灾扑救和消防管理等方面的应用现状和未来发展趋势。

胶原涂层对3D打印种植体表面生物相容性的影响

背景:金属等惰性生物材料存在生物相容性差、组织结合力弱等问题,从而导致种植牙或骨植入物的使用效果较差。因此,如何增强惰性生物材料的生物相容性成为了近几年的研究热点。目的:对钛合金材料进行胶原覆层并评价其生物相容性。方法:以钛合金片(Ti6Al4V)为基质,Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原为覆层材料,3-氨基丙基三乙氧基硅烷(KH550)为偶联剂,对基于3D打印的钛合金片进行胶原覆层。将覆层材料用于小鼠前成骨细胞(MC-3T3-E1)培养,通过细胞培养效果评价其生物相容性,并通过细胞蛋白差异性识别比较不同类型胶原对细胞分化的影响。结果与结论:(1)当钛合金片(Φ10 cm)表面含氮量为8.41%时,Ⅰ型胶原覆层量为0.81 mg,Ⅱ型胶原覆层量为0.77 mg;(2)与空白钛合金片相比,经胶原覆层后的钛合金片细胞贴附状态更好,铺展面积更大,且细胞增殖速率更快,活性更强;(3)Ⅰ型胶原覆层材料培养的细胞多表达与基质合成有关的蛋白,而Ⅱ型胶原覆层材料培养的细胞多表达与矿化及钙盐沉积有关的蛋白;(4)结果表明,胶原覆层可提高钛合金材料的生物相容性,且不同胶原类型可影响细胞表达不同功能性蛋白。

物证检验鉴定结论在处理交通事故中的作用

以道路交通事故所具有的特点及事故处理中常见问题为基础,阐述物证检验鉴定结论在道路交通事故中的作用。

多维蛋白鉴别技术分析天蓝色链霉菌膜内侧蛋白质组

链霉菌是一类具有重要工业价值和复杂调控机制的微生物,天蓝色链霉菌是这个属的模式菌。已报道天蓝色链霉菌的蛋白组学的研究多采用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱相结合的方法,但由于膜蛋白疏水性较强,天然丰度较低,此法得到的膜蛋白很少。用蛋白酶K保护高pH蛋白酶K法制备链霉菌膜内侧蛋白组样品,并用多维蛋白鉴别技术进行分析,得到154个可能的膜内侧蛋白(包括膜内在蛋白和膜外周蛋白),其中含跨膜区的膜内在蛋白44个,含3个以上跨膜区的膜内在蛋白有23个。此外,还鉴定了一批膜内侧蛋白的亲水性肽段及其在膜上的拓扑位置。该结果有助于对天蓝色链霉菌的膜蛋白进行拓扑学分类和功能研究。

固化金属离子亲和层析富集磷酸化多肽方法的选择及优化

在磷酸化蛋白质组学研究中,根据是否需要对待富集样品进行甲酯化处理,可将固化金属离子亲和层析(IMAC)方法分为两类,即需要甲酯化处理的IMAC方法(ME-IMAC)和不需要甲酯化处理的IMAC方法(Non-ME-IMAC)。要实现对磷酸化多肽的有效富集和鉴定,就必须对富集方法进行选择和优化。利用基质辅助激光解析离子化串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对两种方法富集的磷酸化多肽进行了比较研究。结果表明,ME-IMAC方法容易发生样品丢失,质谱结果的分析也比较复杂,而Non-ME-IMAC方法则不仅操作简单而且富集效果理想。另外,优化了Non-ME-IMAC方法的实验条件,指出最佳的结合溶液是8%ACN/0.3%TFA,最佳的洗脱溶液是0.1mol/L EDTA(pH值8.0),从而建立了一套完整而简单有效的磷酸化多肽富集方法。

高压聚乙烯密相气力输送自控系统的优化改造

针对高压聚乙烯装置密相输送单元管线振动过大,以及下料罐料栓冲击引起的各类故障现象,从更换现场设备、优化程序和优化AMS参数3个方面进行技术改造,提高粒料在管线中的输送速率,并增大输送管线内的空气流量,减小了管线中的压降。系统投运情况表明,本次改造提高了输送系统的稳定性,缓解了输送管线的振动,消除了生产安全隐患。

浅议警犬在治安事件处置中人、犬的双向适应性训练

一、使用警犬处置治安事件的优势警犬作为公安机关执行任务的一种特殊工具,具有发达的高级神经反射活动机能,有灵敏的嗅、视、听等感觉器官和良好的敏捷运动能力,有的犬种还具备很强的凶猛性、灵活性和奔跑能力等警用素质。相对于其他警械警具而言,警犬具有强震慑性、非致命性的特点。用于处置治安事件的警犬需具备凶猛强壮的外形,稳定的服从性,持续充沛的体能。能通过稳定的吠叫、扑咬、撞击等方式处置暴力案件、治安事件等。

论边疆民族地区邪教的成因

边疆民族地区邪教的产生和发展,不仅有其历史缘由,而且也存在着现实原因,各种复杂因素使边疆民族地区邪教的产生和发展具有了自身的特殊性。分析和认识这些原因有利于当前边疆民族地区有效防范和打击邪教,有利于边疆的稳定与安全。