神经元N受体α4β2、α4β4和α7亚型在激动剂作用下功能失敏的特征

目的探讨激动剂持续或反复作用下SH-EP1细胞株转染表达的神经元α4β2、α4β4和α7亚型N受体功能失敏的特征。方法细胞传代培养3d后以烟碱(α4β2和α4β4)或胆碱(α7)为激动剂,通过喷射给药,采用膜片钳全细胞记录技术研究3种受体亚型功能失敏的药理学特征。结果在分别表达α4β2、α4β4和α7的SH-EP1细胞上喷射给予相应激动剂能够诱发浓度依赖性的内向电流。持续给予激动剂,α7迅速失敏,速度最快,程度最深;α4β4失敏最慢,程度最浅;而α4β2呈先快后慢的双相失敏,失敏速度与程度均居中。反复多次给予激动剂,α4β2失敏最快,而α4β4与α7无明显失敏。结论神经元N受体α4β2、α4β4和α7亚型在激动剂持续或反复作用下功能失敏过程各不相同,这可能与它们在有机磷毒物中毒时过度蓄积的乙酰胆碱持续作用、烟草成瘾时烟碱反复作用所介导的不同效应有关。

SH-EP1细胞株转染表达神经元N受体α4β2、α4β4和α7亚型激活态的电生理学特征

目的:建立SH-EP1细胞株转染表达的神经元N受体α4β2、α4β4和α7亚型的膜片钳全细胞记录技术并研究其激活态的电生理学特征。方法:用高糖DMEM培养液培养细胞。传代3d后,细胞可用于膜片钳全细胞记录。通过多管给药电极喷射给予激动剂烟碱(α4β2,α4β4)或胆碱(α7)诱导受体由静息态转变为激活态。结果:传代培养的SH-EP1细胞功能状态良好,受体表达丰富。α4β2、α4β4和α7三种亚型均可被激动剂快速激活诱发内向电流,且该三种通道的内向电流均具有激动剂浓度依赖性、电压依赖性和内向整流特性。三种通道由静息态转变为激活态、以及激活态受体数目减少的速度各不相同。其中,α7亚型激活速度最快,失活速度也最快;α4β4亚型激活速度最慢,失活速度也最慢;α4β2亚型则均居中。结论:在激动剂作用下神经元N受体α4β2、α4β4和α7亚型激活态的形成和转变各具特点,但其介导的内向电流均具有激动剂浓度依赖性、电压依赖性和内向整流特性。

神经元N受体α4β2亚型在激动剂作用下功能失敏后再激活及宾赛克嗪的拮抗作用

目的:研究神经元N受体α4β2亚型在激动剂持续作用下,功能失敏后再激活,以及宾赛克嗪的拮抗作用。方法:在转染后稳定表达神经元N受体α4β2亚型的SH-EP1细胞株上,以烟碱为工具药,通过喷射给药,采用膜片钳全细胞记录技术进行研究。结果:快速给予1mmol/L浓度的烟碱,可诱发一内向电流,该电流快速激活达到峰值后,在激动剂持续作用下迅速失敏至基线附近。当激动剂去除后可再次记录到一内向电流,该电流可被新型胆碱受体拮抗剂宾赛克嗪所阻断。结论:SH-EP1细胞株转染表达的神经元N受体α4β2亚型在高浓度激动剂持续作用下发生功能失敏,当激动剂去除后可再度激活,此再激活过程可被新型胆碱受体拮抗剂宾赛克嗪所拮抗。