己酮可可碱灌胃对急性肝性脑病大鼠脑水肿的改善作用及其机制

目的观察己酮可可碱灌胃对急性肝性脑病大鼠脑水肿的改善作用,并探讨其作用机制。方法将60只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、己酮可可碱低剂量组、己酮可可碱中剂量组、己酮可可碱高剂量组,每组12只。实验第1~3天,模型组、己酮可可碱低剂量组、己酮可可碱中剂量组、己酮可可碱高剂量组给予硫代乙酰胺连续腹腔注射3 d,制备急性肝性脑病大鼠模型;对照组给予等体积生理盐水腹腔注射。实验第4天起,己酮可可碱低剂量组、己酮可可碱中剂量组、己酮可可碱高剂量组大鼠分别给予己酮可可碱50、100、200 mg/(kg·d)灌胃,模型组及对照组给予等体积蒸馏水灌胃,连续7 d。观察各组大鼠实验期间饮食、运动等一般情况,称取灌胃结束后大鼠体质量。灌胃结束后,采用高架十字实验观察各组大鼠精神状态,采用开场实验观察各组大鼠自发运动能力(大鼠平均每分钟自发运动距离以及中央活动时间百分比),采用Morris水迷宫实验观察各组大鼠空间学习记忆能力(寻台潜伏期),使用全自动生化分析仪检测各组大鼠血氨、ALT、AST。大鼠断头取脑后,观察各组大鼠血脑屏障通透性(大鼠脑内EB含量),测算各组大鼠脑组织含水量,分别采用实时定量PCR法和Western blotting法检测各组大鼠脑组织中水通道蛋白4(AQP4)mRNA和蛋白,采用ELISA法检测各组大鼠脑组织中TNF-α、IL-1β。结果与对照组相比,模型组大鼠活动减少、精神萎靡、食欲不振,对外界刺激反应迟钝,体质量减轻(P<0.05),开臂进入次数百分比、开臂滞留时间百分比分、平均每分钟自发运动距离、中央活动时间百分比均降低(P均<0.05),寻台潜伏期延长(P<0.05),血氨、ALT、AST水平均升高(P均<0.05),大鼠脑内EB含量、脑组织含水量、脑组织中AQP4 mRNA和蛋白相对表达量均升高(P均<0.05),脑组织中TNF-α、IL-1β水平均升高(P均<0.05)。与模型组相比,己酮可可碱高剂量组大鼠一般情况有所好转,体质量升高(P<0.05),开臂进入次数百分比、开臂滞留时间百分比分、平均每分钟自发运动距离、中央活动时间百分比均升高(P均<0.05),寻台潜伏期缩短(P<0.05),血氨、ALT、AST水平均降低(P均<0.05),大鼠脑内EB含量、脑组织含水量、脑组织中AQP4 mRNA和蛋白相对表达量均降低(P均<0.05),脑组织中TNF-α、IL-1β水平均降低(P均<0.05)。结论200 mg/(kg·d)己酮可可碱灌胃能改善急性肝性脑病大鼠的脑水肿,其机制可能与下调脑组织中AQP4表达、降低TNF-α和IL-1β水平有关。

下调miR-129-5p水平减轻酒精引起的Caco-2人肠上皮细胞屏障功能障碍

目的研究miR-129-5p对酒精诱导的肠上皮细胞屏障功能障碍的作用.方法实时定量PCR检测酒精性肝病患者和健康人乙状结肠活检组织以及酒精诱导的分化的Caco-2细胞中miR-129-5p的表达.然后将分化的Caco-2细胞分成4组:对照组、酒精处理组(50 mmol/L酒精处理1 h)、酒精联合miR-129-5p抑制物处理组(酒精处理前,先转染miR-129-5p抑制物)和酒精联合miR-129-5p抑制物对照组(酒精处理前,先转染miR-129-5p抑制物对照).酒精处理后使用电阻仪检测跨上皮电阻(TER)值,Western blot法检测紧密连接相关蛋白闭合蛋白(occludin)和闭锁小带蛋白1(ZO-1)表达.结果与健康人相比,酒精性肝病患者乙状结肠活检组织中miR-129-5p的表达升高.酒精诱导后分化的Caco-2细胞中miR-129-5p的表达也上调.与对照组相比,酒精处理组中TER值、occludin和ZO-1表达均降低;与酒精处理组相比,酒精联合miR-129-5p抑制物处理组中TER值、occludin和ZO-1表达均升高.结论miR-129-5p在酒精性肝病患者乙状结肠和酒精诱导的分化的Caco-2细胞中的表达均上调,下调miR-129-5p的表达可减轻酒精诱导的肠上皮细胞屏障功能障碍.

咖啡与肝脏疾病

咖啡是世界范围内非常流行的一种饮品,因其良好的口感及诸多生理作用为大众喜爱。研究发现,饮用咖啡对多种疾病有益,其中也包括肝脏疾病。对于慢性丙型肝炎患者,咖啡可以改善其在抗病毒治疗过程中对药物的反应;咖啡与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发生、发展呈负相关;饮用咖啡还可放慢肝硬化的进展,降低肝硬化患者的死亡率,并减少肝癌的发生率及死亡率。因此,在慢性肝病患者中,每日饮用适量的无糖咖啡可以作为一种辅助治疗方式。

己酮可可碱预处理对硫代乙酰胺致大鼠急性肝损伤的影响

目的观察己酮可可碱预处理(pentoxifylline,PTX)对硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)致大鼠急性肝损伤的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为6组:正常对照组(N),急性肝损伤模型组(M),联苯双酯[100mg/(kg·d)]阳性对照组(C),己酮可可碱低[50 mg/(kg·d)]、中[100 mg/(kg·d)]、高[200 mg/(kg·d)]剂量干预组。采取腹腔注射TAA(300 mg/kg)复制大鼠急性肝损伤模型。生化法检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)及肝组织内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)的含量变化。肝组织石蜡切片HE染色,并在光镜下观察肝脏病理改变。结果与正常组比较,模型组AST、ALT、MDA明显升高(P<0.01),SOD、GSH显著降低(P<0.01)。与模型组比较,阳性对照组及中、高剂量干预组AST、ALT、MDA显著下降(P<0.01),SOD、GSH活性提高(P<0.05);低剂量干预组AST、ALT、MDA下降,SOD、GSH升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色结果显示阳性对照组及中、高剂量干预组大鼠肝组织病变范围与程度明显改善。结论己酮可可碱能改善硫代乙酰胺诱导的大鼠急性肝损伤,其机制可能为通过减少自由基和减轻脂质过氧化损伤,对急性肝损伤发挥保护作用。

微信平台联合案例教学法在留学生内科学见习中的应用体会

目的:探讨微信平台联合案例教学法在留学生内科学见习中的效果。方法:选取我院2015级临床医学专业74名留学生作为研究对象,分为两组,实验组35名,采用微信平台联合案例教学法;对照组39名,采用传统教学方式。结果:(1)实验组留学生理论成绩、临床思维水平、平时成绩及总成绩均高于对照组(P<0.01);(2)实验组学生对教学模式满意度、学习兴趣、临床思维能力、文献检索能力、医患沟通能力均高于对照组(P<0.05)。结论:微信平台联合案例教学法能够提高留学生内科学见习教与学的质量。

肠道菌群移植通过降低IL-17水平减轻老年小鼠脑缺血再灌注损伤

目的探索肠道菌群移植对老年小鼠脑缺血再灌注损伤的效应及其机制。方法利用老年和青年C57BL/6小鼠建立大脑中动脉阻闭模型,比较两组小鼠脑缺血损伤程度及粪便菌群构成;分离提纯青年小鼠粪便菌群,通过灌肠法移植至老年小鼠,比较接受菌群移植的老年小鼠与对照组老年小鼠粪便菌群构成,研究青年小鼠肠道菌群移植是否能减轻老年小鼠脑缺血再灌注损伤。同时,采用ELISA检测血清白细胞介素17(IL-17)水平, Western blot法检测肠道组织、脑组织IL-17蛋白水平。给予接受青年小鼠粪菌移植的老年小鼠静脉注射重组IL-17A(rIL-17A),验证其是否可抑制粪菌移植的脑保护效应。结果老年小鼠粪便中拟杆菌门减少,厚壁菌门增多;脑缺血再灌注损伤后,老年小鼠脑梗死体积较青年小鼠显著增大,神经功能损伤显著加剧。菌群移植后,老年小鼠粪菌构成中拟杆菌门增加,厚壁菌门减少;脑缺血损伤程度明显减轻,同时肠道、血清、脑组织IL-17水平显著降低,而给予rIL-17A后,菌群移植的脑保护效应被抑制。结论肠道菌群移植可减轻老年小鼠脑缺血再灌注损伤,恢复其菌群环境,并可通过降低肠道、血清、脑组织IL-17的水平发挥脑保护作用。

阿托伐他汀对胰腺癌细胞PANC-1增殖、侵袭能力的影响及机制

目的研究阿托伐他汀体外对胰腺癌细胞株PANC-1的影响及其机制。方法不同浓度阿托伐他汀干预胰腺癌PANC-1细胞后,MTT法检测细胞的增殖、黏附作用,Transwell小室测定胰腺癌细胞的侵袭能力;RT-PCR方法测定MMP-2和VEGF的mRNA表达变化;Western blot方法检测ERK1/2的蛋白表达水平。结果不同浓度阿托伐他汀干预胰腺癌PANC-1细胞后,细胞的增殖能力降低,并呈剂量时间依赖性。此外,阿托伐他汀可以抑制PANC-1细胞的黏附、侵袭能力,检测加药后PANC-1细胞内MMP-2、VEGF mRNA的相对表达量降低,与阴性对照组相比,差异有统计学意义(P=0.001 3,P=0.007),ERK1/2蛋白的相对表达量降低(P=0.001 5)。结论在体外细胞培养实验中,阿托伐他汀能显著抑制胰腺癌PANC-1细胞的增殖、黏附、侵袭能力,其机制可能是通过调控MAPK/ERK1/2通路减少MMP-2及VEGF的表达而实现。

老年小鼠慢性痛焦虑模型肠道菌群的变化规律

目的观察老年慢性神经病理性痛伴焦虑小鼠的焦虑样行为和肠道菌群的变化规律。方法将16月龄的雄性C57BL/6小鼠随机分为模型组和对照组,每组6只。对模型组小鼠进行坐骨神经选择性结扎切断(spared nerve injury,SNI)手术。在手术后第21天,应用Von-Frey丝检测小鼠的机械痛敏,应用旷场实验(open field test,OFT)和高架十字实验(elevated plus maze,EPM)检测小鼠焦虑行为的变化,应用16S rDNA测序检测小鼠肠道菌群变化。结果与对照组相比,SNI小鼠痛敏阈值显著降低(P<0.001)。SNI术后第21天,SNI小鼠进入OFT的中央区和EPM的开臂区的活动时间比对照组明显减少(P<0.05),但活动总路程没有发生明显变化,提示SNI小鼠出现焦虑样行为。SNI小鼠肠道菌群结构紊乱及菌群多样性降低,在门分类水平,2β-变形菌显著减少;在目分类水平,乳杆菌显著减少;在科分类水平,普雷沃氏菌显著减少。结论老年慢性痛小鼠具有焦虑样的行为,且肠道菌群发生明显变化。

AQP4在A型肝性脑病大鼠脑水肿中的作用

目的探讨水通道蛋白4(AQP4)在硫代乙酰胺制备的A型肝性脑病大鼠模型脑水肿中的作用。方法以Sprague Dawley大鼠为研究对象,随机分为正常对照组(对照组)(n=18)和肝性脑病模型组(模型组)(n=90)。模型组给予腹腔注射硫代乙酰胺建立A型肝性脑病模型,观察大鼠一般情况,并检测脑组织氨含量、血氨及肝功能指标变化以评价模型建立情况。造模成功后分时间点处死大鼠,分别检测脑组织含水量、血脑屏障通透性,采用Western blot及实时定量PCR方法,检测脑组织AQP4蛋白及mRNA的表达,并分析比较AQP4的表达与脑水肿的相关性。结果与对照组比较,模型组大鼠毛色蓬乱、黯淡、不光洁,活动减少,精神萎靡,嗜睡,食欲不振,对外界刺激反应迟钝,体重明显下降(P<0.05),脑组织氨含量,血氨,血清ALT、AST含量明显升高,差异均有统计学意义(F=63.561、41.278、172.241、93.673,P均<0.01)。模型组大鼠血脑屏障通透性增强,脑组织含水量增加,Western blot及实时定量PCR方法检测显示,脑组织AQP4蛋白及mRNA表达量均显著升高(P<0.05),并呈动态变化过程。模型组大鼠大脑皮层AQP4蛋白和mRNA表达均与脑组织含水量成显著正相关(r=0.776、0.623,P均<0.01)。结论A型肝性脑病大鼠脑组织中AQP4表达增加,并与脑水肿成正相关,提示AQP4可能参与肝性脑病脑水肿的发生及发展过程。

己酮可可碱对氨致大鼠脑星形胶质细胞水肿的作用及机制研究

目的探讨己酮可可碱(PTX)对氨致大鼠脑星形胶质细胞水肿的影响及机制研究。方法原代培养大鼠脑星形胶质细胞,将传代并鉴定后的星形胶质细胞随机分为溶剂对照组、模型组、细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂组、c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂组、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂组和PTX组。通过光学显微镜观察星形胶质细胞形态学改变,四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测细胞活性,细胞免疫荧光法、Western blot法检测各组星形胶质细胞水通道蛋白4(AQP4)的表达,并进一步通过Western blot法检测溶剂对照组、模型组、p38 MAPK抑制剂组和PTX组中p-p38 MAPK和p38 MAPK的水平。结果与溶剂对照组相比,模型组细胞形态学改变,胞体肿大,活性降低、AQP4免疫荧光表达及蛋白表达水平增加,差异均有统计学意义(t=7.206、8.521、5.284,P均<0.05)。与模型组相比,p38 MAPK抑制剂组和PTX组细胞形态显著改善,肿胀程度轻,细胞活性升高、AQP4免疫荧光表达及蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(t_(p38 MAPK抑制剂组)=3.873、7.042、3.674,t_(PTX组)=4.648、8.521、2.858,P均<0.05)。ERK抑制剂组和JNK抑制剂组的细胞形态、细胞活性、AQP4免疫荧光表达及蛋白表达水平与模型组相比,差异均无统计学意义(P均>0.05)。与溶剂对照组相比,模型组p-p38 MAPK和p38 MAPK表达水平均显著增加,差异均有统计学意义(t=12.614、11.144,P均<0.05);与模型组相比,p38 MAPK抑制剂组和PTX组p-p38 MAPK、p38 MAPK的表达水平显著减少,差异均有统计学意义(t_(p38 MAPK抑制剂组)=11.241、9.915,t_(PTX组)=6.529、6.244,P均<0.05)。结论己酮可可碱可降低氯化铵处理的大鼠脑星形胶质细胞AQP4蛋白的表达,从而减轻细胞水肿,可能通过抑制p38 MAPK信号通路发挥作用。

基于层次分析评价和模糊综合评价模型的临床医学课程思政实施效果评价

目的探索基于层次分析评价和模糊综合评价模型的临床医学课程思政实施效果评价体系构建和应用。方法利用Yaahp软件构建基于层次分析评价和模糊综合评价模型的临床医学课程思政实施效果评价体系。在西安交通大学第一附属医院185名学生的内科学课程中实施德医并举的课程思政清单式教学, 并在课程结束时应用此评价体系得到定量的综合评价结果。结果基于层次分析评价和模糊综合评价模型构建了临床医学课程思政实施效果评价体系, 以德医双馨的育人目标为目标层, 师德师风、课程设计、学生体会、发展评估为准则层, 分13项方案层。利用此评价体系评价2020至2021学年第一学期内科学课程思政实施效果, 结果显示德医并举的课程思政清单教学具有良好的育人效果, 定量综合评价得分4.080分(1~5分)。结论临床医学课程思政实施效果的评价可基于层次分析评价和模糊综合评价模型构建, 具有科学、定量、综合和可改进等特点。