猪囊虫病基因工程疫苗的生产工艺研究

从重组抗原的表达、复性与纯化、疫苗的配制及疫苗的质量控制等 4个方面对猪囊虫病基因工程疫苗的生产工艺进行了探索。确定重组抗原表达的最佳培养液为LB磷酸盐培养液 ,诱导剂为 10 g/L乳糖 ,并根据接种量、溶解氧、罐压、发酵时间等对发酵结果的影响 ,确定了发酵培养的最佳条件。在重组抗原的复性与纯化方面 ,工程菌的裂解条件为先用溶菌酶感作再用超声波破菌 ,超声强度为 2 40W 5次 ;包涵体的纯化先采用低浓度的尿素洗涤 2次 ,再以 5 g/LTritonX 10 0洗涤 1遍 ,包涵体纯度可达 5 0 %以上 ;重组抗原的复性以静置缓慢透析或分步稀释法为佳 ,复性液为含 2mol/L尿素、160 μmol/LPEG 40 0 0、1.0mmol/LGSH、0 .1mmol/LGSSG的 pH 9.0 5 0mmol/LTris HCl、1mmol/LEDTA缓冲液 ;重组抗原的纯化采用分子筛凝胶层析和离子交换凝胶层析的色谱组合 ,重组抗原的纯度达 90 %以上。此外对该疫苗进行了中试生产 ,共生产 7批 ,产品全部合格 ,表明该生产工艺稳定 ,可批量化生产。

鸡腺胃型传染性支气管炎病毒金坛分离株核蛋白基因的克隆和测序

应用逆转录多聚酶链反应技术，参照 Ｂｏｕｒｓｎｅｌｌ等发表的鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因序列，自行设计并合成１对引物，应用该引物，从感染ＩＢＶ金坛株的第五代ＳＰＦ鸡胚尿囊液中扩增出片段大小为８２８ｈｐ的ＪＴ株 Ｎ基因，与设计相符，表明扩增片段为 ＩＢＶ ＪＴ株 Ｎ基因。将扩增片段与 ｐＧＥＭ－ Ｔ Ｅａｓｙ载体连接，经核酸序列测定，与Ｇｅｎｅｂａｎｋ中报道的ＩＢＶ其它株Ｎ基因同源性较高。