血管平滑肌细胞在血管中膜钙化中的作用研究进展

近年动脉钙化(VCs)的研究比较广泛,人们对动脉钙化的认识也有了进一步的提升,明确其是一种通过多种分子信号通路启动和调节的主动过程。在动脉中膜钙化过程中,血管平滑肌细胞(VSMCs)在钙化的启动、进展及调节中发挥了重要作用,本文回顾了血管平滑肌细胞在血管中膜钙化中的相关作用研究,并指出平滑肌细胞转分化为骨样细胞的动力研究以及如何通过控制平滑肌细胞的骨转化来逆转钙化将是未来可能的研究方向。

I-A^d/IgG2b Fc二聚体融合蛋白的构建表达及鉴定

目的:构建I-A^d/IgG2b Fc杆状病毒表达载体,使其在Sf9昆虫细胞内表达。方法:利用RT-PCR从BALB/c小鼠淋巴细胞中扩增出I-A^dα、I-A^dβ和IgG2b Fc目的基因序列,运用重叠PCR将I-A^dα和I-A^dβ分别与Fos和Jun的亮氨酸拉链序列相连,形成I-A^dα-Fos和I-A^dβ-Jun;利用酶切位点XbaⅠ将I-A^dα-Fos与IgG2b Fc段相连,形成I-A^dα-Fos-IgG2b Fc重组序列;分别将I-A^dα-Fos-IgG2b Fc和I-A^dβ-Jun插入杆状病毒表达载体pFastBac^(TM)Dual的P_(PH)和P_(P10)两个启动子的下游,构建出重组载体pFastBac^(TM)Dual+[I-A^d/IgG2b Fc];采用PCR及限制性内切酶对所构建的载体进行鉴定并测序;将pFastBac^(TM)Dual+[I-A^d/IgG2b Fc]转入DH10Bac感受态,使其在转座子的作用下形成重组杆粒病毒Bacmid+[I-A^d/IgG2b Fc],利用脂质体转染试剂将重组表达载体转染至Sf9昆虫细胞,P4后大量感染Sf9昆虫细胞,收集上清通过PEG20000浓缩可得到IAd/IgG2b Fc二聚体融合蛋白,通过双抗体夹心ELISA及Western blot对表达的蛋白进行检测。结果:PCR及酶切鉴定以及测序结果证实所构建的pFastBac^(TM)Dual+[I-A^d/IgG2b Fc]重组载体具有正确的序列;双抗体夹心ELISA和Western blot结果表明重组杆粒能成功感染Sf9昆虫细胞,并且表达的融合蛋白具有正确构象。结论:成功构建pFastBac^(TM)Dual+[I-A^d/IgG2b Fc]杆状病毒表达载体,并在Sf9昆虫细胞中表达,为研究I-A^d限制性的T细胞奠定了基础。