H5N1亚型禽流感病毒核蛋白NP的原核表达及抗体制备

目的制备H5N1亚型禽流感病毒NP重组蛋白和抗体,为研制含NP组分的人禽流感亚单位疫苗和建立评价方法提供检测抗原和抗体。方法以H5N1亚型禽流感病毒A/chicken/Hubei/489/2004(H5N1)NP基因cDNA克隆质粒pMD-NP为模板,PCR扩增获得NP基因抗原区片段,克隆到原核表达载体pET-28a,构建重组质粒pET-ΔNP,转化大肠杆菌BL21-CondonPlus(DE3)-RIL,IPTG诱导重组蛋白表达。采用Ni亲和层析方法纯化NP重组蛋白,免疫家兔,收集免疫血清,ELISA测定抗体效价;间接免疫荧光检测所制备抗体与真核细胞表达NP蛋白的反应性。结果与结论成功的制备了高效价兔抗NP抗体,抗体效价在105以上,该抗体能与原核和真核系统中表达的NP蛋白特异性反应,为研制以NP蛋白为抗原组分的人禽流感亚单位疫苗和建立评价方法奠定了基础。

代谢组学预测人卵母细胞质量与胚胎体外发育潜能的研究现状

筛选高质量配子和高发育潜能胚胎是辅助生殖技术关注的重点。代谢物检测是一种非侵入性方法,如果可以应用在配子或胚胎质量的评估中,就可以开发出快速且无创的检测方法,客观地评价配子及胚胎质量,从而有效改善生殖结局。本文总结了代谢物预测卵母细胞质量及胚胎发育潜能的已发表研究,提示在预测配子及胚胎发育的过程中,多参数建模是颇具潜能的方法。现代近红外光谱(NIR)分析技术联合质子核磁共振(NMR)是检测卵泡液和胚胎培养液中代谢物的理想方法。卵泡液中葡萄糖、氨基酸(谷氨酸、缬氨酸)、胆固醇(7β-羟基胆固醇)、维生素(E类)等与卵母细胞质量相关。氧耗(活性氧和氧化应激指标)、氨基酸(谷氨酸和甘氨酸)可能作为预测胚胎发育潜能的标志物。卵泡液中脂质及胚胎培养液中的丙氨酸的预测价值应该进行更深入的研究。