虎杖多糖中蛋白去除工艺及多糖的抗炎作用研究

目的优化虎杖多糖提取工艺,研究其对RAW264.7细胞活性的影响以及在脂多糖诱导的炎症过程中的作用机制。方法用Sevage法对虎杖多糖粗提取物中游离蛋白进行处理,然后进行单因素实验,最后利用响应面法筛选虎杖多糖提取及除蛋白方案。将RAW264.7细胞分为正常组和不同浓度虎杖多糖组(5、10、20、40、80、120μg·mL^(-1)),采用CCK-8试剂盒检测虎杖多糖对细胞活力的影响。将RAW264.7细胞分为空白组,模型组(100μg·L^(-1)脂多糖),不同浓度给药组(20、40、80μg·mL^(-1)虎杖多糖溶液),采用ELISA试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-(IL-6)分泌水平;采用Western blot法检测TLR4、MyD88、NF-κBp65蛋白表达水平。结果筛选得虎杖多糖最优提取方案为Sevage试剂与供试液体积比1∶4、振摇强度8档、振摇时间12 min、除蛋白4次。虎杖多糖质量浓度在20~40μg·mL^(-1)内使细胞活力显著提升,对RAW264.7细胞生长有明显促进作用。与空白组相比,模型组细胞活力升高,TNF-α和IL-6分泌水平及TLR4、NF-κBp65和MyD88蛋白表达水平显著升高,表明巨噬细胞炎症模型构建成功。与模型组相比,虎杖多糖20、40、80μg·mL^(-1)组RAW264.7细胞活力显著降低。此外,在细胞上清液中发现TNF-α和IL-6分泌水平明显减少,并且TLR4、MyD88和NF-κBp65蛋白表达水平也显著降低。结论虎杖多糖可以减少脂多糖诱导的RAW264.7细胞中TNF-α和IL-6分泌,抑制NF-κB信号通路可能是其发挥抗炎作用的一种机制。