热休克蛋白72在氧化应激所致急性乳鼠培养心肌细胞损伤中的作用

目的:探讨HSP7 2对氧化应激所致心肌细胞急性损伤的保护作用。方法:用热休克预处理诱导新生大鼠心肌细胞中HSP7 2的表达,采用HSP7 2反义寡核苷酸阻断HSP7 2的表达。向原代培养的乳鼠心肌细胞中加入终浓度为0.5 mmol/L H2O2,以模拟氧化应激。测定乳酸脱氢酶释放率和细胞总蛋白质合成能力。结果:氧化应激引起心肌细胞乳酸脱氢酶释放率明显升高,而细胞总蛋白质的合成降低。热休克预处理导致心肌细胞中HSP7 2表达明显增加,并使H2O2所致心肌细胞LDH释放率显著降低,细胞总蛋白质的合成基本恢复正常水平。HSP7 2反义寡核苷酸能在很大程度上阻断HSP7 2的表达及热休克预处理所所致的心肌细胞保护作用。结论:在热休克预处理减轻过氧化氢所致乳鼠心肌细胞急性损伤的作用中,HSP7 2发挥了主要作用。

人二倍体细胞株HLF-02的建立及其生物学特性

目的 :建立HLF 0 2细胞株 ,为老年学 ,肿瘤学 ,病毒学 ,药物学和生物遗传学等研究提供新的实验材料。方法 :人二倍体细胞株HLF 0 2取于肺组织 ,用胰蛋白酶消化肺组织 ,可获 90 %以上具有正常代谢活性的肺细胞 ,对存活的肺成纤维细胞进行形态学观察、生长特性检查、核型分析、电镜观察和异种移植等。结果 :建成的HLF 0 2细胞株其形态表现、电镜观察、核型分析和异种移植等均符合二倍体细胞特征。经过 10个月的体外培养 ,共传 5 0代 ,细胞倍增时间 75 .5h ,染色体始终保持二倍体特性 ,异种移植成瘤试验阴性 ,无支原体污染。结论 :HLF 0 2是一株人二倍体细胞株 ,可用于对细胞老年学 ,肿瘤学 ,病毒学 ,药物学和生物遗传学等方面的研究。

体外细胞培养支原体的检测与清除

目的检测及清除细胞培养中支原体的污染。方法应用DNA荧光法及两步PCR法检测支原体,采用BM-Cycline与裸鼠皮下过继联合法去除支原体;结果DNA荧光法、两步PCR法支原体检测率分别为25.0%,40.0%;BM-cycline与裸鼠过继法对支原体的清除率为100.0%;结论上述方法能有效检测和清除细胞培养中支原体的污染。

人DC与黑色素瘤细胞融合疫苗体外诱导特异性抗肿瘤CTL

目的:探讨HLA-A2-的黑色素瘤细胞与HLA-A2+的树突状细胞(DC)融合后体外诱导Me-lan-A特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的作用及交叉抗原递呈的能力。方法:用PEG法将黑色素瘤细胞与DC融合,在含GM-CSF的RPMI1640完全培养基条件下继续培养24～48h,然后将融合细胞与Me-lan-A特异性T细胞共同培养,用细胞内细胞素染色法检测其诱导CTL的活性,流式细胞术分析T细胞的活化率。结果:从异体外周血分离的单核细胞在GM-CSF及IL-4条件下培养6d后,未成熟的DC能表达一定的CD80,CD83,CD86,HLA-DR和HLA-ABC等共刺激分子,而经TNF-浕,PGE-2及CD40L诱导成熟的DC,则这些分子的表达进一步上调。融合细胞体外活化Melan-A特异性T细胞的效率为16.72%±4.26%,阴性对照为0.21%±1.84%,阳性对照为28.60%±5.67%。融合细胞活化的CTL能有效地溶解HLA-A2的黑色素瘤细胞。结论:HLA-A2-的黑色素瘤细胞与HLA-A2+阳性的DC融合肿瘤疫苗,能在体外有效地交叉递呈MHC-I限制性肿瘤抗原,并诱导Melan-A特异性的CTL和有效地杀伤黑色素肿瘤细胞。

8株人黑色素瘤细胞系的建立及其生物学特性研究

目的 :从人黑色素瘤组织建立一系列黑色素瘤细胞系 ,命名为黑色素瘤细胞系 1- 8号 (HME1- 8) ,并研究鉴定其体外细胞生物学与免疫学特性。方法 :取黑色素瘤组织进行组织块培养法 ,待长满 90 %汇合面后消化传代培养 ,并进行形态学、生长动力学、免疫学及致瘤性等生物学特性研究。结果 :该系列黑色素瘤细胞系已在体外培养生存 1- 2年 ,传 6 0 - 10 0余代 ,其生物学特性显示 :①这些细胞系体外生长的倍增时间为 34. 2 - 5 9. 5h ;②软琼脂集落形成率平均值在 8. 6 % - 2 6 . 2 %之间 ;③接种至裸鼠后具有较高的致瘤性 ;④染色体核型分析为非整倍体 ,众数为 6 4 - 117条 ;⑤透射电镜下可观察到细胞含丰富的核糖体及黑色素颗粒 ;⑥免疫组化分析显示细胞浆内含大量阳性棕色黑色素颗粒 ;⑦肿瘤抗原检测显示 8株黑色素瘤细胞系的Melan -A抗原阳性率为 75 % ,MAGE - 1阳性率为5 0 % ,MAGE - 2阳性率为 37 .5 % ,MAGE - 3阳性率为 6 2 .5 %。结论 :8株黑色素瘤细胞系经体外长期培养后已永生化 ,形成了连续传代细胞系 ,具有明显的黑色素瘤细胞恶性表型特征。

人骨髓成骨细胞体外培养

目的 研究人骨髓基质干细胞体外培养及其成骨特性 ,为骨组织工程学研究提供成骨种子细胞。 方法 以人髂骨区骨髓为材料进行体外人骨髓基质干细胞培养 ,传代后改用含地塞米松、β -甘油磷酸纳和维生素C的条件培养基进行培养 ,用倒置显微镜观察、碱性磷酸酶染色、四环素荧光标记等方法对所培养的细胞进行生物学特性研究。 结果 接种细胞 4d即可传代 ,在条件培养液中 2周形成多层结构 ,并出现黑色结节 ,ALP染色阳性 ,结节四环素荧光标记、钙染色阳性 ,Ι型胶原免疫组化染色呈黄褐色。 结论 采用本法在体外培养的人成骨细胞生长良好 ,并具有成骨细胞形态特征和生物学特性 ,可做为临床所需的成骨种子细胞来源 ,为骨组织工程学研究奠定了实验基础。

黑色素瘤细胞系HME1的建立及其生物学特性分析

目的 :建立一株黑色素瘤细胞系 ,并分析其体外生物学特性。方法 :取黑色素瘤活检组织进行组织块法原代培养 ,待长满 90 %后 ,消化传代培养并进行生长动力学、形态学及致瘤性等生物学特性鉴定。结果 :该细胞系已在体外培养生存 1 8个多月 ,传 90余代。其生物学特性如下 :该细胞系接种至裸鼠后可致瘤 ,其移植瘤细胞形态与原实体瘤相似 ;检测第 2 0代细胞生长曲线 ,其倍增时间为 5 6 .9h ;第 2 0代细胞软琼脂集落形成率平均为 1 9.1 % ;染色体核型分析为非整倍体 ,众数为 92条 ;透射电镜下可观察到细胞表面有丰富的微绒毛、核糖体及黑色素颗粒 ;SP免疫组化分析显示 ,细胞有HMB 4 5表达。结论 :该黑色素瘤细胞经体外培养后已永生化 ,形成了连续传代细胞系 。

一株新的卵巢癌细胞系的建立及其生物学特性分析

目的 从人卵巢癌组织建立一株卵巢癌细胞系 ,为卵巢癌发病机制研究和治疗药物筛选提供可靠的材料。 方法 取手术切除的卵巢癌组织 ,进行组织块培养法 ,待长满 90 %汇合面后消化传代培养 ,并进行形态学、生长动力学及致瘤性等生物学特性分析。 结果 该卵巢癌细胞系已在体外培养生存 1年以上 ,传 80余代 ,命名为湖南卵巢癌细胞系 1号 (HOC1) ,其生物学特性显示 :这些细胞系体外生长的倍增时间为 47.2h ;软琼脂集落形成率为 18.5 % ;接种至裸鼠后具 10 0 %致瘤性 ;染色体核型分析为非整倍体 ,众数为 74～ 92条 ;透射电镜下可观察到卵巢癌细胞表面含有丰富的微绒毛 ,胞浆内含有丰富的核糖体。 结论 该卵巢癌细胞系经体外长期培养后已形成永生化细胞系 ,并具有明显的恶性表型特征。

鼻咽癌HNE1细胞与CNE1细胞的蛋白质表达谱的初步研究

目的 探讨鼻咽癌发生、发展过程中蛋白质的动态变化 ,为寻找鼻咽癌的分子标志物打下基础。 方法 采用双向电泳结合质谱技术研究低分化鳞癌细胞系HNE1与高分化鳞癌细胞系CNE1的蛋白质表达谱的差异。 结果 初步鉴定出 8个在HNE1细胞中表达上调的蛋白点包括 14kDabeta -galactoside -bindinglectin ,fourandahalfLIMdo mains 2 ,regulatorofG -proteinsignalling 2 0 ,Similartohypothetcalprotein ,RAB9,unnamedproteinproduct ,SREC -4。 结论 HNE1与CNE1细胞蛋白质表达谱有差异 ,该研究有助于进一步阐明鼻咽癌发生、发展的病理机制。

MTT法体外测定脑胶质细胞瘤对化疗药物的敏感性

目的 探讨运用MTT法测定脑胶质细胞瘤体外对化疗药物的敏感性。 方法 采用改良的MTT法测定5 0例胶质细胞瘤标本对 8种化疗药物的体外敏感性。 结果 5 0例胶质细胞瘤细胞对化疗药物的敏感性从高到低依次为威猛、二氯乙基亚硝脲、顺铂、长春新碱、环磷酰氨、甲氨喋呤、5 -氟脲嘧啶、阿霉素。 结论 MTT法检测脑胶质细胞瘤细胞对化疗药物的敏感性有助于指导临床选择肿瘤敏感性的化疗药物 ,提高化疗效果 ,具有重要的临床应用价值。

LAK细胞治疗42例中晚期恶性肿瘤的疗效观察

该文报道了来自患者自体或同种异体LAK细胞对 42例中晚期癌症患者的疗效分析 ,其中CR 2例 ,PR 14例 ,MR 12例 ,SD 11例 ,PD 3例。总有效率为 38 10 % ,绝大多数患者都有不同程序的临床症状改善、生活质量提高、生存期延长 ,未观察到严重毒副反应。