高比活木聚糖酶XYN-W及其突变体在酵母中的高效表达

将来源于瘤胃真菌Neocallimastix frontalis的高比活木聚糖酶基因xyn-w整合到毕赤酵母表达载体pPIC9上,通过电击转化得到重组转化子。SDS-PAGE分析和表达产物的研究表明,木聚糖酶基因xyn-w得到了高效分泌表达,在5 L发酵罐中木聚糖酶蛋白表达量达到1 mg/mL,酶活性达到13 000 IU以上。XYN-W的C端57个氨基酸序列为连接序列和锚定区域,利用PCR方法将此段序列去除,得到截短的木聚糖酶序列xyn-m。用相同方法构建高效表达XYN-M蛋白的毕赤酵母工程菌株,表达产物经纯化后进行酶学性质测定,结果表明,其比活为19 856.6 IU/mg,Kcat值为4 433.8 s-1,与纯化的XYN-W蛋白(比活性13 795.3 IU/mg、Kcat值2 717.1 s-1)相比,分别提高了43.9%和63.2%。

益生菌对肉仔鸡生产性能、胴体性状、免疫功能和肉品质的影响

本研究通过在饲粮中添加地衣芽胞杆菌、屎肠球菌和丁酸梭菌,研究其对肉仔鸡生产性能、胴体性状、免疫机能和肉品质的影响。试验选取1日龄的爱拔益加(AA)肉仔鸡公鸡和母鸡各432只,称量初始体重后随机分成4个试验组,每个试验组9个重复,每个重复公鸡和母鸡各12只,公母分开饲养。试验组1饲喂基础饲粮(对照组),试验组2饲喂基础饲粮+地衣芽孢杆菌(≥3×106 CFU/g),试验组3饲喂基础饲粮+屎肠球菌(≥1×106 CFU/g),试验组4饲喂基础饲粮+丁酸梭菌(≥1×106 CFU/g)。结果表明:与对照组相比,1)在生产性能方面,地衣芽胞杆菌和屎肠球菌均显著降低了AA肉仔鸡公鸡的料重比(P<0.05)。2)胴体性状方面,地衣芽胞杆菌显著提高了公鸡的腿肌率(P<0.05),显著降低了其腹脂率(P<0.05),显著提高母鸡的胸肌率、腿肌率(P<0.05);屎肠球菌和丁酸梭菌均显著提高了公鸡和母鸡的胸肌率(P<0.05),并显著降低其腹脂率(P<0.05)。3)免疫功能方面,地衣芽胞杆菌、屎肠球菌和丁酸梭菌均显著提高了公鸡和母鸡免疫器官指数(P<0.05),但是不同的益生菌菌株对公鸡和母鸡的效果不同。4)肉品质方面,地衣芽胞杆菌、屎肠球菌和丁酸梭菌均显著降低了公鸡和母鸡的滴水损失率和蒸煮损失率(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加地衣芽胞杆菌、屎肠球菌和丁酸梭菌显著改善了肉仔鸡胴体性状、免疫器官指数和肉品质。

不同益生菌对肉鸡肠道菌群结构的影响

本试验旨在研究益生菌对肉鸡肠道微生态环境的影响,饲养试验选取1日龄的肉公鸡432只,分成4个组,组1饲喂基础饲粮,组2饲喂基础饲粮+地衣芽孢杆菌(≥4×106CFU/g饲粮),组3饲喂基础饲粮+屎肠球菌(≥106CFU/g饲粮),组4饲喂基础饲粮+丁酸梭菌(≥106CFU/g饲粮)。采用PCR-变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术对肉鸡肠道内细菌16S r DNA V3区进行菌群多样性分析,利用实时荧光定量PCR(q PCR)技术对肠道菌群数量进行定量分析。PCR-DGGE指纹图谱结果表明:与对照组相比,地衣芽孢杆菌、屎肠球菌和丁酸梭菌均不同程度的影响了肉鸡回肠、空肠及盲肠样品PCR-DGGE指纹图谱的条带数,其中屎肠球菌处理后回肠、空肠样品PCR-DGGE指纹图谱的条带数显著增加(P<0.05),其余样品PCR-DGGE指纹图谱的条带数无显著变化(P>0.05)。由PCR-DGGE指纹图谱条带明亮度可知:屎肠球菌在回肠食糜中发生了生长繁殖,且促进了乳杆菌生长;地衣芽孢杆菌的添加促进了乳杆菌的生长繁殖,与其产生了协同作用,而抑制了粪肠球菌(C.eutactus)和梭菌(C.irregulare)的生长,二者相互竞争;饲粮中添加丁酸梭菌促进了L.aviaries在空肠及L.versmoldensis在回肠食糜中的生长繁殖,其作用效果比较专一。q PCR结果表明:地衣芽孢杆菌组空肠、回肠及盲肠细菌的菌群数量分别是对照组的1.5倍、1.0倍和1.3倍;屎肠球菌组空肠、回肠及盲肠细菌的菌群数量分别是对照组的4.0倍、6.0倍及0.6倍;丁酸梭菌组空肠、回肠及盲肠细菌的菌群数量分别是对照组的1倍、3.5倍及0.5倍。该研究结果表明地衣芽孢杆菌、屎肠球菌和丁酸梭菌不同程度改变了肉鸡肠道的菌群结构。

植被对斜坡稳定性的积极作用和局限性

植物根系在表土层形成了根-复合体,能够增强斜坡土体的抗剪强度,从而起到维持边坡稳定的作用。但根系主要分布在1米土层范围内,大部分植被根系并不能延伸到潜在滑动面以下,对维持斜坡稳定性的积极贡献是有限的。且在同等降雨条件下,植被发育斜坡的抗剪强度可能比裸坡的小,这说明植被护坡具有局限性。植被发育斜坡有更加丰富的优先流通道——大孔隙,它对滑坡孕育有一定的作用。

三维TSP在涌泥隧道空腔及松散体探测中的应用

介绍了三维TSP探测技术的原理,采用该技术探测了杨林隧道突水、涌泥的基本情况,并简述了探测系统的布设方法,将探测预报成果与实际开挖现状作了对比,为隧道施工中地质灾害的治理提供了依据。

抑菌肽在枯草芽孢杆菌中的构建表达、抑菌特性及发酵条件优化

本研究从蚯蚓中克隆得到抑菌肽基因ew T1,将其构建在枯草芽孢杆菌表达载体p HT43中得到重组质粒p HT43-ew T1,并转化至枯草芽孢杆菌蛋白酶缺陷型菌株WB800N中,得到重组菌,然后进行诱导表达以及发酵条件优化。优化后的重组菌发酵上清液对猪粪大肠杆菌的抑菌效价为47,362U/m L。蚯蚓抑菌肽基因ew T1可以在枯草芽孢杆菌中实现异源表达,为枯草芽孢杆菌抑菌肽分泌表达系统的进一步优化奠定了基础。