PCV2a、PCV2b和PCV2d多重PCR检测方法的建立及应用

为了建立一种能够快速鉴别PCV2a、PCV2b和PCV2d的方法,本研究针对PCV2a、PCV2b和PCV2d这3个基因型分别设计3组特异性引物,通过构建阳性标准质粒,筛选出最适引物组合,建立了一种PCV2分型的多重PCR检测方法,并对该方法进行优化后,开展特异性、灵敏度、重复性试验以及临床样品检测。结果显示,利用筛选出的最适引物组合建立了多重PCR检测方法,能特异性扩增出3个目的条带:PCV2a(321bp)、PCV2b(190 bp)和PCV2d(561 bp),探索出最佳退火温度和循环数分别为60℃和25个,与其他病原(PPV、PRV、PEDV、TGEV、PRRSV、CSFV)无交叉反应;对构建的阳性标准质粒的最低检测拷贝数为103copies;同一模板的3次重复性试验结果一致;检测2个猪场流行的PCV2基因型毒株,并通过测序和进化分析进一步验证了该检测方法的准确性。结果表明,本研究建立的多重PCR检测方法有助于开展PCV2a、PCV2b和PCV2d的快速鉴别诊断,为PCV2的防控以及流行病学研究提供了技术支持。