吹扫捕集-气质联用法测定天然饮用水中挥发性有机物

采用吹扫捕集-气相色谱/质谱联用法,测定天然饮用水中35种挥发性有机化合物,包括三卤甲烷、卤代苯类、苯系物以及多环芳烃类等。方法检出限范围为0.05～0.17μg/L,35种有机物加标5μg/L测定回收率为86.5%～113%,RSD(n=6)为1.6%～6.1%。调研了市售的44个瓶装天然饮用水和5个水源水样品:瓶装天然饮用水中检出1,2-二氯乙烷、一氯二溴甲烷、二氯一溴甲烷、三溴甲烷、苯、三氯甲烷、1,2,4-三甲苯、甲苯共8个化合物,其中三氯甲烷的检出率达到49%,但检测结果均在相关标准的限量要求范围内;水源水样品中均未测得挥发性有机化合物。

高效液相色谱-二极管阵列法测定豆制品中碱性嫩黄O的含量

研究了以高效液相色谱-二极管阵列法测定豆制品中的碱性嫩黄O含量的检测方法。采用Hypersil ODS-C18色谱柱,以4:6(V/V)的甲醇-0.5%乙酸铵溶液作流动相,流速1.0mL/min,用二极管阵列检测器于436nm波长下进行检测,并以保留时间和三维光谱图相似性系数进行定性。方法线性范围为0.25-50μg/mL(r=0.9999),在5.0g 样品中加入250μg标准物质的回收率及相对标准偏差(RSD)分别为95.0%(n=6)和1.5%(n=6)。

固相微萃取-气相色谱-质谱法同时测定天然饮用水中39种有机污染物

提出了固相微萃取-气相色谱-质谱法测定天然饮用水中39种有机污染物含量的方法。为使固相微萃取达到更高的效率,选用60μm PDMS/DVB作为固相萃取头的涂层,萃取温度及时间为90℃和30min,解析温度及时间为270℃和10min。用J&W DB-35 MS毛细管色谱柱分离,电子轰击离子源选择离子监测模式检测。39种有机污染物的质量浓度均在0.10～50.0μg.L-1范围内与其峰面积呈线性关系,方法的检出限(3S/N)在0.002～2μg.L-1之间。方法的回收率在82.0%～110%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)在2.0%～13%之间。

高效液相色谱-二极管阵列法测定食品中苏丹红(I)着色剂

建立了用高效液相色谱-二极管阵列法测定食品中的苏丹红含量的检测方法。本文对不同样品采用不同的前处理方法,然后用Hypersil ODS-C18色谱柱,以9:1(V/V)的乙腈-1%醋酸溶液作流动相,流速1.0ml/min,二极管阵列检测器于478nm波长下进行检测,并以保留时间和三维光谱图相似性系数进行定性。方法线性范围为0.1￣50μg/ml(r=0.99986),经浓缩后样品最低检测限可达0.01mg/kg。不同样品的加标回收率为87.7%￣97.7%,相对标准偏差(RSD)为2.3%￣6.4%(n=6)。将标准物质与样品进行同样程序的处理,可使回收率进一步提高至96%以上。此方法在测定实际样品中得到了验证。

原生质体来源的大白菜悬浮细胞系的超低温保存

原生质体来源的大白菜 Brasstca campessris var.pekinsis 悬浮细胞系在二甲亚砜的保护下,能在液氮中(-196℃)长期冻存。加入山梨醇能增强保护作用;而加入甘露糖则降低保护作用。培养基对冻存也有明显的影响。在液氮中存放的时间长短对细胞存活率没有多大影响。冻后相对活性最高可达75.4％,恢复生长快,化冻后重新悬浮培养6天,生长量可达300-500％。遮光比不遮光对恢复更有利。冻存后恢复生长的悬浮细胞,能与未经冰冻的对照一样进行原生质体分离和培养。

高效液相色谱法测定食品中的富马酸二甲酯

乙酸乙酯作提取剂 ,检测波长 2 30 nm,流动相采用甲醇 -水 (4∶ 6 )的乙酸钠 -冰乙酸 -四丁基溴化铵溶液 ,高效液相色谱测定月饼、面包样品中富马酸二甲酯。优化不同性质样品的提取条件及测定的流动相。不同样品的富马酸二甲酯的回收率在 93%— 95 %之间 ,在 0— 2 5 0 .0 μg/ m L校准曲线的回归方程为 y=0 .0 0 4 5 2 x+0 .0 0 5 2 3,相关系数 r=0 .9995 ,相对标准偏差小于 1.6 %。本法简单、快速、准确 ,可用于各种食品中的富马酸二甲酯的日常检测。

直接蒸馏滴定AHMT法联合测定食品中的甲醛次硫酸氢钠

利用直接蒸馏滴定 AHMT法联合测定食品中的甲醛次硫酸氢钠。综合考虑了甲醛含量及SO2 /HCHO含量的比值 ,以判定食品中的甲醛次硫酸氢钠 ,各种样品以甲醛定量的加标回收率为 98 0 %～ 1 0 7 2 % ,相对标准偏差 (RSD)为 2 7%～ 4 1 %。此方法适用于各种食品中的甲醛次硫酸氢钠含量的测定。

微波辅助衍生GC-MS测定脂肪酸及校正变换矩阵法用于食用植物油鉴别的研究

建立了微波衍生化GC -MS测定食用植物油中的脂肪酸含量 ,并采用校正变换矩阵法对食用植物油的成分进行测定的方法。对微波衍生化的实验条件进行了优化 ,利用建立的校正模型对40个花生油、菜籽油、芝麻油、棉籽油、棕榈油的二元、三元、四元、五元人工合成样品进行了计算预测 ,所有样品的平均预测误差都小于5 %。对8个实际样品进行了测定 ,其中有3个掺伪样品 ,所测调和食用油的结果与标签标示结果相符性较好。本方法可用于快速、准确地测定食用油中各成分含量或定性。

食品中吊白块新的测定方法

采用直接蒸馏滴定———AHMT分光光度法联合测定食品中的吊白块含量。综合研讨了甲醛含量及SO2/HCHO的比值作为判定食品中的吊白块是否存在的依据。该方法各种样品的加标回收率及精密度都较好,准确适用于各种食品中的吊白块含量的测定。

微波辅助衍生GC-MS测定脂肪酸——校正变换矩阵法鉴别食用植物油的研究

建立了微波辅助衍生化GC MS测定植物油中的脂肪酸含量 ,使用校正变换矩阵法对食用植物油的成份进行测定的方法。对微波衍生化的实验条件进行了优化 ,利用建立的校正模型对 4 0种花生油、菜籽油、芝麻油、棉籽油、棕榈油的二元、三元、四元、五元人工合成样品进行了计算预测 ,所有样品的平均预测误差都小于 5 %。对 8种实际样品进行了测定 ,其中有 3种掺伪样品 ,所测调和食用油的结果与标签标示结果相符性较好。本方法可用于快速、准确测定食用油中各成份含量或定性。

微波辅助衍生GC-MS测定校正变换矩阵法应用于食用植物油的识别

建立了微波衍生化GC -MS测定植物油中的脂肪酸含量 ,然后使用校正变换矩阵法对食用植物油的成分进行测定的方法。对微波衍生化的实验条件进行了优化 ,利用建立的校正模型对4 0个花生油、菜籽油、芝麻油、棉籽油、棕榈油的二元、三元、四元、五元人工合成样品进行了计算预测 ,所有样品的平均预测误差都小于 5 %。对 8个实际样品进行了测定 ,其中有 3个掺伪样品 ,所测食用调和油的结果与标签标示结果相符性较好。此方法可用于快速、准确地测定食用油中各成分含量或定性、定量鉴别掺伪成分。

直接蒸馏滴定—AHMT法联合测定食品中的吊白块

利用直接蒸馏滴定———AHMT法联合测定食品中的吊白块 ,通过综合考虑甲醛含量及SO2 /HCHO含量的比值来判定食品中的吊白块存在 ,该方法科学、准确 ,样品的加标样回收率及精密度都较好。

根瘤农杆菌T-DNA结合蛋白VirD2和VirE2在水稻中的亚细胞定位研究

根瘤农杆菌侵染植物过程中,至少有5种毒性蛋白(Vir)进入宿主细胞发挥作用,而其中VirD2与VirE2的作用最为关键,研究二者在水稻中的亚细胞定位,对农杆菌介导的水稻遗传转化机制的阐明具有重要意义。利用水稻叶鞘原生质体瞬时表达系统,发现3种冠瘿碱型的VirD2均只定位于细胞核中,与在拟南芥中相同;而3种冠瘿碱型的VirE2均主要定位于细胞核中,但在细胞质中仍有较多分布,与在拟南芥中的定位不同。因此,推测不同冠瘿碱型的农杆菌对水稻侵染能力的差异与VirD2和VirE2亚细胞定位的关系不大;同时表明根瘤农杆菌介导的拟南芥及水稻遗传转化机制存在相似性,但也有不同之处。

黄瓜胚性细胞悬浮培养及其原生质体的植株再生

黄瓜子叶原生质体来源的胚性愈伤组织,在液体培养中形成胚性悬浮细胞系,已继代两年,仍保持胚胎发生能力。不同的 ABA 和蔗糖浓度对胚状体的生长发育和同步化有明显影响。1mg/l 的 ABA 和7—9%的蔗糖能显著地减少培养物的愈伤化,并同步地控制胚状体处于球形或球形后期。低浓度的蔗糖(1%)有利于胚状体的早熟萌发。继代3—5天的胚性悬浮细胞团酶解后,获得大量有活力的原生质体。原生质体在 DPDK 液滴或浅层培养、或褐藻酸钠包埋培养中活跃分裂,形成细胞团和球形胚,转至固体培养基上或将包埋培养物直接转入液体振荡培养,胚状体可不断增殖。胚状体在大量元素减半,不加外源激素的 MS 培养基上发育成小植株。

阿维链霉菌BAC文库的构建及分析

为进一步阐明阿维菌素的生物合成路径和调控途径,提高阿维菌素的产量,采用BamHⅠ限制性内切酶酶解阿维链霉菌基因组DNA的方法,构建了阿维链霉菌的细菌人工染色体(BAC)文库。该文库共包含2 304个克隆,平均插入片段为101kb,空载率约9%,覆盖了该菌基因组的25.9倍。该文库的成功构建可以为其他微生物尤其是基因组具有磷硫酰化修饰的微生物的文库构建提供参考。

利用酵母双杂交筛选豌豆叶绿体镁离子螯合酶D亚基相互作用蛋白

植物叶绿体镁离子螯合酶是四吡咯化合物生物合成途径中合成叶绿素分支(镁分支)的第一个酶,它催化镁离子螯合到原卟啉IX中,形成镁原卟啉IX.镁离子螯合酶是1个由3个亚基H、D和I组成的多亚基酶,3个亚基均由细胞核编码,进入叶绿体发挥功能.该酶不仅控制着叶绿素的合成,其各个亚基还具有很多其它的功能:H亚基既是ABA受体,又参与叶绿体到细胞核的反向信号传导;D亚基也与叶绿体到细胞核的反向信号传导有关.本文利用酵母双杂交技术,将编码豌豆镁离子螯合酶D亚基的cDNA片段构建到诱饵载体pGBKT7中,分别用共转化的方法筛选豌豆叶片细胞核编码的均一化cDNA文库和用Mating的方法筛选豌豆叶片叶绿体编码的均一化cDNA文库,共得到121个候选克隆,其中有60个克隆共编码21个叶绿体蛋白质,19个来自于核基因编码,2个来自于叶绿体基因编码.这些候选蛋白参与叶绿素合成、卡尔文循环、叶绿体蛋白质翻译和叶绿体基因转录等多个代谢过程.酵母点对点和GST-pull down对其中的4个蛋白做了进一步的验证.这些结果将为D亚基的功能研究提供进一步的线索.

OsVIP1 RNAi转基因水稻植株的构建

为进一步阐明农杆菌介导的遗传转化分子机制,进而利用分子生物学方法提高农杆菌转化水稻效率,以水稻品种中花11为遗传转化受体材料,利用RNAi技术对水稻中拟南芥AtVIP1蛋白的同源蛋白进行了功能研究。通过同源性比对得到水稻中拟南芥AtVIP1蛋白的同源蛋白序列,命名为OsVIP1,构建了该蛋白基因2个片段(R1和R2)的RNAi表达载体pDS1301-2-R1和pDS1301-2-R2,通过农杆菌介导的方法分别转化水稻中花11。对转基因抗性愈伤进行统计,结果表明,由携带pDS1301-2-R1和pDS1301-2-R2载体转化的抗性愈伤的形成受到一定程度抑制。经PCR检测,证明2个片段R1和R2均成功整合到再生水稻植株基因组中;半定量RT-PCR分析显示部分RNAi转基因植株中OsVIP1基因表达被成功抑制。

水稻镁离子螯合酶调控蛋白Gun4羧基末端的功能分析

植物叶绿素生物合成途径(镁分支)中的第一个酶是镁离子螯合酶,它由I(ChlI)、D(ChlD)和H(ChlH)三个亚基组成.各亚基不仅参与叶绿素的生物合成,而且还与叶绿体到细胞核的反向信号传导有关.Gun4是一个卟啉结合蛋白,它能提高植物镁离子螯合酶的活性,在缺乏Gun4的条件下,镁离子螯合酶整个复合物非常不稳定,不足以开始催化反应.我们以前的研究发现,Gun4的C末端几个氨基酸具有重要作用.在本文中,通过缺失突变,获得了C端缺失了8个氨基酸残基突变的Gun4(Gun4L).酵母双杂交与GST-pull down实验发现,Gun4L仍能与H亚基相互作用,原核表达和纯化Gun4L和镁离子螯合酶各亚基后,重组镁离子螯合酶的酶活分析证实,Gun4L对镁离子螯合酶的活性失去了激活作用.

1个水稻产量QTL区段及品系特异性重复序列的比较分析

为克隆1个水稻产量QTL,对遗传作图亲本珍汕97和明恢63物理图谱上与该QTL相对应的区段进行了比较分析,关闭了2个物理图谱在该区段的物理缺口,对该区段珍汕97和明恢63 BAC末端序列分别与日本晴参考序列之间的预测单核苷酸多态性SNP位点进行了检验,发现大部分预测SNP序列正确,而有一部分预测SNP为BAC末端测序错误。验证了的SNP将是基因和QTL克隆的重要分子标记。同时对代表性的推测水稻中花11基因组特有重复序列进行了验证。

芥菜型油菜品种四川黄籽的BAC文库构建与分析

为促进黄籽油菜的基因组研究和利用,构建了芥菜型油菜黄籽品种四川黄籽的高质量BAC文库。该文库由82944个单克隆组成,被保存在216块384孔板中。质粒酶切检测结果表明,文库的平均插入片段大小约为140kb,空载率约为2.5%,按照芥菜型油菜基因组1000Mb计算,文库覆盖度约为油菜基因组的11.6倍。BAC末端序列比对分析结果显示,克隆被均匀比对到芥菜型油菜的18条染色体上,并且无任何叶绿体、线粒体和细菌基因组DNA污染。