数字PCR在人巨细胞病毒核酸定量检测中的应用

目的分析微滴式数字PCR(ddPCR)和实时荧光定量PCR(qPCR)检测人巨细胞病毒(HCMV)核酸的结果,比较两种方法的差异性,并评估ddPCR技术的临床有效性和实用性。方法收集306例疑似HCMV感染相关疾病患者血浆标本,采用ddPCR和qPCR两种方法测定同一份标本的HCMVDNA载量。结果疑似HCMV感染人群中,基于ddPCR的检测结果,男性和女性的阳性率差异无统计学意义(χ^(2)=1.07,P>0.05);不同年龄段的病例阳性率差异无统计学意义(χ^(2)=0.03,P>0.05);不同疾病类型的样本阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=10.38,P<0.05)。采用ddPCR方法检测的阳性率为46.41%(120/306),采用qPCR方法检测的阳性率为22.86%(70/306),阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=103.80,P<0.05)。受试者工作特征曲线(ROC)分析显示,ddPCR检测的灵敏度为0.96,特异性为0.97,ROC曲线下面积(Area Under Curve,AUC)为0.98。结论采用ddPCR检测HCMVDNA比qPCR具有更好的可定量性,尤其是在低浓度样本检测中更具优势,可以进一步作为临床诊断的直接方法,对现有qPCR检测体系做出有益补充和升级。

ATF2在低钾诱导小脑颗粒神经元凋亡中的作用

目的探讨bZip家族蛋白ATF2在撤钾诱导小脑颗粒神经元凋亡时的作用及机制。方法体外培养小脑颗粒神经元,用含5mM KCl的无血清培养基(简称为低钾或5K)处理诱导凋亡,Western blot检测ATF2和c-Jun蛋白的表达及磷酸化水平;免疫耗竭检测ATF2是否主要与c-Jun形成复合物;转染小分子干扰RNA检测沉默ATF2与c-Jun表达对神经元凋亡的影响。结果低钾刺激使ATF2和c-Jun磷酸化水平增加;ATF2主要与c-Jun形成复合物。分别沉默ATF2或c-Jun表达能抑制神经元凋亡(P<0.05),且抑制凋亡程度没有差异(P>0.05)。结论低钾条件下,ATF2主要通过与c-Jun形成复合物促进小脑颗粒神经元凋亡。

尼莫地平诱导小脑颗粒神经元凋亡及机制研究

目的探讨尼莫地平能否诱导小脑颗粒神经元凋亡及可能机制。方法取Sprague-Dawley(SD)大鼠小脑颗粒神经元,体外培养7d,用含10μM尼莫地平培养基处理神经元24h,对照组为含1‰二甲亚砜(DMSO)培养基处理细胞。Hoechst33258染胞核检测凋亡率。Westernblot检测c-Fos和c-Jun蛋白的表达水平;腺病毒作载体过表达c-Fos和负显性c-Jun突变体阻断c-Jun功能,检测能否抑制尼莫地平诱导的神经元凋亡,免疫细胞化学方法检测腺病毒感染率。结果对照组神经元的凋亡率为(10±4)%,尼莫地平处理6、12、24h后神经元的凋亡率分别为(13±4)%、(28±5)%、(45±3)%。尼莫地平处理使c-Fos表达下调,但c-Jun表达水平上调。腺病毒Ad-c-Fos和Ad-c-JunDN(负显性c-Jun突变体)对神经元感染率为85%以上,过表达c-Fos或负显性c-Jun突变体使尼莫地平诱导的神经元凋亡率从(42±6)%减少到(28±6)%或(20±3)%。结论尼莫地平通过下调c-Fos和上调c-Jun表达诱导小脑颗粒神经元凋亡。

数字PCR和荧光定量PCR技术在EB病毒核酸定量检测中的应用比较

目的 以微滴式数字PCR技术(ddPCR)为标准,考察实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测EBV DNA的临床检测性能,并评估ddPCR技术临床有效性和实用性。方法 收集229例疑似EBV感染相关疾病患者血浆标本,采用ddPCR和qPCR两种方法测定同一份血浆标本的EBV DNA载量。结果 疑似EBV感染人群中,采用ddPCR方法检测的阳性率为50.22%,采用qPCR方法检测的阳性率为20.96%,阳性率差异有统计学意义(P <0.05),其中两种方法结果不一致的样本98.51%(66/67)经一代测序证实为特异的EBV DNA信号。以ddPCR为标准,qPCR检测EBV DNA的灵敏度为41.74%,当qPCR的阈值从1 000 IU/ml提升到11 IU/ml时,灵敏度可提高到87.83%。结论 采用ddPCR检测EBV DNA灵敏度更高,有利于临床EBV病毒感染的早期诊断。

当前普通高中德育现状调查分析和对策

本文通过对普高德育的受重视程度、方法手段及评价机制等问题进行问卷调查分析,提出了要构建与时代相适应的学校道德体系、调整德育机构的设置以及建立德育评估机制等对策。

脂联素对LPS诱导脓毒血症大鼠心肌损伤的保护作用

目的研究脂联素(adiponectin,APN)对脓毒血症引起的心肌损伤的作用。方法采用LPS腹腔注射法构建大鼠急性脓毒血症模型,观察不同剂量的APN对LPS诱导脓毒血症大鼠心肌损伤的影响。结果相比空白对照NC组,LPS诱导显著增加大鼠心肌细胞凋亡水平,而APN预处理组(低、中、高剂量组)能抑制LPS诱导所致的心肌凋亡。进一步检测各组大鼠血清CK-MB和TNF-α浓度发现,APN预处理可呈剂量依赖降低LPS诱导产生的血清CK-MB和TNF-α。此外,LPS诱导抑制大鼠血清T-AOC水平,APN可呈剂量依赖方式提高T-AOC水平。结论 APN可有效通过抑制心肌凋亡、炎症因子释放和提高抗氧化应激能力保护LPS诱导脓毒血症大鼠心肌损伤。

谈高考前班主任心理疏导策略

高三下学期,考试频繁,学生思想起伏不定,基本会呈现三个阶段的思想变化,本文主要探讨学生在三个阶段中侧重的思想状况和表现,探讨如何进行德育工作的实践。