脑溢安对大鼠缺氧神经干细胞丝氨酸/苏氨酸激酶磷酸化的影响

目的 :观察脑溢安 (NYA)对大鼠神经干细胞 (neuralstemcell,NSC)缺氧损伤后磷酸化丝氨酸 /苏氨酸激酶 (phosphorylatedserine/threoninekinase,phosph Akt)表达的影响 ,探讨该药对缺氧神经干细胞的保护作用机制。方法 :用分离、培养的神经干细胞造成缺氧模型 ,以正常大鼠血清和含脑溢安的大鼠血清对缺氧后的神经干细胞进行干预 ,用含NYA血清、正常血清、无血清的培养液干预缺氧的神经干细胞 ,Westernblotting检测神经干细胞缺氧损伤后Akt的磷酸化情况并用末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP缺口末端标记法 [terminal(TdT) mediateddUTP biotinnickendlabeling ,TUNEL]检测细胞凋亡情况。结果 :NYA血清缺氧神经干细胞组Akt磷酸化较无血清、正常血清缺氧神经干细胞组明显增加 (P <0 .0 5 ) ,TUNEL阳性细胞数明显减少 (P <0 .0 5 )。结论 :用脑溢安血清干预缺氧损伤的神经干细胞 ,可上调Akt的磷酸化 ,减少缺氧的神经干细胞凋亡 。

脑溢安对大鼠脑出血后Caspase-3表达的影响

目的 :观察脑出血后Caspase 3的表达及中药制剂脑溢安的干预作用。方法 :用VⅡ型胶原酶于脑内定位注射诱导大鼠脑出血模型 ,用免疫组织化学法观测脑内Caspase 3表达的阳性神经元细胞与数目。结果 :大鼠脑出血后 12hCaspase 3表达增加 ,2 4hCaspase 3达到高峰 ,2d、4dCas pase 3逐步降低 ,7d仍有表达 ,均高于假手术组 (P <0 0 1)。脑溢安治疗组在脑出血后各时间点均较模型组明显减低 (P <0 0 5 )。结论 :大鼠脑出血后Caspase 3表达增加 ,脑溢安对Caspase 3有抑制作用。

脑溢安对大鼠缺氧神经干细胞保护作用

目的:观察脑溢安对大鼠神经干细胞缺氧损伤后天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶-3(activatedcysteinylaspartatespecificprotease-3,Caspase-3)活化及细胞凋亡的影响,探讨该药抗脑损伤的作用机制。方法:用分离、培养的神经干细胞(neuralstemcellsNSC)造成缺氧模型,以正常大鼠血清、含脑溢安的大鼠血清对缺氧后的神经干细胞进行干预,用脑溢安血清、正常血清、无血清干预缺氧的神经干细胞,以及未受缺氧损伤的正常神经干细胞进行实验,检测神经干细胞缺氧损伤后Caspase-3的活化情况并用末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP缺口末端标记法犤terminal(TdT)-mediateddUTP-biotinnickendlabeling,TUNEL犦检测细胞凋亡情况。结果:正常血清缺氧神经干细胞组、无血清缺氧神经干细胞组有较多TUNEL阳性细胞,脑溢安血清缺氧神经干细胞组TUNEL阳性细胞数较少,而未缺氧的神经干细胞没有表达,脑溢安血清缺氧神经干细胞组与正常血清缺氧神经干细胞组、无血清缺氧神经干细胞组比较TUNEL细胞阳性细胞减少,差异有显著性意义(t=6.5826,6.6245,P<0.05)。脑溢安血清缺氧神经干细胞组与正常血清缺氧神经干细胞组及无血清缺氧神经干细胞组比较活化Caspase-3光密度比值减少,差异有显著性意义(t=4.2653,5.0131,P<0.05)。无血清。

菖芩Ⅰ号对重型颅脑外伤昏迷患者促醒的疗效观察

目的:观察菖芩Ⅰ号对重型颅脑外伤昏迷患者的促醒效果。方法:将格拉斯评分(GCS)≤8分的重型颅脑损伤昏迷患者47例随机分成治疗组(24例)和对照组(23例),两组均予以常规西医治疗,治疗组在对照组的基础上加用菖芩Ⅰ号治疗。结果:治疗组患者治疗1个月的苏醒时间、苏醒率及3个月的苏醒时间和预后与对照组相比差异显著(P<0.05)。结论:菖芩Ⅰ号治疗对重型颅脑损伤昏迷患者的神智恢复有较好疗效。

补阳还五汤对脑出血大鼠脑内Caspase-3活化的影响

目的研究补阳还五汤对脑出血大鼠的保护作用。方法采用微量注射器向大鼠苍白球内注入Ⅶ型胶原酶0.4U建立脑出血模型,用免疫组织化学法观察脑出血后1、2、4、7d,4个时间点活化Caspase-3表达变化,以阳性细胞计数作为观察指标,并观察血肿大小的变化。结果脑出血后1d大鼠血肿周围活化Caspase-3阳性神经元细胞计数最多,2d开始下降,7d明显下降,与假手术组比较具有统计学意义(P<0.01);补阳还五汤组与同时间点模型组比较:1、2d计数无统计学意义,4、7d均明显减少(P<0.05)。造模后1d血肿最大,2d有所变小,7d明显变小;治疗组在1、2d与模型组比较血肿大小无明显差异(P>0.05),4、7d具统计学意义(P<0.05)。结论大鼠脑出血后血肿周围神经元活化Caspase-3表达明显上调;补阳还五汤能下调Caspase-3的活化,减少神经元的凋亡,同时促进血肿的吸收。

脑溢安干预大鼠脑出血对丝氨酸/苏氨酸激酶表达影响的研究

目的 观察脑出血后丝氨酸／苏氨酸（Ｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ Ｋｉｎａｓｅ Ａｋｔ）的表达及中药制剂脑溢安的干预作用。方法 用Ⅶ型胶原酶于脑内定位注射诱导大鼠脑出血模型，用免疫组织化学法观测脑内有Ａｋｔ表达的阳性神经元细胞与数目。结果 大鼠脑出血后１２ｈ时Ａｋｔ开始表达增加，４ｄ时Ａｋｔ达到高峰，７ｄ时仍有表达均高于假手术组（Ｐ＜０．０１）。脑溢安治疗组在脑出血后２４ｈ、２ｄ、４ｄ、７ｄ各时间点Ａｋｔ的表达均较模型组明显增高（Ｐ＜０．０５）。结论 大鼠脑出血后Ａｋｔ表达增加，脑溢安对Ａｋｔ有上调作用。

补阳还五汤对脑出血大鼠脑内促血管生成素-1及其受体mRNA表达的影响

目的通过观察补阳还五汤对脑出血大鼠脑内损伤区促血管生成素-1（angiopoietin-1，Ang-1）及其内皮特异性受体（endothelial-specific receptor tyrosine kinase，Tie-2）mRNA表达的影响，探讨补阳还五汤的作用机制。方法160只SD大鼠随机分为正常组（10只）、假手术组（60只）、模型组（60只）、补阳还五汤（BYHWD）组（30只），通过立体定位向脑内苍白球注入Ⅶ型胶原酶0．5U建立脑出血模型。其中正常组自由饮水，假手术组和模型组灌服蒸馏水，BYHWD组灌服补阳还五汤。采用免疫组化方法检测假手术组和模型组1、4、7、14、21、28天各时间点Ang-1及其受体表达位置变化。运用逆转录聚合酶链式反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）检测正常组及其它各组造模术后1、4、7、14、21、28天各时间点Ang-1和Tie-2mRNA的动态变化。结果正常组和假手术组不同时间点Ang-1和Tie-2未见明显表达；模型组1-4天即有Ang-1／Tie-2阳性微血管段在血肿边缘表达，且从7天开始阳性微血管段逐渐伸入血肿区。模型组在脑出血术后1天Ang-1和Tie-2mRNA即有表达，到4天其表达仍然很微弱，与1天比较无明显的差异，随后两者表达逐渐增多，到28天时达到高峰（P〈0．05）；补阳还五汤组在术后第7天开始两者的表达即显著高于模型组同-时间点水平（P〈0．05），且补阳还五汤组在术后21天即达到高峰（P〈0．01）。结论补阳还五汤能促进脑出血大鼠脑内Ang-1和Tie-2mRNA表达的上调，可能在脑出血后微血管系统重建过程中促进血管生成，从而促进损伤组织的修复。

海马神经干细胞的分离、培养与鉴定

目的 :从海马分离鉴定出神经干细胞。方法 :机械分离新生鼠海马细胞 ,培养在无血清培养液中 ,选取单个克隆进行连续传代培养 ,用免疫组化检测nestin抗原和分化后神经细胞特异性抗原。结果 :从海马获得的细胞群能够连续传代 ,分离后的单个细胞能形成事迹球 ,免疫检测为nestin阳性 ;体外、体内分化的细胞分别显示神经元、星状胶质细胞、寡树突细胞抗原阳性。结论 :从海马分离出的细胞具有自我更新、增殖和分化能力 ,是神经干细胞。

脑溢安对新生大鼠海马神经干细胞缺氧损伤及p38MAPK活性的影响

目的探讨中药脑溢安颗粒(简称脑溢安)对神经干细胞缺氧损伤的影响及其保护作用机制.方法体外培养神经干细胞来自新生3～5 d SD大鼠海马组织,造缺氧损伤模型,用原位末端标记法(TUNEL)进行细胞凋亡检测,应用免疫共沉淀、激酶反应及Western blot技术研究脑溢安对缺氧损伤神经干细胞内p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 Mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)活性的影响.结果培养神经干细胞缺氧损伤后发生凋亡,脑溢安能促进缺氧损伤神经干细胞存活及减少神经干细胞凋亡;缺氧损伤后神经干细胞内p38MAPK活性增强,脑溢安血清组p38MAPK活性显著低于模型组和正常血清组(P＜0.01).结论脑溢安能保护缺氧损伤神经干细胞,抑制缺氧损伤激活的p38MAPK信号转导通路可能为其保护作用机制之一.

针刺配合药物治疗海洛因依赖临床疗效观察

治疗１００ 例，临床戒毒观察１０ 天。研究结果表明：针刺配合药物美沙酮戒毒疗效明显优于对照组美沙酮戒毒疗效（Ｐ＜０ ．０１），其复吸率低（Ｐ＜０．０１） ，差异有非常显著意义。

脑溢安对大鼠海马神经干细胞分化的影响

目的:应用血清药理学方法研究脑溢安对体外培养促神经干细胞的分化作用,旨在进步阐明脑溢安的脑保护机制。方法:从新生3d大鼠海马中分离神经干细胞,按不同培养方法进行分组,加神经干细胞基础培养液为空白组。于神经干细胞基础培养液中加50mL/L脑溢安血清为实验组。于神经干细胞基础培养液中加50mL/L正常血清为对照组。加入含50mL/L脑溢安血清的培养基中培养。在培养的第2天和第7天,用免疫细胞化学法计数Nestin,NF-200,GFAP,O4四类免疫阳性细胞的变化。结果:在培养的第2天,空白组Nestin阳性细胞最多,占数细胞总数的96.1%是实验组和对照组的8～11倍,其次是胶原纤维酸性蛋白细胞(glialfibrilleryacidicprotein,GFAP)、O4细胞,NF-200细胞最少,仅占细胞总数的3.83%;实验组以NF-200阳性细胞最多,占细胞总数的42.83%,分别为空白组11.3倍和对照组的1.2倍,其次是GFAP细胞,但较对照组少。培养的第7天,空白组仍以Nestin阳性细胞为最多,其他三类细胞与第2天比较无明显差异;实验组仍以NF-200为最多,占细胞总数的43.85%,其次是GFAP,O4细胞,Nestin细胞最少。培养7d后,实验组细胞的凋亡率(4.85%)与对照组(15.32%)比较差异有显著性意义(χ2=6.04,P<0.05)。

益气活血法对脑出血大鼠脑组织促血管生成素-1及其受体表达的影响

目的:通过观察益气活血法中药对脑出血大鼠脑损伤区组织促血管生成素-1(Ang-1)及其受体〔为含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶-2(Tie-2)〕表达的影响,探讨益气活血法治疗脑出血的作用机制。方法:288只SD大鼠被随机分为正常组8只,假手术组、模型组、益气活血组、益气组和活血组各56只。采用型胶原酶诱导脑出血大鼠模型。相应灌服益气活血法代表方补阳还五汤全方及其益气组分、活血组分药物(剂量均为临床70 kg成人用量的3倍)。各组于术后1、2、4、7、14、21和28 d各取8只大鼠,采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠脑组织形态学改变,用免疫组化法检测Ang-1及其受体Tie-2的表达,计数阳性血管作为观察指标。结果:HE染色显示正常组及假手术组各时间点未见血肿及局部明显病理学改变,而益气活血组微血管段多于活血组、益气组和模型组。免疫组化研究显示正常组及假手术组不同时间点Ang-1和Tie-2表达均未见明显变化;模型组、益气组、活血组及益气活血组脑出血后1 d即有Ang-1和Tie-2表达,模型组与益气组至21 d达到高峰,随后开始下降,活血组及益气活血组表达高峰时间提前至14 d,至21 d仍维持一定的表达水平。结论:在脑出血微血管系统重建过程中,益气活血法可能通过强化血肿周围Ang-1和受体Tie-2的表达,进而促进脑出血损伤区血管新生的作用,促进脑出血大鼠神经功能的恢复。

补阳还五汤对脑出血大鼠脑内MMP-2表达的影响

目的观察脑出血大鼠脑组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达,探讨补阳还五汤治疗脑出血的作用机制。方法采用立体定向技术制作大鼠脑出血模型,对出血后2、4、7、14、21、28 d后各组脑组织进行MMP-2免疫组织化学染色,检测脑组织各区域MMP-2的阳性微血管数。结果正常组未见表达,假手术组皮质偶见MMP-2表达;模型组大鼠MMP-2呈双峰表达,在造模后4 d达最高峰(P<0.01),之后有所下降,至21 d仍有表达并再有小高峰出现(P<0.01);补阳还五汤组4 d时为表达低谷,并明显低于模型组(P<0.01),其后逐渐上升至高水平维持达2 w,其中7、14、21 d表达均高于模型组(P<0.05),28 d表达稍下降但仍高于模型组(P<0.01)。结论补阳还五汤可通过调节脑出血后MMP-2的表达,有利于微血管系统重建,改善出血后脑组织的微环境。

益气活血法对脑出血大鼠脑内TSP-1、TSP-2及其受体CD36表达的影响

目的观察益气活血法对脑出血大鼠脑内损伤区血管新生和凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)、凝血酶敏感蛋白-2(TSP-2)及其受体CD36表达的影响。方法胶原酶诱导建立大鼠脑出血模型,随机分为正常组、假手术组、模型组、益气组、活血组、益气活血组,不同时间点灌注取脑,采用脑微血管银染法观察血管新生情况、免疫组化法观察各指标的表达情况。结果银染法益气活血组14～28d血肿周围及内部新生血管较其他各组多,35d可见血肿完全吸收,其他各组仍有较小血肿。TSP-1与TSP-2分别在造模后4、28d达高峰,CD36在造模后4、28d呈双峰表达。益气活血组4dTSP-1的表达高于模型组(P<0·01),4～7d下降明显,21dTSP-2的表达低于模型组(P<0·05),28d表达高于模型组(P<0·05)。结论益气活血法可能通过调整脑出血大鼠脑内TSP-1、TSP-2及其受体CD36的表达,降低其对血管新生的抑制作用,加快血肿吸收,促进脑组织修复。

补阳还五汤对脑出血大鼠脑内血管内皮生长因子mRNA表达的影响

目的通过观察补阳还五汤对脑出血大鼠脑内损伤区血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA表达的影响,探讨补阳还五汤的作用机制。方法以立体定位向脑内苍白球注入Ⅶ型胶原酶0.5U,建立脑出血模型。95只SD大鼠随机分为正常组5只、假手术组、模型组、补阳还五汤(BYHWD)组各30只,BYH-WD组灌服补阳还五汤,运用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测正常组及其他组造模术后1,4,7,14,21,28d各时间点VEGF mRNA的动态变化。结果正常组及假手术组不同时间点VEGF mRNA未见明显表达;模型组、补阳还五汤组在脑出血术后1d即有表达,其后逐渐增多,模型组在术后21d达到高峰(P<0.01);而补阳还五汤组在术后14d即达到高峰(P<0.01),随后开始下降;从第7天开始补阳还五汤组即高于模型组(P<0.05)。结论补阳还五汤能促进脑出血大鼠脑内VEGF mRNA的表达,从而调整血管新生过程,这可能是其促进组织修复的机制之一。

脑溢安颗粒对实验性大鼠脑出血后神经干细胞增殖的影响

目的:探讨中药脑溢安颗粒对脑出血后神经干细胞反应的影响。方法:72只雄性SD大鼠单纯随机分为假手术组、模型组、脑溢安组,采用Rosenberg方法复制大鼠脑出血模型,分别给予不同处理,于术后1,12h,1,3,5,7d处死动物,运用免疫组织化学,Westernblot方法检测脑出血后各组的nestin表达。结果:脑出血后,nestin阳性细胞增多,1d达高峰,然后逐渐降低,维持到第7天,nestin阳性细胞主要分布在海马、皮质区,且脑溢安组与模型组1d前各时间点差异无显著性意义(P>0.05),3d后各时间点差异有显著性意义(t分别为3.081,8.034,5.833,P<0.05～0.01);nestin蛋白表达有相同趋势。结论:正常脑组织中存在一定数量的神经干细胞,脑出血后神经干细胞被激活增殖,中药脑溢安能维持促进增殖,这种作用可能是通过调节细胞外因子来实现。

神经干细胞移植治疗脑出血大鼠模型时间窗的研究

目的研究神经干细胞移植治疗脑出血的时间窗。方法分离、培养大鼠海马神经干细胞,经Nestin免疫荧光鉴定,Brdu标记;25只SD大鼠制作脑出血模型,随机分为5组(1、2、3、4d移植组、模型组),分别在造模后第1、2、3、4d移植Brdu标记的神经干细胞于脑出血大鼠的患侧侧腔室下区(SVZ),模型组不移植,测试大鼠运动功能,14d时处死,取全脑固定、冰冻切片、Brdu免疫荧光染色,Brdu阳性细胞计数。结果各移植组大鼠神经功能缺损明显改善,2d移植组明显优于其他组(P<0.01);2d移植组Brdu阳性细胞数明显高于其它组(P<0.05)。结论神经干细胞移植治疗脑出血能有效改善脑出血动物运动功能;脑出血后2d可能是神经干细胞移植的最佳时间点。

高压氧对颅脑损伤患者血液流变学的影响

目的:探讨颅脑损伤患者血液流变学变化及高压氧治疗的影响。方法:经确诊的颅脑损伤患者72例,按是否接受高压氧治疗分为高压氧治疗组(HBO组)37例,男22例,女15例;对照组35例,男11例,女24例。对照组仅采用常规及对症治疗,未使用止血药物及抗纤溶药物;HBO组加用高压氧治疗,加压20min,稳压压力0.23MPa,吸氧80min,中间休息10min,减压20min,1次/d,10次1疗程,2个疗程,检测治疗前后血液流变学指标。结果:HBO组的总有效率明显高于对照组(P<0.05),同时HBO组全血黏度、血浆黏度、全血黏度、红细胞压积(%)、血沉(MM/H)、全血还原粘度、红细胞刚性指数、红细胞聚集指数均有明显下降,而红细胞变形指数、红细胞电泳指数升高,与治疗前比较有统计学差异(P<0.05)。结论:HBO能明显改善颅脑损伤患者的血液流变学指标,促进神经功能恢复。

脑出血大鼠脑组织bax表达及脑溢安颗粒的干预

目的 :探讨脑溢安颗粒 (简称脑溢安 )治疗脑出血的疗效机制。方法 :立体定位于苍白球内注射VⅡ型胶原酶诱导大鼠脑出血模型 ,采用免疫组织化学法检测模型组、脑溢安组与各对照组脑组织内bax蛋白表达。结果 :模型组脑组织内bax阳性细胞在 6h开始增加 ,1d达峰值 ,4d时明显减少。 1 2h ,1d ,2d ,4d ,7d脑溢安组其bax阳性细胞明显低于模型组。结论

《神农本草经》三品分类浅析——胡随瑜教授《神农本草经》讲记(一)

胡随瑜,中南大学湘雅医院中西医结合研究所教授、一级主任医师、博士研究生导师、湖南省名中医,兼任国务院学位办第五届终审委员（中西医结合学科组）,国家药品食品监督管理局审评专家。主要从事中医肝脏象传统理论的现代研究;抑郁症中医证治规律研究;中药新药药效学、毒理学研究。