ATM与辐射激活的磷酸化P53、P21蛋白的相互作用

背景与目的:ATM基因属于PI-3K激酶家族成员,其编码蛋白具有调控DNA修复过程和调整细胞周期关卡的功能。毛细血管扩张性共济失调症(ataxia-telangiectasia,AT)患者AT细胞中ATM基因的突变导致了辐射诱发的P53、P21磷酸化缺失,说明辐射激活ATM基因可调控P53、P21的磷酸化。本实验利用免疫共沉淀及Westernblot技术来研究辐射激活的ATM基因与p53的关系,并观察ATM基因是否不通过P53而直接调控P21的磷酸化。方法:利用电穿孔技术将含有ATM基因cDNA的真核表达载体pEBS7-YZ5转染到AT细胞中,用潮霉素筛选以获得稳定表达细胞株,RT-PCR检测ATMcDNA的转录以进一步验证;在ATM稳定表达的AT细胞中,利用免疫共沉淀及Westernblot技术研究ATM基因与p53基因的相互关系;以K562细胞(p53突变)为p53突变细胞模型,研究ATM是否直接磷酸化P21。结果:pEBS7-YZ5成功转进AT细胞,RT-PCR检测到ATMcDNA片段;ATM稳定表达的AT细胞株在电离辐射诱导下,P53被磷酸化,免疫共沉淀显示ATM与P53相互作用;K562细胞经60Coγ射线照射后,P21被磷酸化,ATM抗体免疫共沉淀物中检测到P21蛋白的存在。结论:细胞遭受电离辐射作用后所激活的ATM激酶,可通过磷酸化P53继而活化细胞周期检控点P21蛋白,也可在电离辐射导致DNA损伤早期直接磷酸化P21蛋白,来启动DNA修复机制。

用HPRT基因突变及CBMN研究AT细胞高辐射敏感性

研究了毛细血管扩张性共济失调症(Ataxia?telangiectasia,AT)患者皮肤的成纤维细胞系AT5BIVA(AT细胞)的高辐射敏感性。以源于正常人皮肤的成纤维细胞系GM0639(GM细胞)为对照,利用次黄嘌呤磷酸核糖转移酶基因(Hypoxanthinephospho?ribosyltransferase,hprt)位点突变分析技术及胞质分裂阻滞微核法(Cytokinesis?Blockmicronucleusmethod,CBMN),在AT细胞和GM细胞经Coγ射线0、1、2、3、4Gy60照射后,观察比较AT细胞和GM细胞之间hprt基因位点突变频率(hprtMF)、微核率(MNF)及微核细胞率(MNCF)的差异,并分别进行曲线拟合。在各剂量点,AT细胞hprt基因突变频率、微核率及微核细胞率均明显高于GM细胞,其差别具有显著性统计意义(p<0.01);AT和GM细胞hprt基因突变频率、微核率及微核细胞率均与照射剂量呈正相关,可拟合成剂量效应直线方程y=a+bx。结果表明,毛细血管扩张性共济失调症患者AT细胞辐射敏感性显著高于GM细胞,具有高辐射敏感性。

胞质分裂阻滞微核法对AT细胞高辐射敏感性的研究

目的 研究源于毛细血管扩张性共济失调症 (ataxia telangiectasia ,AT)患者皮肤的成纤维细胞系AT5BIVA(AT细胞 )的辐射敏感性。方法 本实验以源于正常人皮肤的成纤维细胞系GM0 63 9(GM细胞 )为对照 ,采用胞质分裂阻滞微核法 (Cytokinesis Blockmicronucleusmethod) ,在AT细胞和GM细胞经60 Coγ射线 0、1、2、3、4Gy照射后 ,观察比较AT细胞和GM细胞之间微核率及微核细胞率的差异 ,并分别进行曲线拟合。结果 在 1、2、3、4Gy剂量照射下 ,AT细胞微核率及微核细胞率均明显高于GM细胞 ,其差异有非常显著性 (P <0 0 1) ,并且两者微核率及微核细胞率均与剂量呈正相关 ,均可拟合成剂量效应直线方程y =a +bx ,微核率及微核细胞率直线回归方程斜率AT细胞明显大于GM细胞 (P <0 0 1)。结论 辐射敏感性AT细胞显著高于GM细胞 ,AT患者AT细胞具有高辐射敏感性。

常规染色体畸变分析法对AT细胞高辐射敏感性的研究

目的 研究毛细血管扩张性共济失调症(ataxia-telangiectasia,AT)患者皮肤的成纤维细胞系AT5BIVA(AT细胞)的高辐射敏感性。方法 以源于正常人皮肤的成纤维细胞系GM0639(GM细胞)为对照,用常规染色体畸变分析法,在AT细胞和GM细咆经60COγ射线0、1、2、3、4 Gy照射后,观察比较AT细胞和GM细胞之间染色体畸变率(CAF)的差异,并分别进行曲线拟合。结果 在0、1、2、3、4 Gy剂量下,AT细胞染色体畸变率明显高于GM细胞(P<0.05);AT和GM细胞染色体畸变率与剂量成正相关,均可拟合成剂量效应直线方程Y=a+bX,且AT细胞剂量效应直线回归方程斜率明显大于GM细胞(P<0.05)。结论 AT患者AT细胞的辐射敏感性显著高于GM细胞,具有高辐射敏感性。

共济失调毛细血管扩张症高肿瘤发生率分子机制的研究进展

共济失调毛细血管扩张症(ataxia-telangiectasia,AT)是一种常染色体隐性遗传病,其主要表现为易患癌症、基因组不稳定性、辐射敏感性、渐进性小脑退变及免疫缺陷等。本文主要综述ATM(ATmutated)在染色体不稳定性、辐射敏感性、细胞周期调控及凋亡中的作用机制,从而对AT病人的肿瘤高发生率分子机制进行探讨。

^(60)Coγ射线照射对AT和GM细胞增殖能力及O_2^(.-)浓度的影响

为探求AT5BIVA细胞辐射敏感性与超氧阴离子自由基O2.-之间的联系,以正常人皮肤成纤维细胞GM0639为对照,用3HTdR掺入法和细胞色素C还原法分别测定正常及照射条件下细胞增殖能力及其培养介质中O2.-浓度(nmol/106细胞)。结果表明,在正常培养条件下,两种细胞的增殖能力和向培养介质中释放O2.-的量均随培养时间的延长而增加。在不同剂量60Coγ射线照射条件下,两种细胞的增殖能力和向培养介质中释放O2.—的量均随剂量增大而减小;两种细胞的增殖能力均与其培养介质中O2.—浓度密切相关,且AT5BIVA细胞的增殖速率大于GM0639细胞。提示AT5BIVA细胞高辐射敏感性与O2.—产生量密切相关。

人脑胶质瘤细胞株SHG-44放射敏感性的测定方法探讨

目的探讨MTT法、细胞计数Kit8(CCK8)法在进行人脑胶质瘤细胞株SHG44细胞放射敏感性测定时能否替代集落形成试验法。方法运用3种方法分别在0、1、2、3、4、6、8、10Gy8个不同剂量点照射后检测其存活分数,采用统计学检查分析3种方法所得存活分数的相关性。结果在一定照射剂量内(照射剂量≤3Gy时),MTT法、CCK8法与克隆形成法相关性较好,而超出该剂量范围时的相关性差。经直线回归分析,3种方法均不存在高度线性相关。CCK8和MTT法相比无更好的相关性。结论集落形成法仍然是测定放射敏感性的“金标准”,MTT法等其他方法可以提供参考,但无法替代集落形成法。

外源性ATM基因对辐射诱导AT细胞端粒酶逆转录酶mRNA表达的影响

通过观察外源性毛细血管扩张性共济失调症突变基因(Ataxia-telangiectasiamutation,ATM)对毛细血管扩张性共济失调症(Ataxia-telangiectasia,AT)患者皮肤的成纤维细胞系AT5BIVA(AT细胞)端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)mRNA表达的影响,探讨ATM对hTERT的调控作用。采用RT-PCR法,对比ATM基因转染前、后AT细胞hTERTmRNA表达的变化及与源自正常人皮肤的成纤维细胞系GM0639(GM细胞)相比的差异;以及细胞经3Gy60Coγ射线照射后其hTERTmRNA表达的变化。结果显示,未照射时,GM细胞hTERTmRNA表达呈阴性,AT细胞hTERTmRNA表达呈阳性,转染ATM基因后的ATM+-AT细胞其hTERTmRNA的表达明显下降(p<0.05);60Coγ射线照射后,GM细胞hTERTmRNA表达呈阳性,AT细胞、空载体AT细胞(PEBS7-AT细胞)和ATM+-AT细胞hTERTmRNA的表达量比未照射时明显增加(p<0.05),ATM+-AT细胞hTERTmRNA相对表达量的增加低于AT细胞和空载体AT细胞(p<0.05)。提示ATM可下调hTERTmRNA的表达;电离辐射可诱导细胞hTERTmRNA表达;端粒酶参与DNA损伤修复。

^(60)Coγ射线照射对AT细胞周期进程的影响

目的 研究AT细胞辐射高敏感性与细胞周期进程间的联系。方法 用细胞流式术检测2 Gy60Coγ射线照射后不同时间及不同剂量照射后GM0639和AT5BIVA两种细胞的细胞周期分布状况。结果 GM0639细胞受2 Gy60Coγ射线照射后,从照射后即刻至第24小时,G2／M细胞比例逐步增大,出现了G2阻滞,0~6 Gy60Coγ射线照射24 h后,G2／M细胞比例随剂量增大而增大;AT5BIVA受2 Gy60Coγ射线照射后不同时间及0-6 Gy60Coγ射线照射24 h后,G2／M细胞比例减小,不发生G2阻滞。结论 ATM基因突变所导致的细胞周期关卡丧失及DNA修复能力降低是AT细胞辐射高敏感性的重要原因。

用Calyculin A诱导的PCC断片率检测甲状腺癌患者^(131)I治疗中染色体损伤程度

采用CalyculinA诱导的染色体凝聚断片率来检测甲状腺癌患者接受131I治疗过程中染色体损伤程度,并与常现法染色体双着丝粒体畸变率进行了比较研究。结果表明,CalyculinA法PCC断片率能更真实地反映131I治疗后患者染色体受损程度。

内源性O2对AT5BIVA成纤维细胞增殖的影响

目的探讨AT5BIVA和GM0639成纤维细胞系在体外培养条件下的增殖、O(—·)2的释放情况及佛波醇肉豆蔻醋酸酯(PMA)和二亚苯基碘(DPI)对两种细胞系增殖及O(—·)2释放量的影响.方法两种细胞系分别培养24、48 h,以3H-TdR参入法分别测定GM0639和AT5BIVA两种细胞系cpm值,了解两种细胞系的增殖情况,以细胞色素C还原法检测两种细胞系培养介质中O(—·)2浓度.同时观察PMA及DPI对两种细胞系增殖和O(—·)2释放的影响.结果两种细胞系增殖过程中自身能够释放O(—·)2,PMA可增加两种细胞系O(—·)2释放量,促进二者增殖;而DPI减少两种细胞系O(—·)2释放量,抑制二者增殖.结论低水平O(—·)2促进细胞增殖,且AT5BIVA细胞增殖速率随O(—·)2浓度变化而变化的幅度大于GM0639细胞,提示ATM基因突变是引发这一现象的可能原因.

pcDNA 3.0-tyr转染GM细胞及鉴定

目的研究pcDNA3.0-tyr在正常人成纤维母细胞株(GM0639细胞)中的表达。方法pcDNA3.0-tyr真核表达质粒扩增、纯化后经测序、酶切鉴定;电穿孔法将pcDNA3.0-tyr转染GM细胞,RT-PCR检测;测定490nm吸光度值,细胞爬片Fontana染色,证实酪氨酸酶基因表达及其表达水平。结果测序及酶切结果提示pcDNA3.0-tyr质粒含有酪氨酸酶全长cDNA片段;转染pcDNA3.0-tyr的细胞的PCR产物长度与预期长度一致,而转染pcDNA3.0空载体的细胞PCR产物无此条带;转染pcDNA3.0-tyr的GM细胞的A490显著高于转染空载体的细胞及未转染的GM细胞(P<0.001);转染pcDNA3.0-tyr的GM细胞Fontana染色于胞浆内见棕褐色银沉着颗粒,而转染pcDNA3.0空载体以及未转染的细胞缺乏此颗粒。结论pcDNA3.0-tyr可体外转染GM0639细胞并成功表达,为后续研究奠定基础。

分步克隆法构建人拓扑异构酶Ⅲalpha真核反义表达载体及鉴定

目的 应用分步克隆法构建人拓扑异构酶Ⅲalpha (hTOP 3alpha)真核反义表达载体 ,为进一步阐明其与控制细胞周期的相关基因ATM之间的相互作用 ,研究ATM的生物学功能奠定基础。方法 采用分步克隆法首先用HindⅢ和EcoRI双酶切构建插入 2 .6kb的片段 ,再用EcoRI酶切插入另一 1kb的片段 ,最终获得人拓扑异构酶Ⅲ真核反义表达的重组载体。结果 经酶切、测序鉴定 ,人拓扑异构酶Ⅲ真核反义表达载体构建成功。结论 为研究ATM基因与人拓扑异构酶Ⅲ的相互作用 ,阐明其生物学功能奠定了基础 。

浅谈青年团干如何发挥好生力军排头兵作用

青年职工是航务企业职工队伍的新鲜血液,也将成为中坚力量,其成长情况直接关系着企业发展。文章基于航务企业青年职工队伍现状、青年团干的工作要求分析的基础上,针对青年团干如何发挥好生力军排头兵作用提出了几点建议,以期进一步推进航务企业的稳定发展。

血清癌胚抗原动态变化与直肠癌新辅助放化疗后肿瘤降期的相关性研究

目的探讨直肠癌新辅助放化疗前后血清癌胚抗原(CEA)变化情况与肿瘤降期的相关性。方法收集71例直肠癌患者病历资料,将患者分为治疗前CEA阳性和治疗前CEA阴性,分析两类患者新辅助放化疗前后CEA及CEA比值和肿瘤降期之间的相关性。结果 71例患者治疗前CEA与肿瘤降期无相关性(>0.05),放化疗后CEA与肿瘤降期之间呈负相关(均<0.05);29例治疗前CEA阴性患者,无论是放化疗后CEA,还是CEA比值与肿瘤降期均无相关性(均>0.05);42例治疗前CEA阳性患者,放化疗后CEA与肿瘤降期之间呈负相关(<0.05),而CEA比值与肿瘤降期无相关性(>0.05),放化疗后CEA预测肿瘤降期的准确性接近中等,临界值为2.05 ng/ml。结论新辅助放化疗后CEA在预测肿瘤降期时优于放化疗前CEA;治疗前CEA阴性患者的CEA值及CEA变化情况在预测肿瘤降期时的作用尚不明确;对于治疗前CEA阳性患者,放化疗后CEA值在预测肿瘤降期时优于放化疗前后CEA比值。

浅谈健脾法在糖尿病治疗中的重要性

糖尿病致病因素是综合性的,尤与情志不舒、嗜食厚味、房劳过度等有关,三者综合发病较多.不论情志、饮食、房劳、嗜酒等哪一因素,均因脾运化失职,以致阴血不生,阳气亏损,火炎于上而成本病.病变涉及肺、胃、脾、肾、肝等五脏,其病机则为阴虚燥热,病本在脾肾.三消的表现,仅是糖尿病的一组证候,而多数患者,均伴有不同程度的少气懒言、倦怠、喜卧自汗、或虚胖无力、或日渐消瘦、舌体胖大或有齿痕、脉沉缓或沉弱无力等正气衰弱的证候.

BZ770J-100无碱玻璃丝毡的研制和应用

一、引言我厂于1986年引进了日本的电磁铁制造技术,其中绝缘灌封料采用双酚A环氧树脂,用液态酸酐作活性稀释剂,改性咪唑型固化剂。用无碱玻璃丝毡作为加强材料来灌封电磁铁,提高了电磁铁的抗冲击能力,延长了使用寿命。这种灌封料粘度小,渗透能力强,气泡容易消除,可以渗透到线圈深处,而且胶化时间长(配制后在室温下维持3天仍可流动),可以实现真空脱泡工艺。中温固化,节能省电。

干扰素联合逍遥散对肝纤维化的影响

目的:探讨慢性乙型肝炎肝纤维化及早期肝硬化的中西结合疗法。方法:采用α-干扰素加中药逍遥散联合治疗经病理确诊的慢性乙型肝炎患者21例(治疗组),并以同期22例慢性乙型肝炎患者作对照(对照组),疗程均为6个月。结果:治疗组临床症状及体征明显改善,血清ALT、TBil、A/G、γ球蛋白和肝纤维化指标水平明显降低,血清白蛋白(A)水平有不同程度升高(P<0.01或P<0.05);B超示肝内光点粗、Ⅲ级血管走行欠清和分布不均等异常声像图明显改善,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.05)。此外,治疗组HBeAgF转阴率为63.6%,明显优于对照组的33.3%(P<0.01)。结论:α-干扰素和中药逍遥散联合应用,对改善慢性乙型肝炎患者临床症状体征,促进肝功能复常,抗肝纤维增生和抑制乙型肝炎病毒复制等有显著疗效。