TCAB1在宫颈鳞癌中的表达及其与患者术后临床病理特征及复发转移的关系

目的探讨端粒酶卡哈尔体蛋白1(TCAB1)在宫颈鳞癌患者中的表达,分析其与术后临床病理特征及复发转移的关系。方法选取2013年1月至2018年8月在海南医学院第二附属医院病理学确诊的104例宫颈鳞癌患者作为研究对象,采用免疫组化法检测TCAB1蛋白表达情况。结果与TCAB1蛋白阴性组比较,TCAB1蛋白阳性组Ki-67表达水平更高,差异具有统计学意义(P<0.05)。TCAB1蛋白阳性患者的中位无进展生存(PFS)时间为36个月,5年PFS为78.7%;TCAB1蛋白阴性患者的中位PFS时间为52个月,5年PFS为97.1%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论TCAB1蛋白可能促进宫颈鳞癌增殖,是宫颈鳞状细胞癌复发转移的不良预测因子,可望成为减少宫颈鳞癌复发转移的治疗靶点。

类表皮生长因子域7促进颅脑损伤模型大鼠脑微循环的修复与重建

背景:研究表明血管内皮细胞受损与创伤性脑损伤的血脑屏障功能障碍密切相关,类表皮生长因子域7(EGF-likedomain7,EGFL7)是促进血管生成的重要因子,尚不可知EGFL7能否通过激活脑血管新生从而促进大脑创伤修复。目的:探讨EGFL7促进脑损伤后大鼠损伤脑组织中血管新生的具体机制。方法:健康成年雄性SD大鼠42只,随机分为2组,颅脑损伤组(n=36)运用改良Feeney法撞击大鼠脑硬膜建立颅脑损伤模型,假手术组(n=6)仅暴露完整脑硬膜;依照损伤后取标本时间分为颅脑损伤1,6,24h以及3,7,14d共6个亚组,每亚组各6只。经过神经功能损伤评分可用后,取挫伤灶及周围脑组织进行后续实验。另取18只SD大鼠随机分为3组,建立颅脑损伤模型,颅脑损伤1h后运用立体定向注射仪分别向大鼠脑室内注射腺病毒rAd-vector、rAd-EGFL7及rAd-EGFL7+PI3K/Akt通路抑制剂LY294002,每组6只。干预12h后取材检测。结果与结论:①RT-PCR、Westernblot及免疫组织化学染色检测显示:颅脑损伤大鼠脑组织中EGFL7、CD34表达显著上调,且随损伤后时间的增加而上调,EGFL7在颅脑损伤3d达到最大(P<0.05),EGFL7与CD34两者的表达趋势相一致,微血管生成数目在颅脑损伤7d到达最高;②大鼠颅脑损伤后1h颅内rAd-EGFL7微量注射12h后,损伤脑组织中EGFL7、CD34表达显著上调(P<0.05),同时pAkt、cyclinD1显著增加,FOXO1显著下降(P<0.05);③大鼠颅脑损伤后颅内同时注射rAd-EGFL7和PI3K/Akt信号通路抑制剂12h后,EGFL7表达变化不明显,但CD34表达显著受抑制(P<0.05),同时微血管生成数目显著减少(P<0.05);④结果证实,EGFL7在脑损伤组织中表达上调,其高表达可能与损伤脑组织中血管生成相关。EGFL7过表达激活PI3K/Akt信号通路从而促进损伤脑组织中的血管新生。

早期宫颈癌手术后化疗和同步放化疗对患者性生活质量的影响

目的探讨早期宫颈癌手术后同步放化疗和化疗对患者性生活质量的影响。方法选择2016年2月至2017年10月海南医学院第二附属医院行广泛全子宫切除术+盆腔淋巴结清扫术的早期宫颈癌(ⅠB期-ⅡA期)患者84例。使用数字表法将患者随机分为术后同步放化疗组和化疗组,每组42例。比较两组术前和治疗6月后激素以及性生活质量评分。结果术前两组外周血FSH、LH和E2无显著性差异(P>0.05),治疗6月后化疗组FSH和LH显著低于同步放化疗组(P<0.01),E2显著高于同步放化疗组(P<0.01)。治疗6月后化疗组性功能或阴道功能和性生活相关困扰评分显著低于同步放化疗组(P<0.05),性活跃度和性生活愉悦感评分显著高于同步放化疗组(P<0.05)。同步放化疗组和化疗组1年后复发转移率为4.8%(2/42)和7.1%(3/42),同步放化疗组和化疗组1年生存率为92.9%(39/42)和95.2%(40/42),两组间1年后复发转移率和生存率无显著性差异(P>0.05)。结论本研究观察到早期宫颈癌根治术后高危患者实行化疗对患者性生活质量影响较小,对于年轻的患者是一个可供选择的辅助治疗方法。

新辅助同步放化疗对食管癌腔镜术患者肿瘤组织细胞活性的影响

目的探讨新辅助同步放化疗对食管癌腔镜术患者肿瘤组织细胞活性的影响。方法选取2014年3月至2016年3月海南医学院第二附属医院收治的食管癌患者116例,根据随机数字表法分成两组,各58例。对照组患者采用食管癌腔镜术治疗,观察组患者在食管癌腔镜术前进行新辅助同步放化疗。比较两组术后3个月的治疗效果,分别在新辅助同步放化疗前、疗程结束后检测患者的肿瘤组织细胞活性,包括食管癌细胞DNA指数(DI)、细胞增殖指数(PI)、S期细胞百分率(SPF)。利用流式细胞仪测定两组患者免疫功能,包括CD3+、CD4+、CD8+细胞含量。患者术后随访24个月,分析随访期间的局部复发率、远处转移率以及生存率。结果观察组总缓解率为77. 59%,显著高于对照组的60. 34%(P <0. 05)。观察组治疗后PI、SPF、DI低于治疗前及对照组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。观察组治疗后血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平高于治疗前及对照组,血清CD8+水平低于治疗前及对照组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。观察组局部复发率为20. 69%,显著低于对照组的39. 66%(P <0. 05);观察组24个月内生存率为63. 79%,显著高于对照组的44. 83%(P <0. 05)。结论在食管癌腔镜术前行新辅助同步放化疗,能抑制肿瘤细胞活性,改善机体免疫,降低远期复发率,提高生存率。

类表皮生长因子域7在创伤性脑损伤后脑组织中的表达变化及意义

目的探讨类表皮生长因子域(EGFL)7在创伤性脑损伤(TBI)后脑组织中的表达变化及意义。方法研究采用大鼠TBI模型,分别通过Western印迹分析和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测TBI后1 h、6 h、24 h、3 d、7 d和14 d的EGFL7表达。采用免疫组化检测挫伤周围皮层和海马区的EGFL7、Ⅰ型跨膜蛋白(CD34)表达。应用Transwell小室技术研究EGFL7基因沉默对神经干细胞(NSC)和内皮细胞(HUVEC)共培养系统的CD34、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化(p)-AKT蛋白表达。结果EGFL7 mRNA和蛋白水平在TBI后24 h显著升高(P<0.05),第3天达峰值,并持续至少14 d(P<0.05)。免疫组化检测结果显示,与假手术组相比,TBI大鼠挫伤周围皮层和海马区EGFL7和CD34阳性细胞显著增加(P<0.01)。EGFL7-siRNA表达载体转染组NSC-HUVEC共培养系统的CD34、AKT、p-AKT、PI3K蛋白相对表达均较对照组显著降低(P<0.05)。结论EGFL-7可能通过PI3K/AKT通路参与TBI后神经干细胞的血管生成。

放射性脑损伤与缺血缺氧性脑损伤细胞差异分子靶标筛选

目的探讨放射性脑损伤(RBI)与缺血缺氧性脑损伤(HIBI)细胞差异分子靶标。方法从GEO数据库中找到相应的数据集后使用GEO2R筛选差异表达基因。并对放射和对照、缺氧缺血及对照之间的通路富集情况做KEGG和GO分析。而后使用PPI分析找出几个关键基因及其蛋白靶标。而后以人星型胶质细胞作为研究对象构建RBI及HIBI模型。在损伤刺激后16 h收集各实验组总细胞和上清中漂浮的坏死细胞,通过RT-PCR和蛋白印迹法分析照射前后以及缺血缺氧处理前后关键基因及其蛋白表达水平之间的差异。结果照射与对照星型胶质细胞共筛选出差异基因237个,其中上调基因95个,下调基因142个。KEGG富集分析结果显示,照射后星型胶质细胞与对照细胞有20条显著差异性富集信号通路(P<0.05)。GO功能分析照射后星型胶质细胞与对照细胞差异显著富集条目62个,其中20个(30.8%)与生物过程(BP)相关,22个(35.4%)与细胞组分(CC)相关,20个(30.8%)与分子功能(MF)相关。缺血缺氧处理与对照星型胶质细胞共筛选出差异基因67个,其中上调基因38个,下调基因29个。KEGG通路富集分析结果显示,缺血缺氧处理后星型胶质细胞与对照细胞有22条显著差异性富集信号通路(P<0.05)。通过差异表达基因的GO功能分析得到显著富集条目35个,其中15个(42.8%)与BP相关,10个(28.6%)与CC相关,10个(28.6%)与分子功能MF相关。STRING分析发现照射后差异表达基因的关键节点基因为EGFR,缺血缺氧处理后差异表达基因的关键节点基因为PHD3。照射组EGFR基因mRNA及蛋白表达水平均显著高于其他两组(P<0.05),缺氧组PHD3基因mRNA及蛋白表达水平均显著高于其他两组(P<0.05)。结论EGFR、PHD3在放射及缺氧缺血处理后的星型胶质细胞中表达有显著差异。

骨髓间充质干细胞调节Notch表达可有效治疗放射性唾液腺损伤

背景:胆碱能受体激动剂可促进放射性唾液腺损伤患者残存唾液细胞的分泌,但长期用药存在严重的不良反应且对严重放射性唾液腺损伤的治疗效果有限。骨髓间充质干细胞是一种具有多向分化潜能和几乎无限增殖能力的细胞,具备治疗放射性唾液腺损伤的潜力。目的:探索骨髓间充质干细胞修复放射性唾液腺损伤的效果和机制。方法:①从小鼠骨髓中提取骨髓间充质干细胞,采用3D共培养系统,将其与第2代唾液腺腺泡细胞共培养24 h;②取150只C57小鼠,随机等分为正常对照组、放射性唾液腺损伤组以及骨髓间充质干细胞组,后2组通过电子直线加速器以15 Gy照射剂量建立放射性唾液腺损伤小鼠模型。照射后1周,骨髓间充质干细胞组于唾液腺局部多点皮下注射2×10^9 L^-1骨髓间充质干细胞悬液,另2组注射等量生理盐水。结果与结论:经共培养24 h后,骨髓间充质干细胞可以向唾液腺腺泡细胞分化,类似多角形,并表达α-淀粉酶。与正常对照组相比,放射性唾液腺损伤组小鼠唾液流量、唾液腺质量以及唾液淀粉酶水平明显减少,腺泡细胞结构出现明显损伤,唾液腺中Notch的表达水平降低;而与放射性唾液腺损伤组相比,骨髓间充质干细胞组小鼠唾液流量、唾液腺质量以及唾液淀粉酶水平明显恢复,腺泡细胞结构损伤减轻,唾液腺中Notch的表达水平恢复。说明骨髓间充质干细胞移植可有效治疗放射性唾液腺损伤,且其作用可能是通过调节Notch的表达水平实现的。

T-钙黏蛋白与恶性胶质瘤发生、发展及放疗敏感性的关系

目的探讨T-钙黏蛋白与恶性胶质瘤发生、发展及放疗敏感性的关系。方法(1)取37例恶性胶质瘤患者的癌组织和癌旁组织,以及正常胶质细胞株HEB和胶质瘤细胞系U251、A172,检测其T-钙黏蛋白mRNA和蛋白的表达情况。比较不同T-钙黏蛋白表达情况的患者的中位生存期。(2)将U251细胞、A172细胞分别分为空白对照组、阴性对照组、T-钙黏蛋白过表达组,空白对照组细胞不进行转染,将质粒pcDNA3.1、pcDNA3.1-T-cadherin分别转染至阴性对照组、T-钙黏蛋白过表达组细胞。检测转染后各组U251、A172细胞的增殖、凋亡、迁移能力,T-钙黏蛋白、波形蛋白、E-钙黏蛋白的表达水平。对转染后各组U251、A172细胞进行放射干预后,检测细胞存活率和相对克隆数。将各组转染后的U251细胞皮下注射至裸鼠右侧腋窝处,观察注射部位的成瘤情况。结果(1)恶性胶质瘤组织中T-钙黏蛋白的mRNA表达水平和阳性表达率均低于癌旁组织;T-钙黏蛋白表达阴性患者中位生存期短于T-钙黏蛋白表达阳性患者(均P<0.05)。与正常胶质细胞株HEB相比,胶质瘤细胞系U251和A172中T-钙黏蛋白的mRNA和蛋白表达水平均下调(均P<0.05)。(2)与空白对照组、阴性对照组比较,T-钙黏蛋白过表达组U251与A172细胞的EdU阳性率均降低,细胞凋亡率升高,迁移细胞数减少,波形蛋白表达水平下调,而T-钙黏蛋白和E-钙黏蛋白表达水平均上调,4 Gy、6 Gy的γ射线照射后细胞存活率降低,6 Gy的γ射线照射后细胞相对克隆数减少(均P<0.05)。与空白对照组、阴性对照组比较,T-钙黏蛋白过表达组裸鼠的肿瘤体积缩小(均P<0.05)。结论T-钙黏蛋白在恶性胶质瘤中呈现异常低表达状态。过表达T-钙黏蛋白能够明显抑制恶性胶质瘤的发展,并提高其放疗敏感性,有利于改善患者预后。

恩度联合紫杉醇对C57BL/6肺癌小鼠肿瘤生长及CAⅨ、HIF-1α表达的影响

目的探究恩度联合紫杉醇对C57BL/6肺癌小鼠肿瘤生长及CAⅨ、HIF-1α表达的影响。方法将300只C57BL/6肺癌小鼠分成5组,分别为空白对照组、正常对照组、紫杉醇低剂量组、紫杉醇中剂量组和紫杉醇高剂量组,正常对照组注射7.5 mg/m^2恩度进行治疗,空白对照组注射等量生理盐水,紫杉醇低剂量组、紫杉醇中剂量组和紫杉醇高剂量组在正常对照组的基础上分别注射30、100、170 mg/m^2的紫杉醇,测量小鼠肿瘤的生长情况,测定小鼠的瘤重和抑瘤率,检测各组小鼠肺癌组织以及血清中CAⅨ、HIF-1α的表达水平。结果紫杉醇组的肿瘤体积显著小于空白对照组和正常对照组(P<0.05),且随着紫杉醇剂量的增加,肿瘤体积的减小程度明显增加(P<0.05);持续治疗4周后,紫杉醇组的瘤重显著小于对照组,抑瘤率显著高于对照组(P<0.05),且随着紫杉醇剂量的增加,瘤重的减小程度及抑瘤率的升高程度明显增加(P<0.05);紫杉醇组小鼠CAⅨ和HIF-1α的表达水平显著低于对照组(P<0.05);且随着紫杉醇剂量增加,CAⅨ和HIF-1α的表达水平显著降低(P<0.05)。结论恩度联合紫杉醇治疗C57BL/6小鼠肺癌能显著调控肿瘤的生长,降低CAⅨ和HIF-1α的表达水平,为肺癌的临床治疗提供一定的参考依据。

磁共振灌注成像在重组人血管内皮抑制素联合放化疗治疗局部晚期鼻咽癌中的临床研究

目的 比较鼻咽部磁共振灌注成像（PWI）参数的变化,评价血管内皮抑素联合放化疗的抗血管生成作用,评估其治疗疗效的早期反应.方法 前瞻性研究2011年12月30日至2013年3月31日,22例局部晚期鼻咽癌患者接受重组人血管内皮抑制素联合诱导化疗序贯同步放化疗治疗（试验组）,选取诱导化疗序贯同步放化疗的25例局部晚期鼻咽癌患者入对照组.诱导化疗前后、同步放化疗后行鼻咽部灌注核磁共振扫描（PWI）得出相关参数血容量（BV）、血流量（BF）、平均通过时间（MTT）.结果 试验组中,在诱导化疗后及放疗后鼻咽部病灶区域的BV、BF值较诱导化疗前均有明显下降（F=3.05、3.85,P＜0.05）,MTT值差异无统计学意义（P＞0.05）.对照组中,鼻咽部病灶区域相关参数BV、BF、MTT在治疗过程中的变化差异均无统计学意义（P＞0.05）.试验组鼻咽部病灶区域的BF在放疗后下降明显低于对照组（0.72 ±0.56 vs 1.92 ±1.26,t=-3.056,P =0.012）.结论 血管内皮抑素在改变肿瘤血液动力学变化方面起到了一定的作用,其治疗相关性不良反应患者可以耐受.磁共振灌注成像有可能更早、更敏感地评估抗血管生成治疗减少肿瘤的疗效.临床试验注册号 中国临床试验注册中心,ChiCRT-ONRC-12002394.

姜黄素联合卡铂对乳腺癌MCF-7细胞放疗增敏作用的实验研究

目的探讨姜黄素联合卡铂对乳腺癌MCF-7细胞放疗敏感性的影响及其潜在的分子机制。方法体外培养乳腺癌MCF-7细胞,经4 Gy的X射线照射后,分为四组:对照组、卡铂组、姜黄素组、联合组,分别采用二甲基亚矾(DMSO)、卡铂、姜黄素及卡铂联合姜黄素培养48 h,采用四唑氮蓝(MTT)实验和流式细胞仪分别检测MCF-7细胞增殖和凋亡,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测MCF-7细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达情况,Western blot法检测MCF-7细胞中PCNA、Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果联合组MCF-7细胞增殖率显著低于对照组、卡铂组和姜黄素组(P均<0.05)。联合组MCF-7细胞凋亡率显著高于对照组、卡铂组和姜黄素组(P均<0.05)。联合组MCF-7细胞中PCNA、Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平显著低于对照组、卡铂组和姜黄素组(P均<0.05);联合组MCF-7细胞中Bax mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组、卡铂组和姜黄素组(P均<0.05)。结论姜黄素和卡铂联合治疗能够增加乳腺癌细胞的放疗敏感性,推测可能通过抑制乳腺癌细胞PCNA、Bcl-2的表达,促进Bax的表达而实现。