柯里拉京抑制LPS和ATP激活的NLRP3炎症小体和巨噬细胞焦亡

目的探讨柯里拉京对细菌脂多糖(LPS)联合腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)诱导的巨噬细胞内NLRP3炎症小体活化和细胞焦亡的调控作用和机制。方法采用CCK8试剂检测不同浓度柯里拉京对J774A.1细胞活力的影响;碘化丙啶(PI)染色和乳酸脱氢酶(LDH)释放检测柯里拉京对LPS+ATP诱导的细胞死亡的影响。Western blot法检测细胞上清液中炎症小体活化标志物caspase-1 p20(Mr20000)和成熟IL-1β(Mr17000)的表达水平,以及检测细胞内NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β前体(pro-IL-1β)和焦亡执行蛋白GSDMD的表达。ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β的水平。活性氧(ROS)荧光探针H2DCFDA染色观察柯里拉京对ROS产生的影响。结果柯里拉京浓度小于40μmol·L-1时对细胞活性影响较小。柯里拉京减少LPS+ATP刺激的细胞内PI阳性细胞的比例和LDH的释放。柯里拉京抑制LPS+ATP刺激的巨噬细胞内GSDMD蛋白N末端(GSDMD-NT)的表达,以及减少细胞释放caspase-1 p20和成熟IL-1β到培养上清。柯里拉京抑制细胞分泌炎症因子IL-1β和减少ROS的产生。然而ROS的诱导剂鱼藤酮能拮抗柯里拉京抑制NLRP3炎症小体活化和细胞焦亡的作用。结论柯里拉京抑制LPS+ATP诱导的巨噬细胞内NLRP3炎症小体活化和细胞焦亡依赖于抗氧化作用。