LncRNA MIR503HG靶向miR-32-5p调控 ITGA6表达对非小细胞肺癌增殖与迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)MIR503HG、微小RNA(miRNAs)-32-5p、整合素α(ITGA)6在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其对NSCLC细胞增殖和迁移的影响。方法 从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中提取273例NSCLC患者癌组织及其对应癌旁组织的LncRNA、miRNA及转录组mRNA的芯片数据,R软件中MAX STAT函数包统计分析LncRNA MIR503HG、miR-32-5p、ITGA6在NSCLC中的表达。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测80例NSCLC患者癌组织标本和NSCLC细胞系中LncRNA MIR503HG、miR-32-5p、ITGA6 mRNA表达。双荧光素酶实验证明LncRNA MIR503HG、miR-32-5p、ITGA6的关系。依次以LncRNA MIR503HG-mimic-NC、LncRNA MIR503HG-mimic、miR-32-5p-agomir-NC、miR-32-5p-agomir、LncRNA MIR503HG-mimic+miR-32-5p-agomir、LncRNA MIR503HG-mimic+miR-32-5p-agomir+pcDNA3.1-ITGA6、miR-32-5p-agomir+pcDNA3.1-ITGA6转染H1299细胞,另设定正常(Normal)组细胞。EDU染色实验与Transwell小室实验检测各组细胞体外增殖与转移活性;裸鼠体内皮下种植肿瘤模型检测细胞体内生长与转移能力。Western印迹检测ITGA6、E-钙黏蛋白(cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达。结果 在线分析结果显示,与癌旁组织和BEAS-2B细胞相比,LncRNA MIR503HG、ITGA6 mRNA在NSCLC组织和NSCLC细胞表达升高,miR-32-5p mRNA下降,差异具有统计意义(均P<0.05)。双荧光素酶实验证实LncRNA MIR503HG靶向miR-32-5p表达,miR-32-5p靶向ITGA6表达。过表达LncRNA MIR503HG可增强H1299细胞的体外增殖与转移及体内生长与转移能力,ITGA6和Vimentin表达升高,E-cadherin表达降低,miR-32-5p-agomir可部分逆转这一作用,而pcDNA3.1-ITGA6可部分修复这一逆转作用,差异均具有统计意义(P<0.05)。结论 下调LncRNA MIR503HG表达能降低H1299细胞增殖与转移能力,发挥抑癌效应,其机制可能与靶向miR-32-5p调控ITGA6表达水平有关,为NSCLC的治疗提供靶点。

血红素加氧酶-1在糖尿病肾病肾脏中的定位及临床意义

目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)在糖尿病肾病的诊断价值,并对其临床诊断进行评价。方法建立模型大鼠,运用酶组织化学,灌流固定,冰冻切片,光镜下观察HO-1在正常大鼠肾脏及模型大鼠肾脏中的分布,对正常大鼠肾及模型组大鼠肾中HO-1存在部位进行定位。分别利用酶联免疫吸附试验(ELISA)和速率法测定健康对照组和糖尿病肾病组的血清、尿HO-1和尿肌酐(UCr)值。结果在糖尿病肾病模型中,HO-1主要在肾小球内表达。健康对照组、糖尿病肾病组、缓解组血清HO-1的值分别为28.21、43.25、30.01mmol/L。它们的尿HO-1/尿Cr比值分别为0.43、0.90、0.45。糖尿病肾病组的血清HO-1与尿HO-1/尿Cr分别明显高于健康对照组(P<0.05)。血清HO-1与尿HO-1/尿Cr诊断糖尿病肾病的敏感度分别为93%、95%,特异性都为85%。结论 HO-1定位精确、图像清晰,为HO-1的临床意义提供了客观依据。糖尿病肾病中HO-1明显升高,血清HO-1与尿HO-1/尿Cr对糖尿病肾病有较高诊断价值。

磷酸甘油酸变位酶活性测定方法建立

目的建立一种适用于生化自动分析仪动力学测定磷酸甘油酸变位酶(phosphoglyceromutase,PGAM)的方法并评价此方法的可靠性。为进一步探讨人体血清PGAM活性在急性心肌梗死和脑出血等疾病中的早期作用建立良好的方法基础。方法PGAM活性测定采用3-磷酸甘油酸为底物,经烯醇化酶等一系列偶联,以340nm波长在自动分析仪上测定,根据NADH吸光度变化可求出PGAM总活性。结果通过一系列参数的测定建立了良好的能适应生化自动分析仪的PGAM活性测定方法。结论全自动酶偶联法操作简单、测定快速、稳定性好,灵敏度和精确度高,抗干扰性强,可在全自动生化分析仪上应用。

尿酶与尿肌酐的比值诊断2型糖尿病的评价

目的探讨尿血管紧张素转化酶(ACE)、尿微量白蛋白(mALB)、尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)水平和它们与尿肌酐(Cr)的比值在2型糖尿病肾脏疾病的诊断价值。方法利用速率法测定健康对照组50例和2型糖尿病组65例的尿血管紧张素转化酶(ACE)、尿微量白蛋白(mALB)、尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)水平和与尿肌酐(Cr)的比值。结果 2型糖尿病患者尿ACE、尿mALB、尿NAG明显高于正常对照组,差异显著(P<0.05),尿ACE、尿ACE/尿Cr、尿NAG、尿NAG/尿Cr、尿mALB、尿mALB/尿Cr诊断2型糖尿病的敏感度分别为83%、90%、77%、88%、79%、85%,特异度分别为73%、86%、69%、83%7、0%8、1%。结论尿ACE/尿Cr是诊断2型糖尿病肾病的特异性指标,对2型糖尿病肾脏损害有较高诊断价值。

Rh血型弱D和DEL表型的基因突变分析

目的研究Rh血型弱D和DEL表型的基因突变基础。方法用间接抗人球蛋白方法(IAT)和吸收放散的血清学方法鉴定弱D表型和DEL表型,然后用RHD基因特异的聚合酶链反应-序列特异性(PCR-SSP)和序列分析方法鉴定Rh血型弱D和DEL表型RHD基因的外显子中可能存在的变异。结果 Rh血型弱D表型个体的第6外显子有845G>A突变,Rh DEL表型个体的第9外显子有1227G>A突变。结论所应用的RHD基因测序方法可以用于弱D和DEL表型分子基础的研究,并为发现新的D变异表型和新的RHD等位基因奠定基础。

鸟嘌呤脱氨酶速率法测定及其对肝病的诊断价值

目的通过速率法测定鸟嘌呤脱氨酶（GD）活性,探讨GD活性对肝病的特异性诊断意义。方法利用GD催化鸟嘌呤生成黄嘌呤,偶联黄嘌呤氧化酶（XOD）生成H2O2,经过氧化物酶（POD）作用与4-氨基安替比林（4-AAP）及2,4-二氯酚作用生成醌亚胺化合物,从而建立测定GD活性的速率测定法。结果该方法重复性良好,批内度异系数（CV）为2.53%,批间CV为3.57%。最适pH值为7.0,Km=1.09×10^-2mmol/L。线性在13.50U/L以下。健康人GD活性呈偏态分布,第95百分位数（P95）〈1.08U/L。急性黄疸型肝炎和继发性肝癌患者GD活性明显增高,其阳性率分别98%和96%。结论该方法快速,精密度高,适用于自动生化分析仪,使GD能成为临床常规测定项目。GD活性增高对肝实质细胞性急性损害有较高的特异性诊断价值,优于丙氨酸氨基转移酶（ALT）等肝功能酶项目测定。

鸟氨酸氨基甲酰转移酶速率法测定的初步探讨

目的建立鸟氨酸氨基甲酰转移酶（OCT）自动化分析的方法。方法在磷酸盐缓冲液（pH值7．2）条件下，以瓜氨酸为底物，经一系列酶偶联反应，尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH＋H^＋）被氧化为氧化型辅酶Ⅰ（NAD^＋），340nm处测定吸光度（A）变化值，A值下降的速率与待测样本中的OCT含量成正比关系，间接求出OCT的活性。结果本法最适pH值为7．2，最适底物浓度为2．0mmol／L。批内、批间平均变异系数（CV）分别为3．80％、4．08％。米氏常数（Km）值为0．16mmol／L。回收率达91．56％。在320U／L内线性良好。参考范围为0-18U／L。结论本方法能够快速、简便、准确的测定OCT活性，适用于各类全自动生化分析仪。

血管紧张素转化酶活性变化在2型糖尿病早期肾损害诊断中的价值

目的探讨血管紧张素转化酶(ACE)在2型糖尿病早期肾损害中的诊断价值。方法采用全自动生化仪速率法检测65例2型糖尿病患者(观察组)及50例查体健康者(对照组)血、尿ACE活性,并对尿ACE与尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(UNAG)、尿微量白蛋白(mAlb)及血ACE行Pearson相关分析。结果观察组尿ACE、mAlb、UNAG均明显高于对照组(P均<0.05),尿ACE活性随糖尿病病情加重而逐渐增高。相关性分析示尿ACE与UNAG、mAlb均呈正相关(r值分别为0.757、0.796,P均<0.001),与血ACE无明显相关性。结论尿ACE活性变化对2型糖尿病早期肾脏损害诊断有较好的临床价值,可作为筛选指标。

利用SPSS软件判断多种肿瘤标志物在乳腺癌诊断中的应用价值研究

目的应用SPSS软件的多种方法探讨CA199、CA125、CA153、CEA、PSA和AFP在诊断乳腺癌的应用价值。方法应用化学发光法测定201例乳腺癌患者和170例健康对照组6种肿瘤标志物含量,通过SPSS软件多种方法进行分析。结果乳腺癌患者CA199、CA125和CA153与对照组比较有统计学意义,AUC:转换概率>CA153>CA125>CA199,其灵敏度是转换概率>CA153>CA125>CA199,而特异性上CA199>CA125>转换概率>CA153。CA199、CA125、CA153和转换概率的最佳判断临界值分别为22.06U/mL、12.53U/mL、25.32U/mL和0.3879。结论利用SPSS软件的二元Logistic逐步回归分析和ROC曲线判断肿瘤标志物的诊断价值和确定最佳临床判断临界值,可为肿瘤的早期诊断和治疗提供更为可靠的实验室依据。

荧光定量PCR技术在临床微生物检测中的应用

荧光定量PCR技术是近些年来发展起来的一种核酸检测技术,它以灵敏度高、特异性强、重复性好、快速准确定量等特点被广泛应用于各个领域。现主要介绍荧光定量PCR技术在病毒、细菌、真菌和寄生虫4个临床微生物检测方面的应用进展。

3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPD)动力学方法的初步研究

目的建立一种简便、快捷、准确的GAPD的检测方法,为以后的临床推广奠定基础。方法以三乙醇胺作为缓冲液(PH为7.4),1,3-二磷酸甘油酸为底物,偶联3-磷酸甘油酸激酶,还原型辅酶Ⅰ(NADH)被氧化成氧化型辅酶Ⅰ(NAD+),在波长340nm处检测吸光度的变化值,在一定范围内,吸光度的下降与GAPD的活性成正比,间接地计算出GAPD的活性。结果本测定方法的最适PH为7.4,米氏常数(Km)值为6.3×10-4mmol/L,最适基质浓度为0.007mmol/L,批内、批间变异系数为1.60%、1.94%,回收率为96.6%。在0-140U/L范围内线性关系良好,参考值的范围是4-28U/L(逆向法)。结论本法能够准确快速的测定GAPD的活性,是用各种生化自动分析仪。

血红素加氧酶1对2型糖尿病肾病大鼠肾脏功能影响的研究

目的通过复制糖尿病肾病大鼠模型,以药物干预改变糖尿病肾病大鼠肾脏中血红素加氧酶1(HO-1)水平,从而探讨HO-1对2型糖尿病肾病大鼠肾脏功能的影响。方法 32只SD大鼠适应性喂养1周后,随机分成正常对照组、糖尿病肾病(DN)组、DN氯化血红素组和DN锌原卟啉组。除正常对照组外,其他3组复制糖尿病肾病模型,进行药物干预。各组大鼠用药4周后进行取材,大鼠处死前禁食收集24 h尿液,测定大鼠24 h尿量和尿肌酐(Ucr)。大鼠麻醉后心脏取血,分别检测血肌酐(Scr)和血胱抑素C(Cys-c)的浓度,计算内生肌酐清除率(Ccr)。肾脏组织HE染色观察大鼠肾脏组织结构是否异常,电镜下观察肾小球和肾小管超微结构的改变,应用免疫组织化学和Western blot技术对肾脏中HO-1进行定位和定量分析。结果(1)DN组、DN氯化血红素组和DN锌原卟啉组Scr、Cys-c、Ucr、Ccr与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),DN组、DN氯化血红素组和DN锌原卟啉组Scr和Cys-c升高,Ucr、Ccr降低,DN锌原卟啉组Scr和Cys-c增加幅度较DN组和DN氯化血红素组高。(2)HE染色及电镜结果显示,正常对照组大鼠肾脏组织结构无明显变化,其余3组大鼠肾脏组织结构均有改变。肾脏组织结构破坏程度,DN锌原卟啉组>DN组>DN氯化血红素组。(3)Western blot结果显示,DN氯化血红素组肾脏中HO-1表达水平高于DN组,DN锌原卟啉组肾脏中HO-1表达水平低于DN组。结论 DN氯化血红素组大鼠肾脏中HO-1表达水平升高,而DN锌原卟啉组大鼠肾脏中HO-1表达水平下降,DN氯化血红素组大鼠肾脏的损伤指标以及肾脏组织形态学的损伤程度轻于DN锌原卟啉组,实验结果说明提高2型糖尿病肾病大鼠肾脏中HO-1表达水平可以减轻肾脏损伤。

检验医师规范化培训在研究生培养中的应用

检验医师是近年来顺应检验医学发展而诞生的一支医疗技术队伍,是检验科与临床科室联系的枢纽,在医院治疗过程中起到越来越重要的作用。检验医师规范化培训是检验专业硕士研究生成长为一名合格的检验医师必不可少的过程,是培养高水平高素质检验人才必经之路,也是培养符合医院与社会的人才队伍、并关系到医院整体医疗队伍建设和发展的重要环节和措施。因此,探讨检验专业医师规范化培训在临床检验诊断学专业硕士研究生培养中的应用,对提高检验专业硕士研究生培养的质量和检验医师规范化培训的质量有很大的帮助,也对培养出业务强、医疗水平高的高质量检验医学人才具有非常重要的现实意义。

磷酸甘油酸变位酶活性动力学法测定及临床应用

目的:建立一种适用于生化自动分析仪动力学测定磷酸甘油酸变位酶(phosphoglyceromutase,PGAM)的方法并评价此方法的可靠性。为进一步探讨人体血清PGAM活性在急性心肌梗死和脑出血等疾病中的早期作用建立良好的方法基础。方法:PGAM活性测定采用3-磷酸甘油酸为底物,经烯醇化酶等一系列偶联,以340 nm波长在自动分析仪上测定,根据NADH吸光度变化可求出PGAM总活性。结果:通过一系列参数的测定建立了良好的能适应生化自动分析仪的PGAM活性测定方法。结论:酶偶联法操作简单、测定快速、稳定性好,灵敏度和精确度高,抗干扰性强,可在全自动生化分析仪上应用;实验证明PGAM对于早期诊断心肌梗死,判断预后有一定价值;另一方面,脑出血时PGAM变化特点是:脑出血发作后,PGAM的活性在2 h内即可上升,然后下降,与心肌梗塞有明显不同,所以测定PGAM活性有助于临床上的鉴别诊断。

血红素加氧酶-1在高氧肺损伤小鼠中的表达及作用

目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)在高氧造成的肺损伤转基因小鼠和正常小鼠中的肺部表达水平及其作用。方法把32只新生小鼠分成4组:野生型组(WT组),特异性转基因小鼠全身高水平表达HO-1组[HO-1-FL(H)组,细胞质]、特异性转基因小鼠全身低水平表达HO-1组[HO-1-FL(L)组,细胞质]和切去C末端HO-1(Nuc-HO-1-TR组,细胞核)。把4组小鼠暴露在高氧环境中3d,然后放到正常空气环境中,通过免疫组织化学、免疫荧光等实验技术来观察小鼠3d、7d和14d肺泡发育情况及HO-1在小鼠肺部表达情况。结果 HO-1在HO-1-FL(H)组小鼠肺部高表达,高氧暴露3d后4组小鼠肺部肺泡发育都受到了损害,在正常空气环境中7、14d时HO-1-FL(H)组小鼠的肺泡发育恢复得最好。结论小鼠肺部适度高水平的HO-1表达有助于高氧环境造成的小鼠肺损伤的恢复。