舒泰与右美托咪定对小熊猫复合麻醉的临床效果

为评估舒泰(替来他明和唑拉西泮合剂)与右美托咪定联合应用对小熊猫的麻醉效果,使用舒泰2.0~3.0 mg/kg和右美托咪定20~40μg/kg对全身体检和临床治疗的30只小熊猫实施复合麻醉,观察并记录麻醉相关时间、麻醉过程中小熊猫的各项生理指标和反射活动.结果显示:舒泰和右美托咪定联合应用能迅速且安全地诱导小熊猫麻醉,麻醉效果良好.随着舒泰剂量增加,麻醉维持时间延长,其中舒泰3.0 mg/kg和右美托咪定30μg/kg剂量组合对小熊猫进行麻醉的维持时间可达(61.5±7.06)min,与其他各组相比差异显著(P<0.05).维持麻醉期间,各组小熊猫的心率、呼吸频率、体温和血氧饱和度等生理指标均在正常参考值范围内,且镇静、镇痛和肌松效果良好,达到中度麻醉至外科麻醉水平.麻醉过程中未见呕吐、呼吸暂停、不规则呼吸或其它任何不良反应.肌肉注射颉颃剂阿替美唑后,小熊猫苏醒过程平稳迅速.综上,应用舒泰和右美托咪定对小熊猫进行复合麻醉安全有效,可通过调整麻醉药剂量控制麻醉时间,能满足全身体检、诊断和手术治疗等临床需求.

大熊猫源犬细小病毒VP2基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

【目的】建立一种检测大熊猫血清中犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)抗体的间接酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。【方法】以大熊猫源CPV DNA为模板,利用PCR扩增VP2基因,再用原核表达系统对VP2基因进行表达,经纯化后的蛋白作为ELISA包被抗原;制备并纯化兔抗大熊猫IgG,采用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记作为间接ELISA酶标二抗,通过棋盘法确定抗原包被质量浓度及血清稀释度等条件,并评估建立方法与商业试剂盒检测样品结果的符合率。【结果】原核表达成功获得约70 ku的VP2蛋白,将其作为间接ELISA包被抗原,抗原最佳包被质量浓度为2.0μg/mL,血清最佳稀释度为1∶400,用该方法进行检测血清样品时OD450≥0.258为阳性,反之为阴性。采用建立的ELISA方法检测大熊猫血清样本阳性率为60.0%,高于商业化检测试剂盒检测的阳性率(52.5%),两者总符合率达到87.5%。【结论】本研究首次建立了基于大熊猫源CPV VP2蛋白为抗原、自制HRP标记兔抗大熊猫IgG为酶标二抗的间接ELISA方法,该方法特异性强、灵敏性较高、重复性好,为大熊猫血清中CPV抗体的检测提供了技术支持。

幼年大熊猫石膏样小孢子菌性皮癣病的防治

近年来成都大熊猫繁育研究基地有多只幼年大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)发生以脱毛、脱屑和水肿为主要症状的皮肤癣菌病,通过综合应用临床诊断方法确认病原为石膏样小孢子菌(Microsporum gypseum),经药敏试验与临床实践筛选出局部外用萘替芬酮康唑等防治措施,最终取得满意效果。本研究对幼年大熊猫石膏样小孢子菌性皮癣病的流行病学、临床特点进行介绍,并对幼年大熊猫石膏样小孢子菌性皮癣病的诊断方法、致病机理以及防治措施进行阐述,可为大熊猫皮肤癣菌病的科学防治提供参考。

犬恶丝虫抗体dot-ELISA检测方法的建立

为快速诊断犬恶丝虫病,建立了犬恶丝虫抗体dot-ELISA检测方法,并与阻断试验、交叉反应试验、重复性试验、琼脂扩散试验和平行对照试验进行了比较。结果显示,制备的犬恶丝虫虫体粗制抗原与犬钩虫、犬弓首蛔虫和犬蠕形螨感染犬的阳性血清无交叉反应,检出犬恶丝虫阳性血清的最高抗体效价为1∶1 024,重复性好;建立的犬恶丝虫病dot-ELISA诊断方法的灵敏度比琼脂扩散试验和美国IDEXX实验室制备的犬恶丝虫病诊断试剂盒分别高2 048倍和48倍。

产仔大熊猫孕激素变化规律研究

在过去的30年中,非干扰性的内分泌检测技术逐渐运用到大熊猫的研究中来.已经有许多研究人员报到了大熊猫独特的繁殖特点.但不足的是这些研究都是基于很小数量的大熊猫.本研究追踪了大熊猫30次妊娠的情况.研究发现大熊猫的整个妊娠期可以分为三个部分.第一期为大熊猫雌激素峰值到孕激素第二次上升开始,平均为93.21±22.52天(MAX=125,MIN=50,N=29);第二期为大熊猫孕激素第二次上升开始到孕激素峰值,平均为24.86±9.76天(MAX=53,MIN=8,N=29);第三期为大熊猫孕激素峰值到大熊猫产仔,平均为19.60±5.13天(MAX=29,MIN=8,N=29).妊娠期的长短与孕激素第一期密切相关,R=0.912.产仔大熊猫与未产仔大熊猫孕激素峰值差异显著,P=0.022.

非干扰条件下圈养大熊猫正常生理生化指标的测定

2006~2015年间,通过驯化,在非麻醉状况下成功采集了114只大熊猫(♀58只,♂56只)2 399份血样进行了50项生理生化指标检测,建立非干扰条件下大熊猫正常生理生化指标参考范围。统计分析发现某些生理生化指标随着年龄的增长表现出显著性差异;酶类指标波动范围较大,个别指标表现出与年龄相关的变化趋势;成年组雌性和雄性大熊猫生理生化指标较幼年组、亚成年组和老年组表现出更多性别相关的差异,临床上需按性别区别对待。受种群健康状况改善、样本数量和采样方式改变的影响,现有的非干扰状态下血液生理生化指标更适用于成都圈养大熊猫种群健康水平的评估,有助于科研工作者保护这一特殊物种。

大熊猫幼兽腹泻粪便分离出的轮状病毒鉴定

11只5～11月龄的断奶大熊猫幼兽先后患一种急性传染性、顽固性腹泻病,1只大熊猫幼兽在发病4d后死亡,相同饲养条件下由母兽哺育的同龄大熊猫幼兽未见发病。取发病大熊猫幼兽粪便、血液以及呕吐物进行细菌学和寄生虫学检查,未检出病原;用轮状病毒粪便抗原ELISA快速诊断,受检的8只大熊猫幼兽腹泻便都多次检出阳性结果。采集发病大熊猫的病料进行病毒病原分离,从腹泻大熊猫幼兽的粪便中分离出病毒颗粒,通过电镜形态、理化特性和中和试验鉴定,确认分离病毒为轮状病毒。

犬瘟热弱毒疫苗对大熊猫的免疫效果评价

以国产犬用犬瘟热等六联弱毒苗接种33只不同性别、不同年龄的健康大熊猫,分别采集每只大熊猫免疫前以及免疫后2周、1个月、3个月、6个月、9个月、11个月的血清样品,采用细胞中和试验测定犬瘟热病毒(CDV)中和抗体效价,并对接种疫苗后的所有大熊猫个体进行连续1年的健康资料记录。结果表明,所有接种疫苗的大熊猫均未出现任何与疫苗相关的副反应,该疫苗接种对大熊猫是安全的;部分老年、成年和亚成年的大熊猫(13/33)在疫苗接种前已经存在CDV抗体(≥1∶4);2只老年大熊猫在疫苗接种后仅产生低水平的CDV抗体(≤1∶8),另外2只老年大熊猫在疫苗接种后未产生CDV抗体(<1∶4);部分成年大熊猫(9/15)在疫苗接种后未产生CDV抗体(<1∶4),仅部分成年大熊猫(6/15)在疫苗接种后产生低水平的CDV抗体(≤1∶22);部分亚成年大熊猫(8/9)在疫苗接种后能够产生低水平的CDV抗体(≤1∶22),少数亚成年大熊猫(1/9)在疫苗接种后未产生CDV抗体(<1∶4);幼年大熊猫(5/5)疫苗接种后可产生CDV抗体,2周至1月内达到高峰,CDV抗体水平和持续时间都明显高于老年、成年和亚成年大熊猫(P<0.05);少数幼年大熊猫(1/5)疫苗接种后CDV抗体达到1∶127,但3个月后所有幼年大熊猫CDV抗体就陡然下降(≤1∶16)。由此表明,在现有的免疫剂量和程序下,犬用犬瘟热等六联弱毒疫苗难以有效刺激大熊猫产生CDV中和抗体。

迁入都江堰野放中心的大熊猫野化放归个体皮质醇水平变化初步研究

动物生存环境的变化引起内分泌变化,而其程度则是动物适应环境的一种能力体现。以迁入成都大熊猫繁育研究基地都江堰野放繁育研究中心6只亚成年大熊猫个体为研究对象,利用酶联免疫吸附法检测其粪便中皮质醇激素,验证饲养环境改变是否引起其激素水平变化。研究发现:一方面,研究个体在迁入后的皮质醇水平较迁入前均呈明显下降趋势;另一方面,不同年龄和性别间,年龄越小则变化越明显,说明环境变化可能是引起其皮质醇变化的原因之一,即年龄越小这种环境引起的应激性越明显。因此,本研究亦可以为今后圈养大熊猫野化放归过程面临的环境适应性提供第一手的资料,进而为合理规划下一阶段大熊猫野化放归提供技术支持。

应用ITS-2基因对小熊猫源恶丝虫虫种的鉴定

为探讨采自小熊猫的恶丝虫虫种的分类地位,测定了四川雅安地区犬源犬恶丝虫和成都及重庆两地小熊猫源恶丝虫的核糖体第二内转录间隔区（ITS-2）基因序列并进行了比对分析。结果显示,犬源犬恶丝虫和小熊猫源恶丝虫与来自中国台湾、印度的犬恶丝虫的ITS-2基因序列的同源性高达98.0%-100%。同时,构建的NJ树和MP树均显示不同宿主和不同地区的犬恶丝虫和小熊猫源恶丝虫聚类形成一个支系。表明,小熊猫源恶丝虫应为犬恶丝虫,而前苏联学者定名的小熊猫恶丝虫应为犬恶丝虫的同物异名虫种。

大熊猫感染性泌尿生殖道血尿症病原—肺炎克雷伯氏杆菌

对一只长期在秋冬季节交替或炎热夏季发生血尿症大熊猫的尿液进行细菌的分离、培养,并对分离株进行了小白鼠毒性试验和药敏试验。通过对分离菌株的染色镜检和生化试验,最后确定为肺炎克雷伯氏杆菌。作者对肺炎克雷伯氏杆菌引发大熊猫的疾病类型进行了探讨,指出肺炎克雷伯氏杆菌除可引发大熊猫肠炎和败血症外,还可导致大熊猫发生以排血样尿液为主要临床表现的泌尿生殖道感染。

消毒剂Neopredisan135-1对大熊猫西氏贝蛔虫卵的体外杀灭效果观察

西氏贝蛔虫是危害圈养大熊猫的主要寄生虫,西氏贝蛔虫卵是圈养大熊猫重复感染该蛔虫的来源,虫卵在外界环境中有着极强的生存能力。测定了消毒剂Neopredisan135-1对西氏贝蛔虫卵的体外杀灭效果,为圈养大熊猫西氏贝蛔虫的防控提供参考。将分离自大熊猫新鲜粪样中的西氏贝蛔虫卵通过消毒剂Neopredisan135-1不同浓度(2.5、5、10、20、40mg/mL)与不同作用时间(30、60、90、120min)处理后,将处理后的蛔虫卵和未用消毒剂处理的平行对照组一并置于25mg/mL的重铬酸钾溶液28℃温箱内,培养后在显微镜下观察虫卵的发育与死亡情况。结果发现,2.5mg/mL浓度组处理虫卵30、60、90min,其虫卵杀灭率均在50%左右;5mg/mL浓度组处理虫卵30min和60min,其虫卵杀灭率在74.71%～87.64%;而在10、20、40mg/mL浓度下处理30min其杀灭率均达到90%以上,10、20、40mg/mL的Neopredisan135-1对西氏贝蛔虫卵均具有较强的杀灭作用。考虑到成本、杀灭效果以及环境等因素,消毒剂Neopredisan135-1的推荐使用浓度为20mg/mL。

大熊猫慢性营养不良综合征病因学研究

采集4只患慢性营养不良综合征大熊猫的血液、粪便和结肠黏膜分别开展包括血液学、细菌学、病毒学、寄生虫学和病理组织学领域的检测,旨在找到大熊猫慢性营养不良综合征的发病原因。研究结果显示:(1)明显的嗜酸性粒细胞血症(4/4);(2)未检出相关致病性病原;(3)结肠黏膜病理组织学检查:黏膜固有层几乎无法看到正常状态所见中性粒细胞和淋巴细胞,淋巴管明显增大且淋巴管内有很多黏液,黏膜上皮完整、肠腺大小未见改变,黏膜固有层大量结缔组织增生。据血液学、病原学和结肠黏膜病理组织学检查结果,并结合野生大熊猫食性特点和圈养大熊猫人工精饲料的配方组成,推断大熊猫慢性营养不良综合征与人工精饲料中的动物性蛋白质密切相关。

犬恶丝虫天冬氨酸转氨酶基因的原核表达及分析

目的了解犬恶丝虫天冬氨酸转氨酶(AspAT)基因特征及其在虫体的定位,对犬恶丝虫AspAT(DiAspAT)基因进行了原核表达和免疫荧光定位分析。方法从犬恶丝虫成虫转录组数据库中筛选到DiAspAT基因序列,通过RT-PCR方法克隆DiAspAT基因,利用相关软件进行生物信息学分析;构建原核表达载体pET32a(+)-AspAT并进行诱导表达;表达产物经Ni-NTA层析柱纯化后进行Western blotting分析;通过免疫组化技术观察DiAspAT蛋白在犬恶丝虫虫体内的定位分布。结果 DiAspAT基因的ORF框长度为1 221bp,编码406个氨基酸,理论相对分子量45.731 8kDa,等电点为8.05,表达的重组蛋白约为64kDa;Western blotting显示AspAT重组蛋白能被犬恶丝虫阳性血清识别;间接免疫荧光染色结果显示,DiAspAT在犬恶丝虫的侧索、皮下组织、肌细胞、假体腔壁、子宫及肠上皮、发育的胚胎中分布。结论成功克隆和表达了DiAspAT基因,并完成DiAspAT在雌性犬恶丝虫成虫上的定位,为进一步了解犬恶丝虫的生理代谢及犬恶丝虫病的诊断和防控奠定基础。

犬恶丝虫核苷二磷酸激酶(NDPK)基因的原核表达及其免疫荧光定位

对犬恶丝虫核苷二磷酸激酶(NDPK)基因的基本特征进行探究,并评估其诊断价值,旨在为犬恶丝虫病的诊断提供依据。本研究原核表达了Di-NDPK,通过生物信息学、免疫印迹和免疫荧光组化分析了该蛋白的基本特征,通过检测犬恶丝虫阳性血清评估了rDi-NDPK的诊断价值。免疫印迹显示,Di-NDPK具有良好的反应原性,免疫荧光组化显示,Di-NDPK在犬恶丝虫的侧索及肠上皮细胞和肠腔中分布。间接ELISA显示,该方法的敏感性为66.7%(16/24),特异性为38.9%(14/36),其中与犬细粒棘球蚴病阳性血清、犬钩虫病阳性血清以及犬弓首蛔虫病阳性血清发生交叉反应。Di-NDPK是一个分泌蛋白,但不适合作为犬恶丝虫病的诊断候选抗原。

幼龄大熊猫轮状病毒感染性腹泻的防治

对幼龄大熊猫轮状病毒感染性腹泻的发病特点、临床表现、流行病学资料进行了简要介绍,通过多年对该病的临床治疗与跟踪观察,对幼龄大熊猫轮状病毒感染性腹泻的临床治疗方法与预防措施进行了详细阐述。

大熊猫双胞胎发生相关因素的分析研究

本研究分析了年龄、胎次、妊娠天数、配种次数与方式、雌激素等因素与大熊猫双胎发生之间的关系。结果显示,不同年龄阶段的双胎发生率的差别无统计学意义(P>0.05);不同胎次的双胎发生率的差别具有统计意义(P<0.05);产单胎的大熊猫平均妊娠天数(142.33 d±21.03 d)显著大于产双胎的妊娠天数(131.63 d±25.10 d)(P<0.05);不同的配种次数对双胎率的影响无统计学意义(P>0.05);不同配种方式对双胎率的影响具有统计学意义(P<0.05),由自然交配与人工授精共同采用的混合配种方式的胎产仔数(1.62只±0.49只)显著高于自然交配的胎产仔数(1.41只±0.50只)(P<0.05);产双胎的雌激素水平在-130 h至+25 h内极显著高于产单胎的雌激素水平(P<0.001),并且产双胎的雌激素峰值水平(221.82 ng/mg±36.14 ng/mg)极显著高于产单胎的雌激素峰值水平(143.33 ng/mg±16.95 ng/mg)(P<0.01)。

重组Bt伴胞晶体蛋白Cry5B对大熊猫西氏贝蛔虫的离体杀灭活性观察

大熊猫是中国特有的珍稀物种,西氏贝蛔虫是危害大熊猫最为严重的一种肠道寄生性线虫。针对目前长期药物驱虫导致的大熊猫西氏贝蛔虫耐药及生态污染问题,苏力菌(Bacillus thuringiensis,Bt)晶体蛋白Cry5B因其特异的线虫杀灭活性,是一种理想的新型抗蛔虫病药物候选。本研究拟通过原核表达方式产生Bt YBT-1518重组Cry5B蛋白,并评价其对大熊猫西氏贝蛔虫的离体杀灭活性。结果表明,BtYBT-1518 Cry5B由1246个氨基酸组成,分子量(MW)为139.889 kDa,包含Endotoxin_N、δ-Endotoxin_C、Endotoxin_C、Endotoxin_C2、Cry1Ac_D5结构域,与BtPS86Q3晶体蛋白关系最近。重组Cry5B蛋白在IPTG浓度为1.4 mmol/L时表达量最大,表达于菌体上清液。离体杀灭活性实验表明,重组Cry5B蛋白的大熊猫西氏贝蛔虫抑杀效果具有显著的剂量依赖性,对肠道L4期幼虫第3天的ED_(50)值为14.5μg/mL,第7天的ED_(50)值为0.16μg/mL;但对成虫更敏感,仅作用2 d便可显著下降虫体活性,直至死亡,证实重组Cry5B蛋白对大熊猫蛔虫具有较强的毒杀作用。这些结果为后续论证Bt YBT-1518重组Cry5B蛋白可以作为一种新型、环保的抗大熊猫西氏贝蛔虫病药物提供了数据参考。

一例大熊猫腹腔镜及上消化道手术的麻醉管理

从麻醉前准备、麻醉方案、麻醉监护、输液管理等方面介绍了1例大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)腹腔镜及上消化道手术的麻醉管理,总结了麻醉效果及注意事项,可为大熊猫的胃肠道手术麻醉管理提供参考。