双歧杆菌对严重烧伤患者美罗培南应用后肠菌群的调节

目的 探讨双歧杆菌对烧伤患者大剂量应用美罗培南后 ,紊乱肠菌群调整作用。方法 严重烧伤患者 2 3例应用美罗培南 (6 g/d) 7d后 ,随机分为治疗组 (n=11)和对照组 (n=12 ) ;双盲法给予双歧杆菌悬液和生理盐水 (10 0 ml/d) ,疗程 5 d;分别于美罗培南应用前及用后 0、1、3、5 d,常规方法检测粪便中双歧杆菌、真菌、大肠埃希菌量。结果 美罗培南应用 7d,肠道菌群中双歧杆菌量骤减近 10 0倍 ,真菌数激增 10 0倍 ;双歧杆菌治疗 1d,肠道双歧杆菌数增加 10 0倍 ,3d后真菌量减少约 2 5倍 ;对照组在停用美罗培南后 5 d肠道菌群始基本恢复 ;腹泻患者口服双歧杆菌后 3d肠道菌群恢复 ,对照组 5 d恢复。结论 长期大剂量应用美罗培南可导致肠道菌群紊乱 ,停药后外源性补充双歧杆菌能较快恢复肠道生态 ,治愈抗菌药物相关性腹泻。

过表达PAX6抑制肝癌细胞生长和促进自然杀伤细胞杀伤能力的机制

目的:配对盒基因6(paired box gene 6,PAX6)主要在胚胎发育中发挥调控作用,其异常表达与多种肿瘤的发生、发展有关,在不同肿瘤中可发挥促癌或抑癌的作用。本研究旨在观察过表达PAX6对肝癌细胞生长及自然杀伤(natural killer,NK)细胞对肝癌细胞杀伤能力的影响及其分子机制。方法:采用ELISA技术检测68例肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者和10例健康人外周血的PAX6、可溶性主要组织相容性复合体I类样蛋白A(soluble major histocompatibility complex class I-like protein A,sMICA)和可溶性UL16结合蛋白2(soluble UL16 binding protein 2,sULBP2)的表达水平;体外培养肝癌细胞HepG2和LM3及人正常肝细胞LO2,将PAX6过表达质粒(PAX6-OE)和空载体(NC)转入HepG2和LM3细胞中构建稳定细胞株,分别采用real-time PCR、蛋白质印迹法、免疫荧光等方法检测HepG2和LM3细胞中PAX6的表达水平;在HepG2和LM3细胞中过表达PAX6,采用CCK-8法和细胞划痕实验检测细胞生长和迁移能力,ELISA法检测其上清液中sMICA和sULBP2的分泌水平,蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)、去整合素样金属蛋白酶10(disintegrin and metalloproteinase 10,ADAM10)的蛋白质表达水平;采用流式细胞术检测NK细胞对2种肝癌细胞的杀伤能力。结果:与健康人相比较,HCC患者血清中PAX6表达水平显著降低(P=0.002),而sMICA和sULBP2的表达水平显著增高(P=0.004和P<0.001)。Real-time PCR、蛋白质印迹法结果显示:与正常肝细胞LO2相比,HepG2和LM3细胞PAX6的mRNA和蛋白质表达水平均显著降低(均P<0.05)。免疫荧光结果亦可见肝癌细胞HepG2和LM3中PAX6的表达均低于正常肝细胞LO2。与NC组比较,PAX6-OE组肝癌细胞HepG2和LM3的增殖及迁移能力下降(均P<0.05);PAX6-OE组的HepG2和LM3细胞中MMP2、MMP9、ADAM10的蛋白质表达水平均显著降低(均P<0.05),且PAX6-OE组的HepG2和LM3细胞上清液中sMICA和sULBP2的分泌水平均显著低于NC组(均P<0.05)。流式细胞术显示:与NC组比较,PAX6-OE组NK细胞对HepG2和LM3细胞的杀伤率显著增高(均P<0.05)。结论:PAX6在HCC患者血清及肝癌细胞系中表达降低,过表达PAX6可抑制肝癌细胞生长,增强NK细胞对肝癌细胞的杀伤效率,其机制与PAX6抑制金属蛋白酶的表达、降低sMICA和sULBP2的分泌水平有关。

过表达LncRNAMEG3通过促进铁死亡增强肝癌细胞对顺铂的化疗敏感性

目的探讨过表达LncRNAMEG3对肝癌细胞HepG2和LM3增殖、迁移和顺铂化疗敏感性的影响及机制。方法生物信息学在线网站分析MEG3在健康人群与肝细胞癌(HCC)患者的表达情况;将HepG2和LM3细胞各自分成2组,NC组:转染pcDNA3.1(+)空载体的细胞;MEG3-OE组:转染pcDNA3.1(+)-MEG3质粒的细胞。另外在检测活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)实验中,将上述两组细胞分别各自给予顺铂(DDP)或铁死亡抑制剂Fer-1处理,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中MEG3的表达;CCK8和划痕实验检测肝癌细胞的增殖和迁移;另外采用CCK8实验检测DDP对肝癌细胞的抑制率;活性氧荧光探针(DCFH-DA)检测肝癌细胞中ROS的表达,MDA试剂盒检测肝癌细胞中MDA的浓度;Westernblotting实验检测铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和铁蛋白重链1(FTH1)的蛋白表达水平。结果MEG3在肝癌细胞中的表达显著低于LO2细胞,与生物信息学分析结果一致(P<0.05);与阴性对照组相比,MEG3-OE组肝癌细胞增殖迁移能力降低(P<0.05)、DDP的抑制率增高(P<0.05)、ROS水平升高、MDA表达水平升高(P<0.05);MEG3-OE组肝癌细胞GPX4和FTH1蛋白表达均显著降低。结论肝癌细胞中LncRNA-MEG3表达降低,过表达MEG3可抑制肝癌细胞增殖与迁移,增强DDP的化疗敏感性,其机制与促进肝癌细胞铁死亡有关。

法医学多学科整合实验教学模式的探索——以砷中毒模拟案件为案例

法医学本科教育在法医学人才培养中扮演着至关重要的角色,既是法医领域向国家和社会输送高效人才的重要途径,又是法医学科发展中至关重要的组成部分。因此,教育工作者有义务对该领域投入足够的关注和重视,同时积极更新教育理念,以适应不断演变的社会需求。法医学科教育有其特殊性质,其专业性和实践性要求较高。传统的教学方法,无论是纯理论或纯实验教学模式,已经无法满足法医学本科生日后从业所需的实践能力培养要求。因此,教学改革已迫在眉睫。本文提出了一种新颖的教学模式,即“法医现场学-法医毒理学-法医毒物分析”多学科整合实验教学模式,并以砷中毒模拟案为案例在法医学本科生中进行了初步尝试,从教学设计、实施、效果、反思与展望等方面详细阐述了该教学模式的探索过程和实践成效。这一教育改革模式是一种多学科整合的教学形式,将理论知识、实验技能训练和法医实际工作相结合,与传统的教学模式相比,具有独特的优势。案件模拟是这一模式的关键特点,通过真实案例的模拟,学生可以在受控环境中应用他们所学,增强问题解决和实际操作技能。这不仅提高了课堂效率,还使法医学本科生获得更广泛、更全面、更融合的培训,对其未来职业发展具有深远的影响。该改革模式在此次教学实施中取得良好成效,有着十分广阔的发展空间和应用前景,基于此模式拓展思路,或将在法医学教育及其他实践性学科中发挥更广泛用途。

葛根芩连汤及微丸中葛根素、大豆苷元的HPCE分析

目的:建立高效毛细管电泳法分离葛根异黄酮并测定葛根芩连汤及微丸中葛根素和大豆苷元的方法。方法:以555.8μg·mL-1苄基三乙基氯化铵为内标,缓冲液由85%的硼砂(30 mmol·L-1,pH=9.2)与15%甲醇组成;未涂层融硅毛细管(52 cm×50μm,有效长度30 cm),分离电压18 kV,进样压力6.7 kPa,进样1 s;检测波长254 nm,温度30℃。结果:上述条件下,葛根芩连汤及微丸中葛根素和大豆苷元在8 min内得到很好的分离,葛根素和大豆苷元的加样回收率分别为99.75%和98.59%;RSD分别为2.0%和1.6%。结论:该方法具有良好的精密度和回收率,可为葛根制剂中葛根素及大豆苷元的含量测定提供参考。

MTT方法的优化

目的：对MTT法检测悬浮细胞增殖活性的实验条件进行筛选。方法：以K562细胞为实验对象，分别测定不同MTT用量、细胞浓度、MTT溶剂种类及作用时间等实验条件下的OD570值。结果：检测K562细胞的增殖活性时，细胞浓度应选取0．8×108～0．2×108/L，MTT加入量不应超过20μL/孔，若不考虑时间成本，应以三联溶液作为甲硂溶剂，反应12 h后检测，所获结果精密度最高；若需快速获得结果，也可选择DMSO作为甲硂溶剂，反应10 min后检测。结论：建立了优化的MTT法检测悬浮细胞增殖活性。

生物可降解材料聚己内酯微球的细胞相容性体外研究

将聚己内酯制成平均粒径 5 .0 8± 0 .2 3μm的微球 ,采用流式细胞术研究经不同纯化处理的微球其浸提液对小鼠成纤维细胞凋亡及细胞周期的影响。结果表明 ,不同的纯化条件对聚己内酯微球的细胞相容性影响巨大。

连续肾替代治疗16例烧伤急性呼吸窘迫综合征临床观察

目的探讨连续肾替代(continuousrenalreplacementtherapy,CRRT)防治烧伤后呼吸衰竭。方法在16例60%以上面积烧伤合并(adultrespiratorydistresssyndrome,ARDS)患者中,进行常规治疗与连续静脉-静脉血液透析滤过(con-tinuousveno-venoushemodiafiltration,CVVHDF)治疗,观察肺功能改变。结果CVVHDF组PaO2/FiO2和DA-aO2于治疗后即有明显改善,最短时间是第1次CVVHDF治疗结束后1h。肺动态顺应性于CVVHDF治疗24h后也明显高于常规治疗组。CVVHDF组应用呼吸机辅助呼吸时间(8·5±4·0)d较常规治疗组显著缩短(14·4±5·5)d(P<0·05)。结论CVVHDF是CRRT的一种治疗方式,虽然不能直接作用于呼吸系统,但能明显改善肺的换气功能,PaO2/FiO2升高和DA-aO2降低,并能增加肺动态顺应性,对大面积烧伤ARDS是一有效的治疗手段。

湖南地区强直性脊柱炎与HLA-B27关联性的观察

目的 探讨湖南地区 HL A- B2 7对强直性脊柱炎的诊断意义。 方法 对临床疑为强直性脊柱炎的患者静脉血采用玻璃珠抗凝分离淋巴细胞并用标准的 Terasaki软滴法作微量淋巴细胞毒试验。结果疑为强直性脊柱炎患者 6 47例 ,其中男性 481例 ,女性 16 6例 ,男女比例为 3:1。 B2 7阳性率为 5 6 .5 7% ,其中男性占 6 7.15 % ,女性占 2 5 .90 %。发病年龄主要集中在青少年时期。 结论 HL A- B2 7血清学检测对强直性脊柱炎的诊断和鉴别诊断具有重要意义。

湖南汉族白血病与HLA-A、B、DRB1基因的相关性研究

目的探讨湖南汉族白血病与HLA-A、B、DRB1基因的相关性。方法应用PCR/SSP方法对湖南汉族等待骨髓移植的105例慢性粒细胞性白血病(CML)、25例急性淋巴细胞性白血病(ALL)和48例急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)患者进行HLA-A、B、DRB1基因分型,并以3664例湖南汉族无关健康个体的造血干细胞HLA分型资料作为正常对照。结果CML患者B58、DR12、DR14基因表型频率明显高于对照组,RR分别为6.1287、1.6519、1.6479;ALL患者B58基因表型频率明显高于对照组,RR为7.4055;ANLL患者B58、DR8基因表型频率明显高于对照组,RR分别为13.9789、2.2839;ANLL患者A24基因表型频率明显低于对照组,RR为0.4012。结论HLA-B58、DR12、DR14可能是CML的易感基因;HLA-B58可能是ALL的易感基因;HLA-B58、DR8可能是ANLL的易感基因,而HLA-A24可能是ANLL的保护基因。

双黄连粉针中化学成分的高效液相色谱-电喷雾串级质谱分析

目的:采用液相色谱-质谱联用方法快速分析双黄连粉针(金银花、黄芩和连翘)中的成分。方法:采用Zorbax C18柱,以乙腈-水溶液梯度洗脱,电喷雾质谱在线检测,全离子扫描模式扫描,对每一组分峰进行质谱分析。结果:通过质谱分析及文献对照,从双黄连粉针图谱中共准确推断18个峰的分子量,鉴定出9个化合物,分别为奎尼酸、咖啡酸、三种单咖啡酰奎尼酸、异绿原酸、连翘苷、连翘酯苷、黄芩苷。结论:首次从双黄连粉针剂中检测出奎尼酸,液相色谱-质谱联用技术是快速分析中药化学组分的有效手段。

肿节风化学成分的高效液相色谱-电喷雾串联质谱分析

目的:对比分析肿节风药材及清热消炎宁胶囊水提液乙酸乙酯萃取部位的主要化学成分。方法:采用Zorbax C18柱,以乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,紫外和电喷雾质谱同时在线检测,全离子扫描模式扫描,对每一组分峰进行质谱分析。结果:通过质谱分析及文献对照,从肿节风药材图谱中共推断出26个峰的分子量;从清热消炎宁胶囊图谱中推断出16个峰的分子量,共鉴定出5个化合物。结论:液相色谱-质谱联用技术快速分析中药化学组分具有独特优势。

烟雾吸入性损伤血清对PMN粘附的影响

目的：通过大鼠烟雾吸入伤血清体外刺激培养的内皮细胞和中性粒细胞（ＰＭＮ），了解ＰＭＮ粘着的变化，以及抗ＣＤ１１ａ、抗ＣＤ１１ｂ和抗ＩＣＡＭ－１对ＰＭＮ粘着的影响，探讨粘附因子在烟雾吸入性损伤中的作用。方法：在体外实验中用荧光标记ＰＭＮ，测定ＰＭＮ与烟雾吸入性损伤血清刺激的内皮细胞的粘着率，并采用抗体阻断技术，测定了粘附因子ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ和ＩＣＡＭ－１在ＰＭＮ粘着的作用。结果：吸入伤血清能使粘着率增高，１２～２４ｈ是正常时的３倍多，ＰＭＮ的内皮细胞粘附因子抗体（抗ＣＤ１１ａ、抗ＣＤ１１ｂ和抗ＩＣＡＭ－１）减少ＰＭＮ与内皮细胞粘着率（４４％、５５％和５１％）。结论：烟雾吸入伤血清能增加ＰＭＮ的粘着，其可能是ＰＭＮ浸润的病理基础，进一步研究证明，粘附因子ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ和ＩＣＡＭ－１在ＰＭＮ浸润过程中起重要作用，而且浸润的中性粒细胞释放氧自由基和蛋白酶能导致进一步的肺组织损害。

高效液相色谱-电喷雾串联质谱法测定肿节风中异秦皮啶的含量

目的建立异秦皮啶的高效液相色谱-电喷雾串联质谱含量测定方法。方法肿节风药材及清热消炎宁胶囊中异秦皮啶分别用乙酸乙酯和氯仿萃取,以高效液相色谱-电喷雾串联质谱进行分析,多反应监测扫描,母/子离子对为223/162。结果异秦皮啶保留时间为6.60min,标准曲线在484-9680ng/ml范围内线性关系良好(r=0.9996),回收率96.7%,RSD4.49%,最低检测限1ng/ml。结论该方法快速、准确、选择性好,灵敏度高,可为异秦皮啶的含量测定提供参考。

胶质瘤细胞中miR-223对PAX6基因3'非翻译区的调控作用

目的:明确miR-223在胶质瘤细胞中对PAX6基因3'-UTR的靶向调控作用。方法:生物信息学软件预测PAX6基因3'-UTR的靶向miRNAs;分别构建野生型和突变型PAX6基因3'-UTR双荧光素酶报告基因质粒;共转染miR-223 mimics与野生型和突变型双荧光素酶报告基因质粒于U251细胞中,双荧光素酶检测系统测定荧光素酶活性。结果:生物信息学软件预测显示PAX6可能是miR-223的靶基因;与转染野生型PAX6 3'-UTRpsiCHECKTM-2质粒组和转染突变型PAX6 Mut 3'-UTR-psiCHECKTM-2质粒组相比,miR-223 mimics能明显降低野生型荧光素酶质粒活性。结论:miR-223能够靶向负性调控PAX6基因3'-UTR的活性。

高效液相色谱-串联四极杆质谱联用测定人全血中吗啡含量

目的建立高效液相色谱-串联四极杆质谱联用测定人全血中吗啡含量的方法。方法采用固相萃取法提取人全血中吗啡,以甲醇∶5mmol·L-1乙酸铵水溶液(70∶30,v/v)为流动相,Agilent Zorbax ODS C18柱分离,采用电喷雾电离源,多反应监测。结果吗啡保留时间为2.76min,标准曲线在8.0～200.0ng·mL-1范围内线性关系良好(r2=0.9992),平均加样回收率为92.3%,最低检测限为2.4ng·mL-1。结论该方法选择性强、灵敏度高,可为生物样品中吗啡的含量测定提供参考。

湖南汉族人群MICB等位基因多态性与白血病的相关性研究

目的:研究湖南汉族人群MICB等位基因的多态性与白血病的相关性。方法:MICB等位基因分型用PCR-SSP和PCR-SBT的方法。结果:白血病患者中有13种MICB等位基因被检测出,其中MICB*005:02/010基因频率较对照组显著偏低(OR=0.416,P<0.05)。不同类别白血病之间MICB等位基因多态性没有显著差异。结论:MICB*005:02/010等位基因可能与白血病的保护相关。

湖南汉族强直性脊柱炎与HLA-B27、B7、B13和B40抗原的关联性分析

目的探讨湖南汉族疑似强直性脊柱炎患者的HLA-B27、B7、B13和B40抗原分布及其关联性。方法采用补体依赖性微量淋巴细胞毒法(NIH标准)检测HLA-B27等相关B位点抗原。结果①在450例患者中,男性患者的HLA-B27、B7抗原阳性率明显高于女性患者,而B13、B40抗原阳性率无性别差异;②患者组HLA-B27、B7阳性率均高于对照组(RR=13.92、RR=8.21),而B13阳性率低于对照组(RR=0.21),B40在两组的阳性率高且分布无差异。③患者组B7/B40的抗原阳性率高于对照组(χ2=19.5,P<0.0001),RR=22.64;患者组B13/B40的抗原阳性率低于对照组(χ2=20.57,P<0.0001),RR=0.27。结论强直性脊柱炎与B27和/或B7有关联。

浅议提高免疫学实验教学质量

要提高免疫学实验教学质量 ,必须经过事先预做 ,摸索最佳实验条件 ,增强“微量”概念 。