缝隙连接蛋白43对人非小细胞肺癌HCC827细胞吉非替尼获得性耐药机制的初步研究

目的探讨缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)与非小细胞肺癌(NSCLC)细胞产生吉非替尼(Gefitinib)获得性耐药的关系。方法在Gefitinib敏感细胞株HCC827上,通过逐步递增Gefitinib浓度诱导获得Gefitinib耐药细胞株HCC827 GR;MTT法检测Gefitinib对HCC827/GR细胞的IC_(50);RT-PCR检测Cx43的mRNA水平;Western blot检测Cx43和磷酸化Akt(p-Akt)的蛋白水平;parachute荧光示踪法检测细胞缝隙连接功能(gap junction intercellular communication,GJIC);免疫荧光技术检测Cx43的细胞定位。结果Gefitinib作用于HCC827和HCC827 GR的IC_(50)分别为(0.07±0.019)μmol·L^(-1)、(10.84±0.021)μmol·L^(-1)(P<0.01);HCC827 GR中Cx43的mRNA和蛋白水平较HCC827明显降低(P<0.05),但p-Akt蛋白水平明显升高(P<0.05)。在HCC827 GR细胞上加PI3K的特异性抑制剂LY294002(25μmol·L^(-1),24 h)后,p-Akt蛋白水平明显下降(P<0.01),且Cx43的蛋白水平明显升高(P<0.01)。HCC827及HCC827 GR均未检测到GJIC,用GJIC增强剂RA(retinoic acid)处理(10μmol·L^(-1),24 h)上述细胞,亦未检测到荧光传递,免疫荧光结果显示Cx43表达在细胞胞质。结论胞质中Cx43的下调可能促进NSCLC细胞对Gefitinib的获得性耐药,其机制可能与Cx43非GJIC依赖的PI3K/Akt信号通路激活有关。

NOX4介导缺氧诱导A549细胞侵袭的机制研究

目的:探讨NADPH氧化酶4(NOX4)对缺氧诱导A549细胞侵袭的影响及其可能的作用机制。方法:将A549细胞分为常氧组和缺氧组,采用RT-PCR检测细胞中HIF-1αmRNA的表达水平;过氧化氢检测试剂盒检测细胞中活性氧簇(ROS)水平;Transwell法检测A549细胞的侵袭情况;Western blotting法检测A549细胞中NOX4、Akt、磷酸化的Akt(p-Akt)蛋白的表达情况。结果:与常氧组相比,缺氧组A549细胞中HIF-1αmRNA表达水平明显增高(P<0.01),且细胞的侵袭能力显著增强(P<0.01),且缺氧组中NOX4、p-Akt蛋白表达量较常氧组显著上调(P<0.01),细胞内ROS水平显著增加(P<0.01)。与缺氧组相比,在缺氧组A549细胞中加入NOX4抑制剂GKT137831(25μmol/L)或DPI(10μmol/L)后,可明显逆转缺氧对A549细胞的侵袭促进作用(P<0.05)及逆转Akt的磷酸化(P<0.01);且PI3K/Akt信号抑制剂LY294002(30μmol/L)处理后,A549细胞的侵袭能力显著减弱(P<0.01)。结论:缺氧能够促进NOX4介导的A549细胞侵袭,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。

肝细胞肝癌患者癌组织中Ras相关C3肉毒素底物1、转化生长因子β1表达变化及其意义

目的观察肝细胞肝癌(HCC)患者癌组织中Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)、转化生长因子β_1(TGF-β_1)的表达变化,并探讨其意义。方法 73例HCC患者,均行HCC切除术,术中保留HCC组织及相应癌旁组织,采用免疫组化法检测HCC组织、癌旁正常组织Rac1及TGF-β_1,分析其与HCC临床病理特征之间的关系。应用kaplan-Meier生存曲线分析Rac1和TGF-β_1共同表达与HCC预后的关系。结果 HCC组织、癌旁正常组织Rac1的阳性表达率分别为37.0%(27/73)、20.5%(15/73),二者比较,P<0.05;HCC组织、癌旁正常组织TGF-β_1的阳性表达率分别为61.6%(45/73)、28.8%(21/73),二者比较,P<0.05。HCC组织TGF-β_1的表达与肿瘤直径、血清甲胎蛋白表达、门静脉癌栓、TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05)。Rac1与TGF-β_1在HCC中的表达呈正相关(r=0.313,P<0.01),Rac1与TGF-β_1的共同高表达与HCC TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.01)。Rac1与TGF-β_1共同高表达与HCC患者的不良预后呈正相关(r=0.499,P<0.05)。结论 HCC组织中Rac1、TGF-β_1均呈高表达。Rac1、TGF-β_1共同高表达与HCC的进展及不良预后有关。

Connexin 43对非小细胞肺癌细胞吉非替尼原发性耐药的影响

目的:探讨缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)对非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)吉非替尼原发性耐药的影响。方法:MTT法测定吉非替尼对3株非突变型EGFR(WT-EGFR)NSCLC细胞系A549、H1299、Calu3细胞的半数抑制浓度(IC50);Western blot观察Cx43、磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)蛋白在上述细胞系中的表达水平;"Parachute"法检测细胞缝隙连接功能(gap junction intercellular communication,GJIC);免疫荧光法检测Cx43蛋白在细胞中的定位。结果:吉非替尼作用于Calu3、A549、H1299细胞的IC50分别为(0.064±0.011)μmol/L、(13.64±0.015)μmol/L、(20.054±0.012)μmol/L,即A549、H1299细胞对吉非替尼原发性耐药;A549、H1299细胞中Cx43、p-Akt蛋白水平显著高于Calu3细胞(P<0.01);A549、H1299细胞有荧光传递现象,且Cx43蛋白定位在A549、H1299细胞膜上,而Calu3细胞无荧光传递现象,且Cx43主要表达于细胞质上。结论:NSCLC细胞膜上调的Cx43及其组成的GJIC可促进细胞对吉非替尼的原发性耐药,其机制可能与其激活PI3K/Akt信号通路有关。

不同产地姜三七挥发性化学成分的气相色谱-质谱分析

目的研究姜三七块根和根茎不同采收期挥发油的化学成分,为姜三七的合理种植提供科学依据。方法采用水蒸气蒸馏法提取姜三七挥发油,应用GC毛细管柱进行分离,质谱检测,面积归一化法测定其相对含量。结果不同产地姜三七块根和根茎的挥发性成分含量较高的依次为衣兰烯、莰烯、姜三七醌和α-石竹烯,衣兰烯在1,2和3号样品中的含量依次为23.42%,25.60%和19.68%,姜三七醌在姜三七中为特殊性成分,其含量在1,2和3号样品中的含量依次为9.65%,10.55%和14.23%。结论不同产地姜三七中的主要挥发性化学成分基本相同,但含量相差较大,此结果可以为姜三七的种植基地选择和推广应用提供实验依据。

护蛋

“小心,别碰了我的蛋!”也不知道自己今天怎么了,居然用那么大的嗓门朝正向身边经过的涂斌喊道。昨天早上,许老师捧着一个精致的纸盒,神情严肃地向全班同学宣布:“