17株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌相关耐药基因及分子流行病学分析

目的了解17株亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌相关耐药基因及分子流行病学状况。方法采用Hodge试验检测碳青霉烯酶表型;采用PCR法检测碳青霉烯酶、I类头孢菌素酶(AmpC)和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因,进行测序及网上比对确定基因型;采用肠杆菌科基因间重复序列(ERIC)和多位点序列分型(MLST)对菌株进行同源性和遗传相关性分析。结果 15株肺炎克雷伯菌检出KPC-2、TEM-1、SHV和CTX-M型基因,SHV12和CTX-M-24为主要基因亚型;2株大肠埃希菌检出KPC-2基因,其中1株大肠埃希菌检出TEM-1和CTX-M-24基因,另一株大肠埃希菌检出CMY-42和OXA-1基因;17株菌未检测到IMP、VIM和NDM碳青霉烯酶。15株肺炎克雷伯菌分为A、B和C三个ERIC类别,12株A类为ST11型,2株B类为ST290和ST147型,1株C类为ST967型,2株大肠埃希菌是同一ERIC类别。结论 17株菌亚胺培南耐药主要与KPC-2基因有关,产KPC-2肺炎克雷伯菌在本院神经外科病区呈克隆传播流行,ST11型为此次流行的主要型别;17株菌同时也是产ESBLs株或产ApmC酶株;首次在世界范围内发现ST290和ST967型产KPC-2肺炎克雷伯菌;临床科室应加强院内感染控制措施。

3项指标检测在细菌感染诊断中的价值探讨

目的探讨炎性指标中性粒细胞表面CD64、单核细胞HLA-DR、降钙素原（PCT）检测在细菌感染性疾病诊断中的价值。方法选取2013年10月至2014年3月福建省立医院临床初步诊断为感染性疾病的住院患者90例,按出院时回顾性分析,将患者分为细菌感染组、非细菌感染组（包括真菌或支原体感染）;另选取同期健康体检者30例作为对照组。比较各组之间CD64、HLA-DR、PCT、C反应蛋白（CRP）、中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）积分、白细胞计数（WBC）的检测结果。结果细菌感染组CD64、PCT、CRP明显高于非细菌感染组与对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）,NAP、WBC明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）,HLA-DR明显低于非细菌感染组与对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）;非细菌感染组CD64、CRP、NAP积分（P〈0.01）与WBC计数（P〈0.05）明显高于对照组,而PCT及单核细胞HLA-DR与对照组相比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。细菌感染组各炎性指标相关性分析表明：CD64与HLA-DR呈负相关（r=-0.36,P〈0.01）;PCT与CRP呈正相关（r=0.43,P〈0.01）;HLA-DR除与CD64呈负相关外,还与CRP、WBC呈负相关（P〈0.01）。按PCT水平对感染程度分级,结果显示PCT各水平组的HLA-DR水平均明显低于对照组（P〈0.05,P〈0.01）,并呈现明显递减趋势;除0.05~0.5ng/mL组外,其他PCT水平组的CD64水平均明显高于对照组（P〈0.05,P〈0.01）,并呈现明显的递增趋势。结论 PCT、CD64、HLA-DR是较好的细菌感染指标,3者联合检测对细菌感染的诊断、评估与监测有着重要的意义。

20株亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌耐药机制及分子流行病学研究

目的对20株亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌耐药机制和分子流行病学进行研究。方法改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型;PCR法检测碳青霉烯酶、Amp C酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因及整合子,并进行测序及BLAST比对确定基因型;脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)分析菌株同源性和遗传相关性;并进行药敏试验结果分析。结果20株菌均携带KPC-2、TEM-1、SHV和CTX-M型基因,未检测到IMP、VIM、OXA和NDM碳青霉烯酶基因和amp C酶基因;20株菌均有I类整合子,其中18株的整合子整合有耐药基因盒,主要整合基因是aad A2。20株菌中19株被PFGE分型为13个型别,其中P1型和P7型各有3株,P2和P 10型各有2株;20株菌中17株为ST11型,其余3株分别为ST290、ST147和ST967型;20株菌呈多重耐药或泛耐药。结论携带KPC-2是20株肺炎克雷伯菌耐亚胺培南的主要原因,多重耐药或泛耐药与其他β-内酰胺酶和整合子有关;院内存在克隆株流行;检出ST290和ST967型别产KPC肺炎克雷伯菌。

肝素结合蛋白单克隆抗体制备及应用

[目的]制备抗肝素结合蛋白(HBP)单克隆抗体,并应用抗体构建HBP磁微粒化学发光(CLIA)检测方法。[方法]采用细胞融合技术制备抗体、间接ELISA法测定效价、SDS-PAGE测定抗体纯度、分子互作仪测定亲和力,通过分子互作仪筛选抗体配对,建立磁微粒化学发光检测方法,并对其灵敏度、特异性等分析性能进行评估。[结果]获得7株稳定分泌抗体的细胞株,其分泌的抗体效价均达到1×10^(-5)mg/mL,纯度达到90%,亲和力达10^(-9)M。所构建的CLIA最低检测限为4.74 ng/mL,低、中、高浓度样本的添加回收率为100.78%、99.03%、98.58%,低、中、高值样本检测的变异系数(CV)均小于5%,与降钙素原、C反应蛋白、血清淀粉样蛋白A无交叉反应,血红蛋白、胆红素、甘油三脂对检测无干扰。[结论]成功制备了抗人HBP单克隆抗体,并建立了精密度高、灵敏度好、特异性高的HBP磁微粒化学发光检测体系。

耐亚胺培南肺炎克雷伯菌耐药基因检测与分子流行病学研究

目的对耐亚胺培南肺炎克雷伯菌的耐药基因携带情况及分子流行病学特征进行研究,以降低耐药率。方法对2013年10月-2014年5月临床分离的15株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌,采用Hodge试验检测碳青霉烯酶表型;采用PCR法检测碳青霉烯酶、AmpC酶和ESBLs耐药基因及整合子,进行测序及网上比对确定基因型;采用肠杆菌科基因间重复序列(ERIC)和多位点序列分型(MLST)对菌株进行同源性和遗传相关性研究。结果 15株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌均检出KPC-2、TEM-1、SHV和CTX-M型基因,SHV12和CTX-M-24为主要基因亚型;未检测到IMP、VIM、OXA和NDM碳青霉烯酶基因和AmpC酶基因;各带有Ⅰ类整合子,整合的主要耐药基因为aadA2;同源性和遗传相关性分析,15株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌可分为A、B、C 3种ERIC类别,12株A菌为ST11型,2株B菌为ST290和ST147,1株C菌为ST967;15株肺炎克雷伯菌呈多药耐药或泛耐药,仅磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的敏感率>50.0%。结论 15株肺炎克雷伯菌的多药耐药或泛耐药与菌株携带KPC-2碳青霉烯酶、CTX-M型ESBLs和其他β-内酰胺酶及整合子有关;产KPC-2肺炎克雷伯菌在神经外科病区呈克隆传播,ST11型菌株为此次流行的主要株;发现ST290和ST967型产KPC-2肺炎克雷伯菌。