甘氨酸及二甲基亚砜对冷冻保存兔精液活率的影响

在筛选出稀释液配方和平衡时间的基础上,探讨了不同浓度的甘氨酸及DMSO对冻融后兔精子活率的影响。试验结果表明:(1)在同一浓度的甘氨酸(分别为7.0mg.mL-1、7.5mg.mL-1和8.0mg.mL-1)条件下,解冻后精子活率与DMSO浓度呈负相关,各组彼此差异显著(p<0.05)。(2)当DMSO浓度为7.5℅时,不同甘氨酸浓度对精液冷冻效果差异不显著(p>0.05);当DMSO浓度为10℅时,甘氨酸浓度为7.5mg.mL-1组的解冻后精子活率49.82%最高,其次是7.0mg.mL-1组43.41%,8.0mg.mL-1组37.29%最低,且各组间差异显著(p<0.05);当DMSO浓度为12.5℅时,甘氨酸浓度7.0mg.mL-1组的解冻后精子活率26.69%显著低于7.5 mg.mL-1组和8.0mg.mL-1组(p<0.05),而7.5mg.mL-1组(32.97%)和8.0mg.mL-1组(34.64%)间无显著差异(p>0.05)。综上所述,獭兔精液冷冻保护液中添加7.5mg.mL-1甘氨酸和7.5%DMSO,可得到较好冷冻保存效果。

体外成熟培养20～22h牛卵母细胞激活及孤雌发育的研究

本研究将体外成熟培养 2 0～ 2 2h的牛卵母细胞 ,用Ca2 + 上升因子单一激活或组合Ca2 + 上升因子和蛋白质抑制因子激活 ,其结果单一激活的卵子激活率在 19.2 %～ 2 8.0 % ,复合激活的卵子激活率在 84 .2 %～ 86 .8%。单一激活组的卵子激活率显著高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,复合激活组的卵子激活率显著高于单一激活组 (P <0 .0 1) ,而单一激活组之间和复合激活组之间无显著差异 (P >0 .0 5 )。复合激活组的卵裂率及孤雌发育都显著高于对照组。

体外受精温度、时间及卵子质量对延边黄牛受精卵体外发育的影响

本研究探讨了体外受精温度、时间及卵子质量对延边黄牛卵母细胞体外受精后体外发育的影响。试验结果表明 ,体外受精温度为 39℃、体外受精时间 12 h时 ,卵裂率、囊胚发育率及囊胚孵化率最佳 ;卵子的质量对受精卵体外发育的影响很大。

添加β-巯基乙醇对牛体外受精胚胎体外发育的影响

在牛基础培养液中,添加50μmol/Lβ-巯基乙醇(β-ME)可显著提高牛体外受精(IVF)后胚胎的桑椹胚、囊胚率以及囊胚内细胞团数;并且以受精卵发育至4～8-细胞时期的添加效果为最佳。

卵巢保存温度、激素及体外培养时间对延边黄牛卵母细胞体外成熟的影响

本研究探讨卵巢保存温度、激素及体外培养时间对延边黄牛卵母细胞体外成熟的影响。研究结果表明 ,将卵巢分别保存在 2 5～ 2 9℃、30～ 35℃、36～ 4 0℃的生理盐水中运输时 ,卵母细胞体外成熟率分别为 5 5 .3%、70 .1%、6 0 .7% ,各组间无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ;当将卵母细胞分别培养在无激素的对照组 (TCM199+10 % FBS)、添加雌二醇 (estradiol) - 17β组、L H +雌二醇 - 17β组时 ,卵子的成熟率分别为 5 7.8%、6 4 .3%、70 .1% ,对照组与 L H+雌二醇 - 17β组差异显著 (P<0 .0 5 ) ;卵母细胞各自培养 2 2～ 2 5 h、2 6～ 30 h、31～ 34h时 ,卵子体外成熟率分别为 5 6 .3%、6 5 .4 %、6 8.4 % ,3组间无显著差异 (P>0 .0 5 )

体外培养条件对延边黄牛受精卵体外发育的影响

从延边黄牛卵巢中采集未成熟的卵母细胞进行体外成熟培养、体外受精及受精卵体外培养。结果表明 :1将卵子用 2种不同的培养液进行体外成熟培养和受精卵体外培养 ,TCM199组的卵裂率 (5 6 .3% )极显著高于 D- PBS组(33.6 % ) (P<0 .0 1) ;TCM199组的囊胚发育率和孵化率 (15 .1%、13.7% )虽高于 D- PBS组 (10 .5 %、8.7% ) ,但 2个组之间无显著差异 (P>0 .0 5 )。2以 TCM199作为基础培养液 ,分别用含激素培养液和不含激素培养液进行成熟培养和受精卵体外培养 ,添加激素组的卵裂率、囊胚发育率及囊胚孵化率 (81.2 %、17.5 %、15 .3% )高于没有添加激素的对照组 (75 .8%、12 .1%、10 .5 % ) ,但 2个组之间无显著差异 (P>0 .0 5 )。 3体外受精卵与单层颗粒细胞共培养组的卵裂率、囊胚发育率及囊胚孵化率 (78.0 %、11.5 %、9.9% )显著高于非共培养组 (6 8.1%、5 .4 %、3.6 % ) (P<0 .0 5 )。

核移植前激活受体卵子对牛核移植卵体外发育的影响

本研究探讨了核移植前对受体卵子进行激活、细胞融合开始时间及供体受精卵细胞周期调节对核移植卵体外发育的影响。其结果显示核移植前对受体卵子激活组的细胞融合率与对照组没有差异 ,但重组胚胎的卵裂率、8～ 16细胞期胚胎及囊胚的发育率比对照组明显提高 ;核移植前激活的受体卵子分别在卵子体外成熟开始的第30h和 4 5h与供体细胞进行细胞融合 ,结果 ,30h组的细胞融合率和卵裂率与 4 5h组没有差异 ,但发育到 8～ 16细胞期及囊胚的发育率均比 4 5h的高 ;将供体受精卵用诺考达唑 (Nocodazole)处理后 ,进行核移植的结果 ,处理组的细胞融合率、卵裂率、发育到 8～

小鼠未成熟卵母细胞OPS法冷冻保存技术的研究

试验用OPS法对小鼠未成熟卵母细胞进行玻璃化冷冻保存研究,并对解冻后小鼠未成熟卵母细胞的成熟情况进行观察。结果表明:小鼠未成熟卵母细胞在10%EG、10%DMSO前处理后,在EFS30、EFS40、EDFS30和EDFS40中平衡15～45s进行冷冻保存,使卵母细胞解冻后的形态正常率最高达92.4%,与对照组无显著差异(P>0.05),成熟率达40.5%。

应用巢式PCR法鉴定牛早期胚胎性别

为获得一种高效的牛胚胎性别鉴定方法,采用高特异性和灵敏度的巢式PCR进行扩增。结果表明:公牛可以扩增出187bp的SRY基因片段和255bp的β-珠蛋白基因片段,母牛只能扩增出255bp的β-珠蛋白基因片段。巢式PCR只需3～8个细胞就可以观察到扩增结果,而常规PCR则需要较多的细胞,所以牛胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。

诺考达唑对体外小鼠卵裂球M期阻抑及后续发育的影响

为获得更多具有后续发育能力的小鼠M期卵裂球,以测定细胞间期和M期的重编程因子表达情况,用不同浓度的诺考达唑(Nocodazole)对小鼠1-cell胚胎及2-cell胚胎进行了不同时间的处理,筛选出了控制卵裂球停留在M期的最佳处理浓度及处理时间。结果表明:0.10,0.15和0.20μg·m L-1的诺考达唑可有效且可逆地使小鼠1-cell胚胎或2-cell胚胎阻抑在M期;在诺考达唑去除后的1~2h,胚胎细胞重新恢复有丝分裂,完成卵裂;0.10μg·m L-1的诺考达唑处理12h可很好地将1-cell胚胎阻抑于M期,且对胚胎的后续发育影响不大;0.20μg·m L-1的诺考达唑处理18h对2-cell胚胎阻抑效果最好,而解除诺考达唑处理后3h内的胚胎发育能力略低于0.15μg·m L-1处理组,但差异不显著(p】0.05)。由于两组(0.15μg·m L-1组和0.20μg·m L-1组)对2-cell胚胎阻抑效果及发育能力两方面均差异不显著(p】0.05),因此选用0.15μg·m L-1的诺考达唑处理2-cell胚胎。用0.10μg·m L-1和0.15μg·m L-1的诺考达唑分别对小鼠的1-cell胚胎及2-cell胚胎处理12h和18h,可获得更多有发育能力的小鼠M期卵裂球。

延边黄牛卵母细胞激活及孤雌发育

探讨了提高延边黄牛卵母细胞激活率及孤雌发育率的适宜方法。从屠宰场回收的卵巢中采集未成熟的卵母细胞 ,置于体外成熟培养液中 ,体外成熟培养 2 0～ 2 2 h。将体外成熟的卵母细胞 ,分别用不同浓度的乙醇或 Ca- ionophore进行单一激活处理。试验结果表明 ,用 5 %、7%、9%、1 1 %及 1 3 %乙醇激活卵子 ,激活率分别为 4 1 .2 %、4 7.2 %、5 3 .1 %、3 9.7%及 2 3 .4 %,7%和 9%乙醇处理组的卵子激活率显著高于其他组 (P<0 .0 5 ) ,但二者之间差异不显著 (P>0 .0 5 )。用 2 .5、5 .0、7.5μm ol/L Ca- ionophore激活卵子 ,激活率分别为 2 9.3 %、5 1 .8%、4 5 .4 %,5 .0、7.5μmol/L Ca- ionophore处理组的卵子激活率显著高于 2 .5 μmol/L 组 (P<0 .0 5 )。用 9%乙醇或 5 .0 μm ol/L Ca- ionophore分别与 1 0 m g/Lcyclohexim ide(CH)组合激活卵子 ,卵子的激活率分别为 77.3 %和 76 .8%,比单独用 9%乙醇 (48.8%)或 5 .0μmol/LCa- ionophore(43 .2 %)的激活率显著提高 (P<0 .0 5 ) ,二者卵子的卵裂率和发育到

核移植前激活牛受体卵子对供体核形态变化的影响

研究以牛体外受精卵作为供体、体外成熟卵子作为受体进行核移植。核移植后根据受体卵子的激活与否及细胞融合时间不同,分别观察了供体核在受体卵子内变化。

高等农业院校动物科学教育教学改革的思考

针对我国高等农业院校现行的动物科学专业的教学现状,探讨了我国高等动物科学教育教学改革的必要性,同时从教学内容、教学方法、考试制度、教材建设和开展双语教学等方面,提出了我国高等动物科学教育教学改革的一些新思路。

利用Red同源重组系统进行牛β酪蛋白基因敲除

利用EL350基因工程菌进行同源重组,成功进行基因敲除已有报道,但利用该系统进行乳腺生物反应器质粒构建的研究却未见报道。实验采用含有完整的牛β酪蛋白基因的CSN2质粒作为基因打靶的载体,设计不同的同源臂,成功地敲除了β酪蛋白基因的编码区。并且同时利用同源重组技术对敲除不同大小的DNA片段的效率进行了研究。为进一步利用CSN2质粒两端的调控序列,插入新的基因,研究其表达功能,或者进行乳腺生物反应器的研究奠定了基础。

大通牦牛生长激素基因和Κ-酪蛋白基因的PCR—RFLP研究

利用PCR-RFLP技术检测了大通牦牛生长激素(growth hormone,GH)基因和Κ-酪蛋白(Κ- casein,Κ-CN)基因部分序列的遗传多态性,结果表明:大通牦牛群体中被检测的两个位点均存在遗传多态 性。GH基因PCR—RFLP位点等位基因A和B的基因频率分别为0．1755和0．8255;(?)-CN基因PCR-RFLP 位点等位基因A和B的基因频率分别为0．1117和0．8 883。GH基因和(?)-CN基因PCR-RFLP位点的基因 型分布均极显著偏离Hardy—Weinberg平衡定理(P<0．01)。大通牦牛群体内平均基因一致度和基因多样度分 别为0．7561和0．2439。

应用微卫星DNA标记进行边鸡群体遗传多样性分析

目前,微卫星DNA标记已被广泛应用于动物遗传育种研究中,可有效地进行群体遗传多样性分析,并可估算群体间的遗传距离。为了从分子水平上揭示边鸡群体的遗传结构及系统地位,利用鸡基因组中均位于常染色体上的5个微卫星DNA标记,检测了边鸡群体的遗传多样性,并以大骨鸡做了比较分析;同时,初步探讨了边鸡在国内几个地方鸡种中的系统地位。结果表明,5个微卫星位点共检测到38个等位基因,其中ADL0146位点的等位基因数最少(5个),而ADL0136和ADL0185两个位点的等位基因数最多(9个),平均等位基因数为7.6个.边鸡群体在5个微卫星位点的平均多态信息含量、平均基因杂合度(h)和平均有效等位基因数(Ne)分别为0.667 1、0.745 7和4.044 3,边鸡群体内比大骨鸡群体有更丰富的遗传多样性;聚类分析结果显示,边鸡与大骨鸡亲缘关系最近,而与鲁西斗鸡亲缘关系相对较远。该系统聚类结果与这些地方鸡种的系统分化与选育历史是基本一致的。

林甸鸡和大骨鸡微卫星DNA标记遗传多样性的比较研究

为了从分子水平上揭示林甸鸡和大骨鸡的群体遗传结构,利用鸡基因组中5个微卫星标记,检测了林甸鸡和大骨鸡群体的遗传多样性。同时探讨了林甸鸡和大骨鸡在国内几个地方鸡种中的系统地位。结果表明,5个微卫星位点共检测到38个等位基因,其中ADL0146位点的等位基因数5个,为最少,而ADL0136和ADL0185两个位点的等位基因数9个,为最多;5个微卫星位点的平均等位基因数为7.6个。林甸鸡群体内比大骨鸡群体有更丰富的遗传多样性。聚类分析结果显示,林甸鸡和大骨鸡与边鸡、日照麻鸡及寿光鸡之间有比较密切的亲缘关系;而林甸鸡和大骨鸡与鲁西斗鸡的亲缘关系均较远。总体而言,该系统聚类结果与7个鸡种的分化与选育历史是一致的。

促卵泡素与促黄体素对猪卵母细胞体外成熟的影响(英文)

探讨了促性腺激素(FSH、LH)对猪卵母细胞体外成熟的影响,最终找到了其合理的使用剂量。在成熟液中添加LH浓度分别为1,5,10 IU/mL时,与没有添加FSH与LH的对照组(15.9%)相比,成熟率有显著提高,成熟率分别为49.1%,30.0%,36.3%。LH浓度为1 IU/mL的实验组成熟率最高,显著高于对照组(p<0.05);然后以成熟液中只添加1 IU/mL LH为对照组,实验组分别添加1,5,10 IU/mL FSH。试验结果表明:添加FSH浓度为5和10 IU/mL时其成熟率分别为40.1%,27.6%,低于对照组(49.0%)。添加FSH浓度为1 IU/mL时其成熟率(49.1%)高于对照组(49.0%),但差异不显著。两组试验同时得出,随着LH与FSH添加浓度逐渐增加,成熟率呈下降趋势。通过本试验结果得出,在体外成熟培养猪卵母细胞时,各添加1 IU/mL LH与FSH时,得到最佳的成熟效果。