应用乙二醇冷冻小鼠胚胎:优化和简化程序的探索

提高解冻胚胎的发育能力和简化冷冻解冻程序是胚胎冷冻研究的两大永恒的主题。尽管乙二醇(EG)广泛用于家畜胚胎冷冻,但很少用于冷冻小鼠和人胚胎。为数很少的以EG慢冻小鼠或人胚胎的研究均采用较为复杂的人胚冷冻程序,未见简化程序和用EG冷冻小鼠桑椹胚的报道。采用简单的牛胚胎冷冻程序研究了发育时期、EG浓度、平衡方法、添加蔗糖以及解冻后脱除EG等对小鼠胚胎冻后发育能力的影响。结果显示:(1)致密晚期桑椹胚冻后体外培养囊胚发育率(81.92%±2.24%)和孵出率(68.56%±2.43%)显著(P<0.05)高于4细胞、8细胞胚胎和致密早期桑椹胚胎;(2)1.8molLEG冷冻小鼠致密晚期桑椹胚的囊胚发育和孵出率显著高于其它浓度;(3)在EG中平衡10min的冻后囊胚发育显著好于平衡5、20或30min;(4)两步平衡冷冻胚胎的囊胚发育率和孵出率显著高于一步平衡;(5)用EG冷冻小鼠胚胎无需添加蔗糖;(6)解冻后可不脱除EG;(7)冻后发育的早期囊胚和囊胚细胞数明显少于体内发育胚胎。因此,用EG冷冻小鼠胚胎的最佳方案为:致密晚期桑椹胚用1.8molLEG不添加蔗糖、两步平衡15min、以简单的牛胚胎冷冻程序冷冻解冻、解冻后不脱除EG直接培养或移植。

几种药物对高产奶牛子宫内膜炎治疗效果试验

本试验采用改进的采胚管,对奶牛子宫内灌注抗菌药物,进行子宫内膜炎的治疗。结果表明,应用碘伏和宫净治疗子宫内膜炎的治愈率显著高于土霉素、碘甘油和洁尔阴。应用经碘伏、金霉素、宫净和洁尔阴治疗的奶牛情期受胎率显著高于土霉素、碘甘油治疗的奶牛。应用洁尔阴冲洗液注入发情奶牛的子宫内,10～12h后进行人工授精,情期受胎率显著提高。

哺乳动物胚胎的冷冻保存

胚胎冷冻保存技术的应用使畜牧业的发展和实验动物的研究发生了很大的变化。本文主要介绍了哺乳动物胚胎冷冻保存的原理、方法、胚胎冷冻 /解冻过程中存在的一些问题及其发展趋势。

德州驴发情周期中卵泡动力学和激素变化规律的研究

本研究旨在揭示德州母驴发情季节的卵巢卵泡波变化特点以了解其卵泡的募集、选择、优势化、闭锁或者排卵,为驴人工授精和超数排卵提供可靠依据。本研究在德州驴发情季节(5～8月份)用直肠超声探查法每日检测5头德州母驴的10个排卵间隔的卵泡发育动态。同时每日采血,用放免法(RIA)检测E2、FSH、LH和IGF-1浓度。研究结果发现:(1)驴的排卵间隔平均为(23.22±0.28)d,每个周期中存在2个卵泡波,其中有4个展示主-主卵泡波,有6个展示次-主卵泡波。(2)第1波和第2波开始出现募集的时间分别在排卵后的第1和第(10.2±1.4)天,募集的卵泡数分别为(5.2±1.2)和(4.0±0.3)个,选择的卵泡数分别是(2.3±0.5)和(2.5±0.4)个。第1和第2卵泡波开始优势化的时间分别在排卵后的第(5.8±0.6)和第(18.1±1.4)天。波峰平均出现时间分别为第(7.67±0.24)和第(23.22±0.28)天。波峰时优势卵泡平均最大直径分别为(26.44±2.37)和(40.7±2.45)mm。第1和第2波最大优势卵泡每日平均生长率分别为(2.01±0.5)和(3.15±0.6)mm.d-1。(3)黄体(CL)最大直径平均为(37.61±1.58)mm,CL平均持续时间为(17.30±1.62)d。(4)E2浓度从排卵前3d至排卵后2d的发情期内均很高,平均维持在(46.47±9.53)pg.mL-1,在排卵前2d达到峰值(62.84±4.89)pg.mL-1。(5)由于E2的负反馈作用,FSH浓度到优势卵泡最后阶段(即第7天闭锁或第23或24天排卵时)大幅度下降。(6)LH在排卵前几天迅速升高,在排卵后第2天达到峰值(4.69±0.43)mIU.mL-1。(7)IGF-1的升降状况与E2基本相同,在排卵前1d达到峰值(47.9±3.91)ng.mL-1。通过上述卵泡和激素动态学变化,本研究得出下述结论:驴的卵巢卵泡发育是以卵泡波形式进行的,每个发情周期中最常出现的是2个卵泡波;排卵发生于发情结束前2d;E2和IGF-1调节驴的发情活动;FSH调节小卵泡的募集;LH增高与排卵有关。

影响山羊体外受精的因素

以屠宰山羊卵母细胞为材料研究了公羊个体、附睾不同部位精子、成熟培养和受精时卵丘存在与否、卵丘扩展程度及卵龄对山羊体外受精的影响。结果表明 :1)不同公羊精液在受精、卵裂和桑椹 /囊胚率上都有显著差异 ;2 )附睾尾精子和鲜精的受精、卵裂和桑椹 /囊胚率无显著差异 ,但显著高于附睾体和附睾头精子 ;3)成熟培养 2 4和 2 7h卵母细胞的的桑椹胚 /囊胚率显著高于培养 2 1和 30h卵母细胞 ;4 )卵丘扩展 3和 4级卵母细胞受精和桑椹胚 /囊胚率显著高于扩展 0和 1级卵母细胞 ;5 )成熟培养前机械去卵丘严重影响卵母细胞体外受精和桑椹胚 /囊胚率 ;6 )受精前完全去掉卵丘显著影响桑椹胚

猪卵母细胞孤雌激活方法及影响因素的研究

研究了离子霉素、电刺激、二硫苏糖醇、6-DMAP和硫柳汞等单独或结合使用及极体形态对猪卵母细胞的激活率、原核类型及激活卵卵裂的影响。结果表明:(1) 单独用离子霉素(88.9%)或电脉冲(80.0%)处理卵母细胞的激活率与二者同6-DMAP结合处理的激活率(84.3%和79.1%)差异不显著,但6-DMAP处理明显(P<0.05)提高电激活卵的1PN比率,而对离子霉素激活卵作用不明显。(2) DTT后处理显著提高硫柳汞处理对卵母细胞的激活率(由4.6%提高到82.6%)。(3) 极体皱缩(85.4%)和极体碎裂(86.2%)卵母细胞的电激活率显著高于极体完整卵母细胞(58.9%)。极体完整卵母细胞形成1PN的比率(78.8%)显著高于,而形成2PN的比率(18.2%)显著低于极体皱缩和碎裂卵母细胞。(4) 电脉冲结合6-DMAP激活卵的卵裂率(52.4%)明显高于离子霉素结合6-DMAP激活卵(23.0%),但与单纯电脉冲刺激激活卵的卵裂率(46.1%)没有明显差异。

分离后精子输精对超排奶牛卵子受精和胚胎质量的影响

研究应用性控精液对超排育成牛和成母牛输精,生产性控胚胎。结果表明:非性控精液组受精卵数同性控精液组相比差异不显著(P>0.05),但可用胚胎比例高于性控精液组(90.17%对89.73%,66.03%对63.57%)。育成牛群组受精卵比例高于成母牛群组(92.74%对84.93%)差异不显著(P>0.05);但可用胚胎比例显著高于成母牛群组(68.77%对55.28%)(P<0.05)。1次输2支性控精液组中,育成牛群组受精卵数、可用胚胎比例都显著高于成母牛群组(90.83%对79.69%,67.89%对53.13%)(P<0.05)。2次人工授精,每次输1支性控精液组中,育成牛群组受精卵及可用胚胎比例都显著高于成母牛群组(93.75%对87.41%,69.23%对56.30%)(P<0.05)。

动物繁殖技术应用进展

动物繁殖技术是生物技术的重要组成部分，是以动物生殖细胞和胚胎为主要研究对象，以生物科学为基础，研究调控和提高动物繁殖性能、发掘动物繁殖潜能。动物繁殖是动物生产中的关键环节，对动物数量的增加和质量的提高具有重要作用。随着科学技术的发展，动物繁殖技术的研究不断深入，应用范围日益广泛。动物繁殖技术从20世纪50年代的人工授精到70年代的胚胎移植的应用，开始了新纪元。常规人工授精和胚胎移植、性别控制等一系列高新技术的应用使得动物繁殖的速度更快、生产性能更高、准确性更好，

镁离子对小鼠卵母细胞电激活效果的影响

为探索镁离子对卵母细胞激活的作用 ,研究了电激液、操作液和培养液中镁离子对小鼠卵母细胞电激活效果的影响。注射 h CG后 18h获取的小鼠卵母细胞 ,在含有或不含有 Mg2 + 的电激液、操作液和培养液中进行电刺激、洗涤和培养 ,并于培养 6 h和 9h后分别检查原核形成情况。结果发现 ,当用既含钙又含镁离子的甘露醇 (PM)进行电刺激 ,用含 Mg2 +的 M2 (M2 )和 Whitten′s液 (WM)进行洗涤和培养时 ,卵母细胞激活率为 6 7.4 % ,而当电激液为不含 Mg2 +甘露醇 (PM- )时 ,激活率降至 5 1.3% ,2组间差异显著 (P<0 .0 5 )。用 PM-电刺激 ,以 M2或不含有 Mg2 + 的 M2 (M2 - )洗涤并用 WM或不含有 Mg2 +的 Whitten′s(WM- )培养 6 h,卵母细胞激活率分别为 5 0 .0 %、4 9.6 %和 5 3.8% ,3者间差异不显著 ,但显著 (P<0 .0 5 )低于用 PM、M2和 WM处理的对照组的激活率 (72 % )。培养 9h检查时 ,3个处理组的激活率均显著 (P<0 .0 5 )增加 (分别增加了 16 .7%、19.2 %和 18.2 % ) ,而对照组的激活率增加不明显 (5 % )。这些结果说明 ,电激液中的 Mg2 + 对卵母细胞的电激活率和原核形成速度有明显的促进作用 ,而操作液和培养液中的 Mg2 +

围产期小鼠子宫颈中糖皮质激素受体、11β羟基类固醇脱氢酶的表达

旨在揭示糖皮质激素(GC)及糖皮质激素受体(GR)、11β羟基类固醇脱氢酶1和2(11βHSD-1和2)对围产期小鼠子宫颈成熟的影响和机制。选取围产期5个时间点,分别为产前48h(-48h)、产前24h(-24h)、分娩时(0h)、产后12h(+12h)和产后48h(+48h)。首先通过ELISA检测血清皮质酮浓度变化,再通过免疫组化对GR和影响GC活性的两个酶,11βHSD-1和11βHSD-2,进行免疫定位和半定量检测。ELISA结果显示围产期GC浓度呈先升高后下降趋势,分娩时达到峰值(P<0.01)。免疫组化结果显示,11βHSD-1、11βHSD-2和GR在子宫颈腔上皮、基质、血管和平滑肌细胞上均有分布,11βHSD-1/11βHSD-2平均光密度的比值呈现先升高再下降趋势,分娩时比值最高;GR的表达量也是分娩时最高,分娩前后较低的趋势(P<0.01)。以上结果提示11βHSD-1合成的糖皮质激素通过其受体在子宫颈的成熟过程中起着关键性作用。

山羊同期发情-排卵定时人工输精及配套技术程序

山羊同期发情-排卵和定时人工输精技术是指通过利用外源激素调控山羊的生殖生理,诱导山羊同时发情-排卵,并进行定时人工输精(FTAI)的一项繁殖技术。经过同期发情-排卵处理后的山羊,因发情-排卵时间较为集中,可以不进行发情观察或发情鉴定,在预定的时间内进行人工输精,而且不降低受胎率。

几种药物对高产奶牛子宫内膜炎治疗效果试验

本试验采用改进的采胚管,对奶牛子宫内灌注抗菌药物,进行子宫内膜炎的治疗。结果表明,应用碘伏和宫净治疗子宫内膜炎的治愈率显著高于土霉素、碘甘油和洁尔阴。

奶牛性控冻精人工授精影响因素研究

用分离X和Y精子的性控精液进行人工授精是控制家畜性别之最简单可行的方法。然而,低密度性控精液输精效果还不如常规人工授精,许多技术环节都有待改进。以常规冻精和稀释常规冻精为对照,研究解冻方法、输精时间和部位、不同精液来源和输精员以及育成和经产牛等因素对性控冻精人工授精妊娠率的影响。结果显示,精液解冻水浴温度和持续时间对人工授精效果有显著影响,性控精液对解冻水浴温度更敏感;性控冻精和稀释常规冻精比常规冻精对输精时间要求更严格;3种精液输精到排卵卵泡同侧子宫角基部受胎率都显著高于输精于子宫体和同侧子宫角前端;3种精液育成牛受胎率(80%)都显著高于经产牛(50%);于输精同时注射促排卵素3号明显提高性控冻精受胎率;经严格挑选、能够从事胚胎移植操作的技术熟练输精员之间性控冻精受胎率差异不显著;在所设计的不同条件下,性控冻精与稀释同样倍数的常规冻精行为相似,说明精子分离过程没有对精子造成特殊损伤。研究结果说明,精确控制人工授精各个技术环节可以实现消除性控与非性控、低密度与高密度精液之间的差别,获得高妊娠率。

山东省奶牛高产群培育关键技术研究与应用

山东省是奶牛养殖大省,山东省奶产业位居全国前列,奶牛养殖在山东畜牧业中占有十分重要的地位,但是目前山东省奶牛养殖业发展仍然存在生产水平低、单产提升速度慢的突出问题.虽然山东省已经有排名全国前三的种公牛育种企业,整体技术水平堪比国外先进企业,但优质种母牛的选育工作严重脱节,导致山东省牛群产奶量提升速度慢,集中体现在养殖场普遍"只繁不育"、无选育措施.这归因于以下三方面的问题:①育种数据的采集技术薄弱,育种依赖的牛只系谱记录信息和生产性能测定(DHI测定)数据或缺失或不全或不准确.②遗传评估和选种选配体系不完善.育种数据的不足导致奶牛群不能统一遗传评估,同时种公牛的选择标准混乱,做不到科学选种选配,严重制约奶牛群产奶性能的提升.③育种技术依赖的配套技术不健全.高产奶牛繁殖率低下、日粮结构或营养能量水平不合理、乳房炎和代谢紊乱性疾病常发等问题限制了奶牛遗传潜力的有效发挥,影响选育进程的有效推进.围绕提高山东奶牛群单产水平、提升遗传改良速度的目标,项目在国家和省部级项目的支持下开展了10多年的创新研发与集成推广,从奶牛生产一线育种数据的数字化收集、统一遗传评估进而到科学选种选配方面,搭建育种"基础设施"及平台,同时创新奶牛生产中的必备繁殖、饲养、疾病防控配套技术,以达到牛群产量提升的目标.