大鼠视皮质—外侧膝状体HRP示踪结合谷氨酸及GABA免疫组化研究

采用HRP逆行追踪观察了大鼠视皮质锥体细胞至外侧膝状体背核的投射,结合谷氨酸及GABA免疫组化方法探测了该类细胞的化学递质。光镜下HRP标记细胞与谷氨酸和GABA免疫阳性细胞清晰可辨。谷氨酸免疫阳性神经元主要分布在视皮质第Ⅱ～Ⅵ层。在第Ⅵ层可见HRP和谷氨酸双标记的锥体细胞,双标细胞的数量约占HRP标记细胞总数的42.7％。GABA免疫阳性神经元分布在皮质各层。但未见有GABA和HRP的双标记神经元。因而有充分理由推测:谷氨酸可能是视皮质投射至外侧膝状体背核的锥体细胞的神经递质之一。

胎儿视皮质皮质下层含─氧化氮合酶神经元的发育

本文用出生前１７周至３６周胎儿标本１０个，死后４小时内作常规灌注固定，取脑后作视皮质冰冻切片（３０ｕｍ），用一氧化氮合酶（ＮＯＳ）组织化学法孵育切片２～４小时，在视皮质皮质下层（ＳＰ）可见ＮＯＳ强阳性神经元。这些神经元胞体大小不一、形态各异、突起显示呈高尔基染色外观，部分神经纤维含有膨体和生长锥。２０周以后，从ＳＰ层有ＮＯＳ阳性神经纤维伸入皮质板或白质。随着胎龄增长，ＮＯＳ阳性神经元密度增加，胞体切面积增大，神经元由幼稚趋向成熟。本研究还观察到胎儿ＳＰ内ＮＯＳ阳性神经元可从形态上明显地划分为两个阶段，并推测ＮＯＳ合成的一氧化氮（ＮＯ）在突触建立和修饰、突触间信息传递、传入纤维对靶器官的识别和脑组织局部血流调节等过程中起着重要作用。

神经营养因子的信号转导途径

神经营养因子 (NTs)是一类调节神经元发育、分化及功能的因子。它可激活两种不同类型的受体———酪氨酸激酶的Trk家族和肿瘤坏死因子受体超家族中的p75NTR。NTs激活这两种受体后能启动许多复杂的信号转导通路 ,从而发挥生物效应。

急性大鼠眼高压诱导的不同缺血/再灌内层视网膜的变化

目的 :探讨急性眼高压诱导的不同缺血 /再灌条件下内层视网膜形态与功能的变化。方法 :成年大鼠 ,根据不同加压与再灌时间分组。左眼眼压升高至闪光视网膜电图b波消失的临界眼压且维持缺血 30～ 90min。实验动物分别再灌 1、3、7或 14d复测b波 ,尼氏染色检测节细胞 (RGCs)密度、内层视网膜厚度。结果 :缺血 6 0或 90min组RGCs密度和内层视网膜厚度显著下降 ,且下降的程度随再灌时间的延长而加重。缺血 30或 4 5min组复测b波部分恢复 ;而缺血 6 0min或更长时间组则b波未恢复。结论 :缺血 6 0min或更长时间导致内层视网膜严重损伤 ,而不同的眼高压维持时间和再灌时间都是影响视网膜损伤程度的重要因素。

雷公藤甲素抑制APP/PS1双转基因AD模型小鼠海马内Aβ沉积和老年斑形成

目的研究雷公藤甲素（T10）对APP/PS1双转基因AD模型小鼠（APP/PS1dtg）β-淀粉样蛋白（Aβ）沉积与老年斑（SP）形成的影响。方法取18只4.5月龄健康雄性APP/PS1dtg,随机分为3组,分别以T10灌胃：5μg/（kg·d）（T10 H组）、1μg/（kg·d）（T10 L组）和等容量的溶媒灌胃（PLC组）,共计45d。45d后取材,左侧半大脑切片,6E10免疫组织化学方法染色和刚果红染色结合无偏性体视学定量分析,研究T10对海马Aβ沉积和SP形成的影响;分离右侧半海马,免疫印迹法分析海马Aβ蛋白水平的变化。结果与PLC组比较,T10 H组海马6E10阳性的Aβ沉积总面积减少了35%（P〈0.001）,SP总面积减少了32%（P〈0.001）;T10 L组海马Aβ斑总面积减少了18%（P〈0.05）,SP总面积减少了21%（P〈0.05）;T10呈剂量依赖性抑制Aβ在APP/PS1dtg海马的沉积和SP的形成,减少海马内Aβ蛋白水平;免疫印迹分析也显示,T10 H组海马Aβ蛋白水平最低,PLC组Aβ蛋白水平最高,T10L组Aβ蛋白水平介于两者之间。结论T10抑制Aβ的产生和SP形成,或可用于AD的治疗。

补阳还五汤对大鼠脊髓损伤后红核脊髓束再生及功能修复的影响

为探讨补阳还五汤对脊髓损伤后轴突再生及功能修复的影响,将SD大鼠C3-C4右侧红核脊髓束(RST)横断后,分别以补阳还五汤和蒸馏水连续灌胃8周,用BDA顺行束路示踪方法检测轴突再生情况,采用自发性直立探究行为学测试方法评判前肢运动功能的恢复。结果显示:灌服补阳还五汤组的大鼠在损伤RST的尾侧可见少量的BDA标记纤维,伤侧前肢使用率明显高于蒸馏水组(P<0.01)。上述结果提示,补阳还五汤能促进大鼠横断的红核脊髓束轴突再生及部分功能修复。

应激对中枢神经系统即刻早期基因c-fos表达及HPA轴的调节作用研究

目的:研究应激对即刻早期基因c-fos表达的调节作用及其与CRFmRNA、HPA通路和行为之间的关系。方法:制造社会应激动物模型,高架十字迷宫和空场实验评估大鼠应激后行为,免疫组织化学技术检测FOS蛋白表达,计算机图像分析系统定量,原位杂交检测CRFmRNA表达,放射免疫分析方法和酶联免疫吸附方法(ELISA)检测血清ACTH和Cortisol。结果:提示室旁核(PVN)部位的c-fos,可能作为第三信使调节促皮质激素释放激素(CRF)的表达,进而控制皮质激素释放激素(ACTH)的分泌,启动HPA轴,影响与应激有关的行为、神经内分泌免疫活动。

MTT法检测RAW264.7细胞活力及可能因素分析

目的通过MTT法检测RAW264.7细胞活力并绘制生长曲线,探讨MTT作用环节中的可能影响因素,优化实验方案。方法以对数生长期的RAW264.7细胞为实验对象,分别用正常培养和脱离血清培养法,记录在不同时间点的OD值。并在加入DMSO后,分别在6、12、24和48h及3、15和30d进行OD值测量。结果加入DMSO后不同时间点的MTT法检测结果,随着时间的延长,结果差异越来越大,超过3d后影响较大,与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。3d内,与对照组比较,差异没有统计学意义(P>0.05)。结论①验证、测量并绘制RAW264.7的生长曲线;②加盖后影响透光度,增大了OD值,影响了实验结果;③随着DMSO时间的延长以第3天为限,否则影响实验结果。

急性眼高压大鼠视网膜谷氨酸/天冬氨酸转运体和谷氨酰胺合成酶的表达

目的:通过检测急性眼高压后大鼠视网膜谷氨酸/天冬氨酸转运体(GLAST)和谷氨酰胺合成酶(GS)的表达变化,探讨急性青光眼视网膜节细胞(RGCs)损伤的可能机制。方法:成年大鼠,根据不同存活时间分组。左眼眼压升高至闪光视网膜电图b波消失的临界眼压且维持缺血60min。实验动物分别存活1、3、7、14d后通过免疫组织化学检测大鼠视网膜GLAST和GS的表达变化。结果:GLAST和GS在存活1d和3d时表达上调然后下调,GS还存在重新分布。结论:GLAST和GS的表达与存活时间密切相关,两者表达的相似变化是急性青光眼RGCs损伤的重要原因。

大鼠脊髓全横断后脑源性神经营养因子及其高亲和力受体在运动皮质表达的变化

目的 研究大鼠脊髓全横断后脑源性神经营养因子 (BDNF)及其高亲和力受体 (TrkB)在运动皮质表达的变化 ,为进一步探索脊髓损伤后再生修复机制和神经营养因子治疗脊髓损伤提供实验依据。 方法 雄性SD大鼠 4 2只随机分为 3组 :1 脊髓横断组 :动物脊髓在胸 9节段完全横断 ,按存活时间不同分为术后 3、7、14、2 1及 2 8d组 ;2 假手术组 (只行椎板切除术 ) ;3 正常对照组。动物到达存活时间点后 ,应用免疫组织化学ABC方法和图像分析技术检测TrkB及BDNF在运动皮质的表达和分布。 结果 对照组和实验组运动皮质TrkB和BDNF阳性细胞主要分布在第 5层 ,第 3、4、6层也有少量阳性细胞。脊髓全横断后TrkB和BDNF的表达逐渐增高 ,于术后 2 1d达高峰 ,2 8d回到正常水平 ,且TrkB表达上调早于BDNF。 结论 脊髓全横断后运动皮质对BDNF的需求增加 ,内源性BDNF的增加可能有利于受损的皮质脊髓束神经元的存活与再生 ;在损伤早期给予外源性BDNF可能更有利于受损的皮质脊髓束神经元。

大鼠下丘脑视前区神经元内雌激素受体α的表达——免疫组织化学研究

了解雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)在大鼠脑的分布及大鼠下丘脑视前区雌激素受体样阳性神经元的生后发育规律。用免疫组织化学反应方法结合图像分析仪检测雌性大鼠下丘脑视前区雌激素受体样阳性神经元的数量和灰度值。 ERα分布于 Calleja岛、梨形核、外侧隔核、基底前脑胆碱能神经元各群、终纹床核、下丘脑内侧视前区、室周核、腹内侧核、弓状核和结节乳头核、再连合和前内侧丘脑核、杏仁核复合体、梨形皮质和穹窿下器官。相比之下 ,皮质和海马内仅见几个分散的 ERα样阳性神经元。而纹状体内未见 ERα样阳性神经元。ERα免疫反应产物主要位于细胞核内 ,蓝黑色。在成年雌性大鼠下丘脑内侧视前区 (m edial preoptic area,MPA)神经元的胞浆和突起内可见较弱的 ERα免疫反应产物。在MPA内 ,生后 1天可见 ERα表达 ,随着大鼠的生后发育 ,成年时达到高峰。与成年大鼠比较 ,老年雌性大鼠雌激素受体样阳性神经元数量减少 10 .0 5 % ,P>0 .0 5 ,差异无显著性 ;平均灰度减少 41.5 7% ,P<0 .0 5 ,差异有显著性。老年雌性大鼠下丘脑 MPA内 ERα表达下调 ,可能与卵巢功能减退而导致情感。

明胶墨汁灌注展示大鼠视网膜血管的方法

目的对大鼠视网膜墨汁灌注方法进行改良以充分显示微血管。方法78只SD大鼠分两部分进行实验。第一部分中,72只大鼠根据灌注液中明胶的浓度分为纯墨汁组(n=18)、1%明胶墨汁组(n=18)、3%明胶墨汁组(n=18)、5%明胶墨汁组(n=18)。每组动物根据灌注压强分为90、115、140、165、190、215mmHg6个亚组。墨汁从升主动脉进行灌注。用视网膜铺片和切片检测微血管的灌注情况。根据第一部分结果,在第二部分中,6只大鼠先后灌注3%明胶墨汁和5%明胶墨汁各20ml。用上面相同的方法检测微血管的灌注情况。结果在165mmHg压强下灌注37℃的3%明胶墨汁时,视网膜周边部的血管充填充分,但中央部的血管充填不充分。在215mmHg压强下灌注37℃的5%明胶墨汁时,视网膜周边部的血管充填不充分,但中央部的血管充填充分。在165mmHg压强下灌注3%明胶墨汁20ml,再在215mmHg压强下灌注5%明胶墨汁20ml能使视网膜中央部和周边部的大小血管都充填充分,且墨汁无外渗、在水溶液中不褪色、灌注血管与周边组织对比明显。结论在165mmHg恒压下灌注37℃的3%明胶墨汁20ml,再在215mmHg恒压下灌注37℃的5%明胶墨汁20ml是一种较好的显示大鼠视网膜微血管的形态学方法。

临床医学七年制学生科研能力培养新模式的探索

培养医学七年制学生科研和创新能力,对他们适应2 1世纪的挑战至关重要,这也是当前医学教育工作者共同关心与探讨的问题。实践中,对培养模式进行了尝试和探索,提出了从实际情况出发,通过合理地安排科研训练的进度,按培养硕士研究生(以下简称研究生)

NGF、BDNF及受体trkA、trkB、trkC在正常猴脊髓的表达

采用免疫组织化学方法观察了神经生长因子 (NGF) ,脑源性神经营养因子 (BDNF)以及 NGF家族因子受体 trk A、trk B、trk C的免疫阳性反应在正常猴脊髓的分布。结果表明 :NGF免疫反应阳性的神经元在脊髓灰质各层中均有分布 ,灰、白质内也可见较多的 NGF免疫反应阳性的胶质细胞。 BDNF在脊髓各型神经无有明显的表达 ,特别是前角运动神经元。 trk A、trk B、trk C的免疫阳性反应产物主要分布在灰质的神经元及胶质细胞。本实验结果揭示了在正常猴脊髓中神经营养因子 (NGF、BDNF )及受体 trk A、trk B、trk C的表达状况 ,提示这些神经营养因子及受体在维持猴脊髓神经元的正常生理功能中具有重要作用。

雷公藤甲素对LPS诱导的海马炎症过程中COX-2和iNOS表达的影响

选用健康成年雄性SD大鼠,用不同剂量(10μg·kg-1·d-1,25μg·kg-1·d-1,50μg·kg-1·d-1)的雷公藤甲素预处理5d后,立体定位海马注射脂多糖(LPS),采用免疫组织化学染色方法观察海马CA3区环氧化酶2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达变化。结果发现:与注射生理盐水对照组比较,注射LPS可引起海马CA3区的COX-2和iNOS显著表达,而雷公藤甲素(50μg·kg-1·d-1)可明显下调LPS诱导的COX-2和iNOS的表达,其抑制程度与药物剂量呈正相关。本实验结果提示雷公藤甲素对中枢神经系统中LPS诱导的COX-2和iNOS的表达有明显的抑制作用。

雌激素对全脑缺血再灌小鼠海马CA_1区P-CREB和BDNF表达的影响

本文观察了雌激素对全脑缺血再灌的影响并探讨了其作用机制。切除小鼠双侧卵巢同时于颈部皮下植入雌激素(E2)缓释片(OVXE2组)或安慰剂缓释片(OVXPLC组)。术后18d,手术暴露双侧颈总动脉并夹闭25min后再通,制作全脑缺血再灌模型,分别于灌流后1h,12h,3d,7d取材进行PCREB和BDNF免疫组化染色和常规Nissl染色,研究E2对雌性小鼠全脑缺血/再灌流损伤后海马CA1区PCREB和BDNF表达的影响。结果表明:缺血再灌后7d,OVXPLC组海马CA1区神经元排列稀疏,细胞层次减少,细胞数低于OVXE2组(P<0.01);在缺血再灌后3d,OVXPLC组海马CA1区PCREB阳性细胞数低于OVXE2组(P<0.01),而BDNF的表达无统计学差异(P>0.05);在缺血再灌后7d,OVXPLC组PCREB和BDNF的表达均低于OVXE2组(P<0.01)。以上实验结果提示,E2在缺血再灌的中后期可能通过上调海马CA1区PCREB进而促进BDNF的表达,发挥神经元保护作用。

解剖学英汉双语教学的探索

2001年教育部下发《关于加强高等院校本科教学工作提高教学质量的若干意见》，要求“积极推动使用英语等外语进行教学”，双语教学逐渐在全国高校展开。本校《系统解剖学》2007年获教育部首批双语教学示范课程，积极开展解剖学双语教学。在实践中遇到不少问题，现对教学方法、考核方式、师资队伍、教学资源等方面进行阶段性总结，以供参考和商榷。

雌激素对app/ps1双转基因阿尔茨海默病模型小鼠海马老年斑形成的抑制作用

目的 :用无偏性体视学定量研究雌激素对app/ ps1双转基因 (app/ ps1dtg)AD模型小鼠海马β 淀粉样蛋白 (Aβ)沉积及老年斑形成的抑制作用。方法 :雌性app/ ps1dtg小鼠行双侧卵巢切除 ,于颈部皮下植入可持续释放 6 0d的 17β 雌二醇片剂 (17 βestradiol,E2 ) ;6 0d后取脑行冰冻切片 ,6E10免疫组化染色显示沉积于海马的Aβ ,刚果红组织学染色显示老年斑 ,无偏性体视学测量海马内Aβ斑及老年斑的总体积。结果 :E2抑制Aβ在海马内沉积 ,降低海马内Aβ斑的总体积 ,并抑制老年斑的形成。 结论 :E2防治阿尔茨海默病可能与E2抑制Aβ在脑内沉积并聚集形成老年斑有关。

不同年龄大鼠斜角带核水平支神经元内TrkA和ChAT的表达──免疫组织化学研究

目的 了解大鼠基底前脑斜角带核水平支神经元内酪氨酸激酶 A(tyrosine kinase A,Trk A)、胆碱乙酰化转移酶 (choline acetyltransferase,Ch AT)样阳性神经元的生后发育规律及两者的相互关系。 方法 用免疫组织化学方法结合图像分析仪检测大鼠基底前脑斜角带核水平支 Trk A、Ch AT样阳性神经元的数量、面积和灰度值。 结果 Trk A、Ch AT分布于基底前脑神经元。生后 1d可见 Trk A表达 ,但生后 5 d才出现 Ch AT表达。生后 2 0 dTrk A、Ch AT表达至高峰 ;生后 30 d下调 ,成年时维持相对较高水平。老年鼠 Trk A、Ch AT样阳性神经元出现萎缩、数量也分别减少 39.7%、33.3% ;胞体平均面积分别减少 15 .7%、12 .8% ;平均灰度值分别减少 2 9.9%、9.9%。同时 ,不同年龄大鼠 Trk A、Ch AT样阳性神经元截面积和灰度呈弱正相关 ,数量呈正相关。 结论 大鼠基底前脑斜角带核水平支神经元 Trk A表达早于 Ch AT表达。从生后 5 d起 ,Trk A、Ch AT表达有相似的时间模式。Trk A可能参与斜角带核胆碱能神经元的发育、分化、成熟和老化。老年鼠 Trk A、Ch AT表达下调可能是老年动物和阿尔茨海默病人基底前脑胆碱能神经元变性的易感性增加的原因之一。