双氢青蒿素对前列腺癌PC-3细胞自噬的诱导作用及其机制

目的探讨双氢青蒿素(DHA)对前列腺癌PC-3细胞的自噬诱导作用及其机制。方法用0、12.5、25、50、100μmol/L DHA处理PC-3细胞,采用CCK-8法检测细胞活力,克隆形成实验检测细胞增殖能力。取PC-3细胞,设置对照组(不做处理)、DHA组(50μmol/L DHA处理48h)、自噬抑制剂3-MA组(5mmol/L 3-MA处理48h)、DHA+3-MA组(50μmol/L DHA+5mmol/L 3-MA处理48h),采用Western blotting和RT-qPCR检测自噬相关蛋白[微管相关蛋白轻链3B(LC3B)、酵母Atg6同源物(Beclin-1)]的表达情况,透射电镜观察自噬小体形成情况,使用自噬双标慢病毒mCherry-GFP-LC3B转染PC-3细胞检测自噬流变化,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。设置对照组(不做处理)、DHA组(50μmol/L DHA处理48h)、ROS抑制剂NAC组(5mmol/L NAC处理48h)、DHA+NAC组(50μmol/L DHA+5mmol/L NAC处理48h),采用Western blotting检测ROS/AMPK/mTOR信号通路相关蛋白的表达。用50μmol/L DHA处理PC-3细胞48h后提取总蛋白,分成Input组(全蛋白裂解液)、IP组(加入Beclin-1抗体)、IgG组(加入同等质量的IgG),采用免疫共沉淀(Co-IP)实验检测Beclin-1与Vps34、Bcl-2及HMGB1蛋白的相互作用。结果CCK-8法检测结果显示,PC-3细胞存活率随着DHA浓度的升高而降低,且呈剂量和时间依赖性(P<0.05);DHA作用24、48、72h的半数抑制浓度(IC50)分别为97.12、57.10、29.35μmol/L,据此选择50μmol/L DHA作用48h进行后续实验。克隆形成实验结果显示,PC-3细胞克隆形成率随着DHA浓度的升高而明显降低(P<0.01)。Western blotting和RT-qPCR检测结果显示,与对照组比较,DHA组PC-3细胞中Beclin-1、LC3B mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与DHA组比较,DHA+3-MA组PC-3细胞中Beclin-1、LC3B mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。透射电镜观察可见DHA组PC-3细胞中出现明显的自噬小体,且自噬小体数较对照组明显增多(P<0.05)。mCherry-GFP-LC3B慢病毒转染实验结果显示,与对照组比较,DHA组每细胞红黄斑点比增高(P<0.01),DHA+3-MA组每细胞红黄斑点比降低(P<0.01)。与DHA组比较,DHA+3-MA组细胞存活率降低,凋亡率增高(P<0.01)。与对照组比较,DHA组PC-3细胞中p-mTOR蛋白相对表达水平降低(P<0.05),p-AMPK蛋白相对表达水平升高(P<0.01);与DHA组比较,DHA+NAC组p-mTOR蛋白相对表达水平升高(P<0.01),p-AMPK蛋白相对表达水平降低(P<0.01)。Co-IP实验结果显示,DHA处理后Beclin-1与Bcl-2的作用减弱,与Vps34、HMGB1的结合增强。结论DHA可诱导前列腺癌PC-3细胞发生自噬,其机制可能与调控自噬相关基因Beclin-1、LC3及ROS/AMPK/mTOR信号通路有关。

PBL教学模式应用于生物医学电镜技术教学的构想

基于问题式学习（problem-based learning,PBL）是以学生为中心,以问题为导向的教学方法,1969年由美国学者Barrows首创,目前已在欧美等发达国家的高等教育中广泛应用。它强调在学习中设置问题情境,

镉对大鼠输精管损伤及锌保护的超微结构与葡萄糖-6-磷酸酶细胞化学的研究

目的研究小剂量氯化镉对大鼠输精管近、远段的影响及锌的保护作用。方法用１％氯化镉（２ｍｇ／ｋｇ体重）腹腔注射雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠后４ｈ到６０ｄ及镉、锌联合注射后３ｄ、１５ｄ取材。采用电镜观察和葡萄糖－６－磷酸酶（Ｇ－６－Ｐａｓｅ）电镜细胞化学定量研究。结果镉注射４ｈ后，输精管主细胞出现超微结构改变，３～７ｄ改变最明显，１５ｄ后有所减轻，６０ｄ后基本恢复正常。主细胞的主要改变为线粒体肿胀，内质网扩张及髓样结构增多。镉注射后４ｈ，远段主细胞Ｇ－６－Ｐａｓｅ反应产物明显减少，３ｄ最少，１５ｄ反应产物增多。镉、锌联合注射后超微结构及Ｇ－６－Ｐａｓｅ活性损伤均较单纯镉组轻。结论锌对镉所致大鼠输精管主细胞超微结构损伤及远段主细胞Ｇ－６－Ｐａｓｅ活性影响有明显保护作用。

镉对大鼠前列腺基细胞损伤及锌保护的超微结构观察

目的 研究小剂量氯化镉对大鼠前列腺基细胞的影响及锌的保护作用。方法 小剂量氯化镉（２ｍｇ／ｋｇ体重）及锌腹腔内注射雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠后４小时到６０天及镉锌联合注射后３天、１５天取材，用透射电镜观察其超微结构改变。结果 镉注射后４小时基细胞与主细胞之间间隙稍有扩大，镉注射后２４小时，基细胞出现较明显的超微结构改变，３天伴有基细胞核的变化１５天基本恢复，６０天基细胞生长活跃，数量较少。结论 镉对大鼠前列腺基细胞有直接损伤作用，锌对镉所致基细胞超微结构改变有一定保护作用。

镉对大鼠前列腺损伤及锌保护的超微结构与硫胺素焦磷酸酶细胞化学的研究

目的 研究镉对大鼠前列腺腹侧叶的超微结构影响及锌保护作用。 方法 小剂量氯化镉 (2 m g/ kg体重 )及锌腹腔内注射后用透射电镜观察及硫胺素焦磷酸酶 (TPPase)电镜细胞化学定量分析。 结果 镉注射后 4h,前列腺上皮主细胞出现轻微的超微结构改变 ,3～ 7d呈明显退变 ,15 d退变减轻 ,出现粗面内质网 (RER)形成的同心圆性小体 ,30～ 6 0 d基本恢复正常。镉注射后 4h,TPPase反应产物较正常组减少 ,3d和 15 d进一步减少。锌保护组较相应的单纯镉组的超微结构损伤轻 ,且 TPPase反应产物也较多。 结论 镉对大鼠前列腺腹侧叶上皮主细胞早期直接损伤较轻 ,所致 TPPase反应产物减少明显。锌对镉所致主细胞超微结构损伤及

尖锐湿疣的电镜诊断

目的:观察尖锐湿疣疣体细胞和病毒的超微结构,为临床诊断提供确切的形态学依据;评价电子显微镜诊断尖锐湿疣的价值。方法:采用透射电镜观察尖锐湿疣组织超薄切片。结果:疣体上皮棘细胞、基细胞明显增生,可见成群的挖空细胞和肿胀坏死细胞。在少数感染细胞核内可查见呈晶格状排列或散在分布的人乳头瘤病毒颗粒(HPV)。结论:查见病毒颗粒对尖锐湿疣有明确诊断价值,但阳性率较低;上皮细胞增生性改变结合典型的挖空细胞对尖锐湿疣的诊断有重要参考价值。

脊柱骨巨细胞瘤的病理研究

本文对7例脊柱原发性骨巨细胞瘤(GCT)进行了光镜(LM),组化和免疫组化研究,其中2例进行了电镜(EM)观察。LM和EM显示GCT由单个核细胞(MC)和多核巨细胞(MGC)组成。MC包括成纤维细胞(FB)、组织细胞(HC)、原始间叶细胞、中间型细胞、黄色瘤细胞和肌纤维母细胞(MFB),并见原始间叶细胞过渡为不同分化的FB和HC。MGC由MC融合而成,多数为HC型,少数为兼有FB和HC的混合型。我们认为GCT起源于原始间叶细胞;HC、FB和MFB属肿瘤性细胞,MGC属反应性细胞。

超声治疗前后外阴白色病变的超微形态比较研究

目的:了解超声治疗对外阴白色病变患处上皮细胞及真皮组织超微结构形态的影响。方法:30例患者分别做治疗前及治疗后3～6月的外阴皮肤组织活检,用光镜和透射电镜观察。结果:治疗前,表皮显示不同程度的上皮增生或萎缩并伴过度角化;细胞间隙增大,桥粒减少;细胞内黑色素颗粒减少,线粒体内室肿胀和局部胞质溶解;黑色素细胞少见;真皮内毛细血管减少,管腔多呈皱缩状;表皮及真皮内常见淋巴细胞浸润。治疗后,病变皮肤组织呈不同程度恢复,表皮细胞排列整齐,桥粒及胞质内黑色素颗粒均有不同程度增加,基底层常见黑色素细胞;真皮内成纤维细胞多见,毛细血管增多且管腔形态正常;浸润的淋巴细胞明显减少。结论:超声治疗可使患处上皮细胞及真皮组织的超微结构和色素代谢趋于恢复正常。

流式荧光杂交法检测高危型人乳头瘤病毒的临床价值

目的:探索流式荧光杂交法检测高危型人乳头瘤病毒的临床价值。方法:收集山西省子宫颈癌高发区妇女的宫颈脱落细胞样本638例,应用流式荧光杂交法和第二代杂交捕获实验(Hybrid Capture(2 Assay,hc2)进行检测分型,根据病理诊断对检测结果进行评价,对该人群中高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的感染情况和型别分布进行统计学分析,并对这2种方法作一致性检验。结果:流式荧光杂交法检测的灵敏度、特异度、准确度分别为77.78%、93.59%和92.42%,阴、阳性预测值分别为98.13%和49.30%。该人群中高危型HPV的感染率为11.7%,非瘤样病变和子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)1级(CIN1)中,HPV16和HPV52型为主要感染型别;子宫颈上皮内瘤变2级(CIN2)中,HPV16和HPV58型较为常见;子宫颈上皮内瘤变3级(CIN3)和子宫颈癌以HPV16型感染为主;HPV16、52、58型的感染率与病变进展呈正相关(P<0.01)。将流式荧光杂交法与hc2的检测结果作一致性检验:Κ=0.60。结论:流式荧光杂交法检测高危型HPV的特异度很高,灵敏度达77.78%,与hc2相比,两者的一致性较好;但还需进一步改进方法以提高检测的灵敏度,增加可分型的HPV亚型数。

离心速度及时间对培养细胞透射电镜样品制备的影响

目的:探讨消化离心法中不同的离心条件对培养细胞超微结构的影响,寻找最佳的离心速度及时间。方法:将培养细胞消化后分成不同的离心速度和时间组,电镜下比较各组细胞超微形态的变化。结果:当离心速度低于800r/min,8min时,无法收集到足够的细胞量。离心速度2000r/min,15min时细胞挤压变形,胞浆出现撕裂等人工假象。离心速度在800～1500r/min,8～15min时制样较容易,细胞超微结构保存良好。结论:消化离心法制备培养细胞透射电镜样品,其最佳的离心速度和时间是800～1500r/min,8～15min。

双氢青蒿素对前列腺癌裸鼠种植瘤Bcl-2和Bax表达的调控

目的研究双氢青蒿素(DHA)诱导前列腺癌细胞凋亡作用及其机制。方法采用人前列腺癌PC-3细胞株建立裸鼠种植瘤模型,将20只模型鼠随机平均分为对照组、溶剂(DMSO)组、DHA200μmol/kg体质量组和DHA100μmol/kg体质量组,经13d干预后,电镜观察肿瘤组织形态学表现;免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达水平;TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡。结果与对照组及DMSO组比较,DHA治疗组电镜观察肿瘤组织中散在凋亡细胞及凋亡小体;免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2表达减弱、Bax表达增强,差异均有统计学意义(P<0.05);TUNEL检测结果显示肿瘤组织细胞凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论DHA具有较强的诱导前列腺癌细胞凋亡作用,这种作用可能是通过下调Bcl-2和上调Bax表达实现的。

双氢青蒿素对前列腺癌裸鼠种植瘤生长及VEGF表达的影响

目的:研究双氢青蒿素(DHA)对前列腺癌PC-3细胞裸鼠种植瘤的抑制作用及对VEGF表达的影响,并探讨其作用机制.方法:采用人前列腺癌PC-3细胞建立裸鼠种植瘤模型,20只模型鼠随机分为对照组;二甲基亚砜(DMSO)溶剂组(DMSO1mL/kg);DHA实验1组(DHA100μmol/kg);DHA实验2组(DHA200μmol/kg).经13d干预后,计算抑瘤率.采用光镜及电镜观察肿瘤组织形态学变化;采用免疫组织化学法检测VEGF的表达水平;采用体视学分析肿瘤微血管密度(MVD).结果:DHA实验1,2组抑瘤率分别为63.186%,69.221%.光镜及电镜下观察可见DHA实验1组和实验2组肿瘤组织内凋亡细胞明显增多,出现典型的凋亡小体.免疫组化结果显示VEGF表达DHA实验1组和实验2组均低于对照组及DMSO溶剂组(P<0.05),但2个DHA实验组组间相比较差异无统计学意义;DMSO溶剂组与对照组组间相比较差异也无统计学意义.2个DHA实验组MVD均低于对照组(P<0.05),但2个DHA实验组之间相比较差异无统计学意义;DMSO溶剂组与对照组组间相比较差异也无统计学意义.结论:DHA具有较强的抗肿瘤作用,其机制与下调凋亡相关基因VEGF有关.

体外循环中心肌组织胞浆型磷脂酶A_2-γ亚型激活与心肌细胞损伤关系的研究

目的探讨先天性心脏病室间隔缺损修补术后心肌组织胞浆型磷脂酶A2γ亚型(cPLA2γ)的激活与心肌细胞超微结构改变的关系。方法取12例室间隔缺损手术患儿体外循环(CPB)前后右心耳处心肌组织,通过逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法测定心肌组织cPLA2γ基因表达水平;应用凝胶图像分析系统对CPB前后心肌组织cPLA2γ基因表达强度进行半定量分析;通过透射电镜观察心肌细胞超微结构的改变。结果CPB后心肌组织cPLA2γ基因表达明显上调(P<0.05)。心肌组织超微结构的改变包括心肌细胞质膜下水肿,核异染色质边集、肌浆网扩张,线粒体代偿性增生并伴有中到重度内室肿胀、肌丝灶性溶解等。结论体外循环后心肌组织cPLA2γ激活可能导致了心肌细胞及细胞器膜完整性破坏、能量代谢及收缩功能障碍。

双氢青蒿素对前列腺癌细胞迁移和侵袭能力影响及机制的研究

目的:探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人前列腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响及可能机制。方法:人前列腺癌细胞株PC-3与DU145经不同浓度(0、25、50、100μmol/L)的DHA处理48 h,运用细胞划痕和细胞侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力。采用荧光定量PCR和Weston blot检测波形蛋白(Vimentin)和上皮-钙粘连素(E-Cadherin,CDH1)基因和蛋白表达水平。结果:不同浓度DHA均能显著抑制PC-3和DU145迁移和侵袭能力(P<0.001)。不同浓度DHA均能明显下调Vimentin m RNA和蛋白的表达(P<0.05),上调CDH1 m RNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论:双氢青蒿素能显著抑制人前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力,其可能机制是DHA干扰Vimentin表达及诱导E-Cadherin表达,且高浓度DHA可能存在其他途径抑制前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力。

他汀治疗对冠心病患者血管内皮功能影响及其预后

目的探讨阿伐托他汀对冠心病患者的血浆内皮素(ET)和降钙素基因相关肽(CGRP)的影响。方法将100例冠心病患者随机分为两组各50例,分别用常规治疗及阿伐托他汀加常规联合治疗,采用放免法观察治疗前后患者ET及CGRP含量。结果较常规治疗组相比,联合使用阿伐托他汀治疗后患者ET明显下降,CGRP明显升高。结论阿伐托他汀能显著改善ET、CGRP代谢失衡状况。

双氢青蒿素诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的形态学研究

目的:研究双氢青蒿素(DHA)诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡作用,并观察其形态学变化。方法:以前列腺癌PC-3细胞为研究对象,在体外经不同浓度的DHA处理48小时后,扫描电镜(SEM)观察细胞凋亡;并建立PC-3细胞裸鼠种植瘤模型,20只模型鼠随机分为对照组、溶剂组、DHA大剂量组及DHA小剂量组,经13天干预后,透射电镜(TEM)观察肿瘤组织形态学变化,体视学分析肿瘤微血管密度(MVD)。结果:PC-3细胞经DHA处理后,SEM观察到典型的凋亡细胞;裸鼠种植瘤经治疗后,TEM观察肿瘤组织中散在凋亡细胞及凋亡小体,且DHA大小剂量组MVD均低于对照组(P<0.05)。结论:DHA具有较强的抗肿瘤作用,其作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。

CHOP在内质网应激介导凋亡中的作用

细胞凋亡（apoptosis）又称为程序性细胞死亡（programmed cell death,PCD）,是机体细胞在正常生理或病理状态下及在相关基因调控下发生的一种细胞主动性死亡方式。它是机体用来去除老化细胞及具有潜在性异常生长细胞的一种重要机制，是确保机体正常发育、维持机体正常生理过程所必需的。细胞增殖和凋亡的调控途径与许多疾病（如感染性疾病、艾滋病、自身免疫性疾病、神经性／神经发育性疾病，特别是肿瘤发生等）的病因和发病机制有关。

双氢青蒿素对前列腺癌PC-3细胞体内生长及Caspase-3表达的影响

目的:研究双氢青蒿素(DHA)对前列腺癌PC-3细胞裸鼠种植瘤生长的抑制作用及对半胱天冬酶-3(Caspase-3)表达的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:采用人前列腺癌PC-3细胞株建立裸鼠种植瘤模型,将20只模型鼠随机分为对照组,二甲基亚砜(DMSO)溶剂组,DHA 0.1,0.2 mmol/kg组.各组经13 d干预后,计算抑瘤率;光镜及电镜观察肿瘤组织形态学变化,以Hoechst 33258染色,荧光显微镜观察细胞凋亡,免疫组织化学法检测Caspase-3的表达水平.结果:DHA 0.1,0.2 mmol/kg组瘤质量明显<对照组及DM-SO溶剂组(P<0.05),DHA 0.1,0.2 mmol/kg组抑瘤率分别为69.221%,63.186%.光镜及电镜可观察到典型的凋亡细胞和凋亡小体;Hoechst 33258染色可见DHA 0.1,0.2 mmol/kg组凋亡细胞明显增多,其凋亡细胞密度显著增大(P<0.05);免疫组化结果显示,DHA 0.1,0.2 mmol/kg组Caspase-3表达明显升高(P<0.05).结论:DHA能够抑制前列腺癌PC-3细胞裸鼠种植瘤的生长,其机制可能与上调凋亡相关基因Caspase-3表达有关.