抵当汤含药血清对高糖诱导大鼠肾小球内皮细胞损伤的影响

目的观察抵当汤含药血清对高糖诱导损伤大鼠肾小球内皮细胞(RGECs)的保护作用。方法大鼠灌胃给予蒸馏水或抵当汤制备空白血清或抵当汤含药血清,CCK8法筛选葡萄糖造模浓度及含药血清给药浓度。将RGECs分为空白组、模型组、抵当汤组(10%抵当汤含药血清)、达格列净组(空白血清+2μmol/L达格列净)、抵当汤+达格列净组(10%抵当汤含药血清+2μmol/L达格列净),药物处理24 h后,RT-qPCR法和Western blot法检测细胞Nrf2、HO-1、NQO-1 mRNA和蛋白表达,免疫荧光法检测细胞Nrf2荧光表达,比色法检测细胞SOD活性及MDA水平。结果与空白组比较,模型组RGECs中Nrf2、HO-1、NQO-1 mRNA和蛋白表达以及SOD活性降低(P<0.01),MDA水平升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组Nrf2、HO-1、NQO-1 mRNA和蛋白表达以及SOD活性升高(P<0.05,P<0.01),MDA水平降低(P<0.01)。结论抵当汤含药血清可以通过激活Nrf2信号通路从而抑制氧化应激,对高糖损伤的RGECs起到保护作用。

基于JAK/STAT信号通路探讨痰瘀同治法对糖尿病大鼠心肌病变的影响

目的 观察痰瘀同治法对糖尿病心肌病变大鼠酪氨酸蛋白激酶/信号转导与转录激活子(Janus activated kinase/signal transducer and activator of transcription, JAK/STAT)信号通路的影响。方法 将模型复制成功的40只大鼠用随机数字表法分为模型组、化瘀组、化痰组、痰瘀同治组、阿拉氯胺(alagebrium chloride, ALT-711)组,另设10只大鼠作为空白组。化瘀组、化痰组与痰瘀同治组分别给予血府逐瘀汤、小陷胸汤、抵当陷胸汤,ALT-711组给予ALT-711。采用PCR法检测晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products, RAGE)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators activated receptorγ,PPARγ)基因表达水平,Western blot法检测RAGE、PPARγ、p-JAK1、p-STAT1和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的蛋白表达水平。结果 与空白组比较,模型组RAGE的基因和蛋白表达水平及p-JAK1、p-STAT1和TGF-β1蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05),PPARγ的基因和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与模型组比较,各用药组RAGE的基因和蛋白表达水平及p-JAK1、p-STAT1和TGF-β1蛋白的表达水平均显著下调(P<0.05),PPARγ基因和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);且痰瘀同治组的RAGE基因和蛋白表达水平及p-JAK1、p-STAT1和TGF-β1蛋白的表达水平较化痰组和化瘀组降低更显著(P<0.05),PPARγ基因和蛋白表达水平升高更显著(P<0.05)。结论 痰瘀同治能抑制JAK/STAT信号通路,减少TGF-β1的表达,从而实现对糖尿病心肌病变大鼠心肌的保护作用。

痰瘀同治法对糖尿病大鼠心肌微血管病变AGEs/RAGE轴及氧化应激的影响

目的观察痰瘀同治对高糖诱导心肌微血管内皮细胞损伤的保护作用并从AGEs/RAGE轴探讨其作用机制。方法利用酶消化法从大鼠心脏中分离出原代心肌微血管内皮细胞(CMECs),经免疫荧光法鉴定后,培养传代备用。在不同时间段采用不同浓度的葡萄糖对大鼠CMECs进行诱导干预,MTT检测方法发现葡萄糖浓度在33 mmol/L且干预48 h为最佳造模条件;予不同浓度的含药血清,同上法检测得10%含药血清干预48 h为最佳干预方法。将造模成功的CMECs分成5组:模型组(MC)、化痰组(RP)、化瘀组(DBS)、痰瘀同治组(RPDBS)、ALT-711组,予以10%含药血清和ALT-711细胞干预制剂进行干预;另设一组空白对照组(NC)。采用ELISA法检测各组内皮细胞AGEs含量;免疫荧光法、Western blot法和RT-qPCR法检测各组内皮细胞RAGE蛋白及基因表达水平;细胞色素c还原法检测各组内皮细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶活性水平;二氢乙锭荧光探针法检测各组内皮细胞活性氧自由基(ROS)活性水平。结果MC组较NC组,细胞内晚期糖基化终末产物(AGEs)含量、RAGE蛋白及基因表达水平、NADPH氧化酶活性水平和ROS活性水平均升高(P<0.01)。与MC组比较,各治疗组的上述指标均降低(P<0.01)。在降低AGEs含量、RAGE蛋白及基因表达水平和NADPH氧化酶活性水平上,RPDBS组较RP组与DBS组显著下降(P<0.01,P<0.05);在降低ROS水平上,RPDBS组与DBS组差异无统计学意义(P>0.05),较RP组显著下降(P<0.01)。结论痰瘀同治法可能通过抑制AGEs/RAGE轴及氧化应激对高糖损伤的CMECs起到保护作用,从而防治糖尿病心肌微血管病变,且痰瘀同治法优于单独化痰法和单独化瘀法。

痰瘀同治法调控JNK信号通路对糖尿病大鼠心肌保护的作用机制

目的观察痰瘀同治法对糖尿病模型大鼠心肌c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的干预机制。方法选取健康SPF级雄性SD大鼠50只,采用单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)溶液55 mg/kg建立糖尿病模型。继续喂养3周后,将造模成功大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、阿拉氯胺组、化瘀组、化痰组、痰瘀同治组,每组6只。化痰组、化瘀组、痰瘀同治组分别灌胃小陷胸汤(4.05 g/kg)、血府逐瘀汤(7.02 g/kg)、抵当陷胸汤(8.10 g/kg),阿拉氯胺组灌胃阿拉氯胺(3 mg/kg)。连续灌药8周,采用HE染色观察各组大鼠心肌组织形态学改变;Masson染色观察大鼠心肌间质胶原沉积情况;免疫组化染色检测心肌组织中JNK1蛋白表达;实时荧光定量PCR法检测大鼠心肌组织中JNK1、胰岛素受体底物-1(IRS-1)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)mRNA水平;Western blot法检测IRS-1、p-Akt、NLRP3蛋白表达。结果模型组大鼠心肌细胞排列混乱,细胞肥大,纹理模糊,间质有炎性浸润,胶原纤维增多,出现局灶性坏死;各给药组均可不同程度地改善纤维化、炎性浸润状况,减少心肌胶原沉积。与模型组比较,痰瘀同治组JNK1、NLRP3 mRNA及蛋白表达降低(P<0.01),IRS-1 mRNA水平及蛋白表达升高(P<0.01),p-Akt蛋白表达升高(P<0.01)。结论痰瘀同治法可有效改善糖尿病大鼠心肌病变,且效果较单纯使用化痰法或化瘀法更佳,其机制可能与抑制JNK信号通路激活,下调JNK1、NLRP3蛋白,上调IRS-1、Akt蛋白表达有关。