小鼠miR-155基因启动子分析及转录活性鉴定

目的:鉴定小鼠miR-155基因启动子转录活性区域,预测转录因子结合位点,探讨miR-155在巨噬细胞极化中表达失调的转录调控机制。方法:分别构建小鼠miR-155基因表达质粒和miR-155基因启动子连续截短片段的荧光素酶报告载体。将miR-155表达载体与miR-155启动子荧光素酶报告载体瞬时共转染人胚肾上皮细胞293T,48 h后检测双荧光素酶活性。选取miR-155基因转录起始位点(TSS)上游2000 nt作为启动子区,生物信息学预测该区域可能结合的转录因子,并在体外极化的M1型和M2型巨噬细胞中检测结合的相关转录因子的表达。结果:成功构建小鼠miR-155基因表达质粒和miR-155基因启动子连续截短片段的荧光素酶报告载体。双荧光素酶试验结果显示,小鼠miR-155基因TSS上游1~500 nt、1~1000 nt及1~2000 nt片段均存在转录激活作用,提示小鼠miR-155基因TSS上游1~2000 nt均为miR-155基因的启动子区域,其中1~500 nt为启动子核心区域。转录因子的生物信息学预测结果显示,miR-155基因TSS上游1~2000 nt的序列存在Crp、Pax-6、Elf-1、Gata-1、Hnf-4、BR-C Z4等转录因子结合位点。RT-qPCR结果显示,转录因子中结合分数最高的Crp、Pax-6、Elf-1和Gata-1均在M1型巨噬细胞中低表达,与miR-155的表达方式相反。结论:小鼠miR-155基因TSS上游1~2000 nt均为启动子区域,其中1~500 nt为转录核心区域。转录因子Crp、Pax-6、Elf-1和Gata-1均与miR-155基因启动子区域结合,并负调控miR-155的转录。

巨噬细胞极化在过敏性哮喘中的作用

过敏性哮喘(allergic asthma,AA)是常见的慢性呼吸道疾病,严重危害人们的身体健康.巨噬细胞是存在于肺组织中最丰富的免疫细胞群,参与了过敏性哮喘的发病过程.在受到不同变应原刺激后,巨噬细胞表现出不同的活化状态,并发挥不同的免疫功能,这一过程称之为巨噬细胞极化(mac-rophge polarization).这里主要讨论巨噬细胞及巨噬细胞极化在过敏性哮喘发病过程中的作用,以及巨噬细胞极化过程中表观遗传学变化的新概念,包括miRNAs、DNA甲基化和组蛋白修饰等,它们可能通过调节细胞信号和标志基因的表达来调控巨噬细胞极化,从而影响了过敏性哮喘发病过程,为过敏性哮喘的免疫治疗策略提供了新的见解.