PCR-SSP技术对广东汉族人HLA-DR基因分型

探索具有高分辨率、高特异性和简捷快速的方法对ＨＬＡ－ＤＲ基因分型，为临床器官移植配型和疾病相关性分析提供实用的方法和基础资料．利用ＤＲ１～ＤＲｗ１８序列特异性的１９组引物及１对内参照引物进行ＰＣＲ扩增即ＰＣＲ－ＳＳＰ对ＨＬＡ－ＤＲ进行基因分型，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭染色，在紫外光下观察分型结果．每个被检个体的ＤＲ型别可由特异引物扩增出现的电泳谱带直接判断．双盲检测２２例的结果１００％正确．在１０２例中国广东地区汉族人中，ＤＲ９和ＤＲ２的基因频率最高，分别为０．２２０５和０．１９１２，ＤＲ１０为最低（０．００９８）．与用ＰＣＲ－ＳＳＯ方法分型获得的结果比较，基因型别分布基本一致，但一些等位基因的频率有差异，表明ＨＬＡ－ＤＲ基因频率的分布在不同地区、不同种族的人群间存在着差异．ＰＣＲ－ＳＳＰ法分辨率和特异性虽不及ＰＣＲ－ＳＳＯ法但比血清学方法精细，分型的全过程只需２～４ｈ能满足临床器官移植配型的要求．基因频率调查结果为器官移植配型和疾病相关性分析提供了基础资料．

广东汉族人载脂蛋白B(apoB)基因3′端VNTR的遗传多态性研究

随机抽提100例无血缘关系的广东汉族人的血痕DNA,用PCR法扩增载脂蛋白B(apolipoprotein B apoB)基因3′端的VNTR,共检出19个等位基因,片段大小分布在510～1200bp之间,等位基因频率为0.005—0.195,杂合度为88.80％,父权排除率为0.6395,其等位基因数目及频率分布均与英国白种人的有差异。家系分析表明扩增片段按孟德尔方式遗传。本实验证实了apoB基因3′端VNTR的高度多态性和高度杂合性。

CEA重组痘苗病毒对CEA阳性肿瘤的防治研究

肿瘤的免疫治疗是治疗肿瘤的新方法 ,它通过增强肿瘤抗原或肿瘤相关抗原的免疫原性 ,诱导机体产生肿瘤特异性的免疫应答反应而杀伤肿瘤细胞。本系列研究采用同源重组方法构建了表达人癌胚抗原 (carcinoembryonicantigen ,CEA)的重组痘苗病毒 ,经动物实验证明了其具有强免疫原性、安全性和防治CEA阳性肿瘤的可靠性。

人DNA指纹的研究及其应用

1988年,作者根据DNA指纹是人基因组中重复序列的RFLP的原理和人与鼠的髓鞘碱性蛋白(MBP)基因同源序列高于90％的事实,选用鼠MBP CDNA3’-端的与人基因组中该类重复序列几乎完全同源的0.81kb片段作探针,检测用Hae Ⅲ酶解的人DNA限制性片段(RF),在人群中可检出22条谱带,受检的无血缘关系的个体之间没有两个人的谱带是完全相同的,显示这一方法的高度个体特异性。

pAW101-EcoRⅠ限制性片段在广东人群中的分布及其在法医学上的应用

用pAW1015kb的片段为探什,检测广东地区106例无血缘关系居民的EcoRI酶切限制性片段(RF)的分布情况。共发现长度各异的65条RF,每人只具有其中的1～2条。统计学分析证明,这些RF的分布符合哈一温氏平衡。无血缘关系的两个个体间具有完全相同的RF图谱的机会为0.00048(相当于l/2080)。家系调查结果表明,这些RF符合孟德尔遗传规律。本文是应用作者推导出来的计算RF大小的数学模式。此法在作亲权鉴定时,父权排除率可达0.914,相当于目前国内所用的血型测定法(包括HLA-A,-B抗原测定)所达到的总和,说明此方法在法医学个人识别和亲权鉴定中具有广阔的应用前景。

一种随机探针人DNA指纹分析法的建立

根据随机探针(Anonymous Probe)检测DNA限制性片段长度多态性(RFLPs)分析原理和人与鼠的髓鞘碱性蛋白(MBP)基因cDNA有90％以上同源序列的事实,选用rMBP-cDNA 3′-端非表达区高度重复序列的0.81千碱基对(kb)片段作探针,检测用HaeⅢ重酶解的人DNA限制性片段,结果可以分辨出22条谱带,受检的30例无血缘关系的个体之间,没有两个人的谱带是完全相同的,显示出此方法的高度特异性。本文还比较了若干DNA片段作探针和几种限制性内切酶水解人DNA后检测DNA指纹的初步结果。

广东汉族健康人载脂蛋白AⅠ-CⅢl-AⅣ基因簇DNA多态性及其单倍型分布

本文研究了中国广东汉族健康人群apoAI-CⅢ-AIV基因簇DNA限制性内切酶PstI、SstI和EcoRI片段长度多态性。其中等位基因P_1,P_2,S_1,S_2,R_1和R_2的频率分别为0.98,0.02,0.96,0.04,0.90和0.10。经卡方检验符合Hardy-Weinbery氏遗传平衡,与其他种族比较,本文结果显示中国广东汉族人P_2等位基因频率低于日本人、亚洲印第安人和高加索人,S_2等位基因频率低于日本人、菲律宾人、沙特阿拉伯人和亚洲印第安人,而与高加索人相近,R_2等位基因频率稍高于高加索人。不同种族间apoAI-CⅢ-AIV基因簇DNA多态频率无疑存在差异,这种差异可能是由于遗传漂变和自然选择单独或联合作用所致。对P_1、P_2,S_1、S_2和R_1、R_2构成的单倍型和连锁平衡程度进行了分析,结果显示这些单倍型处于连锁不平衡状态。

用地高辛配基标记的pAW101探针杂交分析DNA多态性及其应用

将NaCl盐析法抽提人基因组DNA与地高辛配基标记DNA探针的方法相结合，检测了15个家系子代与亲代DNApAW101－EcoRI限制性片段的遗传关系。结合所测同工酶（EsD．GLOI．pGM；．Acp）的基因频率、按Essen－moller氏公式计算，父权概率均达到99．73％以上。本法经济、有效、实用、易于在国内普遍实验室开展。

基因工程及其在医学上的应用 第二讲 基因工程技术的工具酶、载体及其连接

基因工程及其在医学上的应用第二讲基因工程技术的工具酶、载体及其连接中山医科大学生化教研室罗超权问：基因工程技术常用哪些工具酶？答：古云：工若善其事，必先利其器。基因工程技术在７０年代能得到迅速发展，亦与相应技术的发展及工具酶的发现和使用密切相关。常用...

TRAP-银染方法检测体外培养细胞的端粒酶活性

ＴＲＡＰ－银染方法检测体外培养细胞的端粒酶活性孙来保文剑明张萌谢丹赵国强罗超权关键词端粒酶ＴＲＡＰ－银染方法端粒中图号Ｒ７３０４３端粒（Ｔｅｌｏｍｅｒｅ）由ＤＮＡ和蛋白质构成，位于真核生物染色体的末端。这一结构的ＤＮＡ部分主要由富含鸟嘌呤（Ｇ）的简...

基因工程及其在医学上的应用第三讲脱氧核糖核酸序列分析

基因工程及其在医学上的应用第三讲脱氧核糖核酸序列分析中山医科大学生物化学教研室罗超权问：什么是脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）序列分析？答：ＤＮＡ序列分析是ＤＡＮ的一级结构分析。蛋白质肽链的一级结构分析是测定肽链中氨基酸的组成，种类及其排列顺序。与此类似，ＤＮ...

基因工程技术及其常用工具酶

一、基本概念 1.基因重排(gene rearrangement)是指大段的DNA经某种运动形成一种新的排列形式。它包括基因重组(genetic rceombination),转位(transposition)和克隆(cloning)。①基因重组:是通过不同的亲代DNA链裂解并重新组合连接而完成的,生物体有基因重组的发生,也可在实验室进行基因重组,这是基因工程技术的重要环节。②转位:是一种较大规模的基因重排,它通过可移动的基因成分来进行,可移动基因成分称为可转位成分或转座子(transposon)。③克隆:克隆的原意是指单细胞无性繁殖即纯系无性繁殖。

人癌胚抗原-重组痘苗病毒的构建和制备

痘苗病毒的基因组庞大，结构复杂而特殊，不可能将外源基因直接插入它的基因组，必须利用一种特殊的痘苗病毒质粒，才能构建成功重组痘苗病毒．在分析了痘苗病毒质粒ｐＪ１２０〔含有我国天花疫苗－痘苗病毒天坛株７６１的启动子和胸苷激酶（ｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ，简称ＴＫ基因），及含有人癌胚抗原（ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｎｉｃａｎｔｉｇｅｎ，简称ＣＥＡ）ｃＤＮＡ全序列的质粒ｐ９１０２３Ｂ－ｃｅａ－１７结构的基础上，设计出三步法构建了重组疫苗病毒质粒ｐＪ－ＣＥＡ．经酶切及ＰＣＲ鉴定ｐＪ－ＣＥＡ中ＣＥＡｃＤ－ＮＡ的存在，进一步用同源重组方法构建了表达人ＣＥＡ的重组痘苗病毒，并以人体成纤维细胞作为宿主细胞，对ＣＥＡ－重组痘苗病毒进行了大量培养．再次证实痘苗病毒是良好的真核表达载体，可以高效而准确地表达细胞膜糖蛋白ＣＥＡ．

CEA-重组痘苗病毒预防CEA阳性肿瘤的动物实验研究

目的：探讨 Ｃ Ｅ Ａ重组痘苗病毒对 Ｃ Ｅ Ａ 阳性肿瘤的预防作用。方法：构建 Ｃ Ｅ Ａ 阳性小鼠 Ｈｅｐａ 肝癌细胞模型（ Ｈｅｐａ Ｃ Ｅ Ａ＋ ） 。将实验鼠分为４ 组，先分别皮下接种痘苗病毒（ 野生型 Ｗ Ｖ Ｖ 或重组型 Ｃ Ｅ Ａｒ Ｖ）３ 次，再分别颈背部皮下注射 Ｃ Ｅ Ａ 阳性或 Ｃ Ｅ Ａ 阴性同源鼠 Ｈｅｐａ 肝癌细胞。观察动物反应并在接种癌细胞后每周测量一次肿瘤大小。结果：３ 个对照组各鼠颈背部皮下均可见有瘤块形成，并且以相近速率快速增长，３ 组之间无统计学上的显著差异，而接种 Ｃ Ｅ Ａｒ Ｖ／ Ｈｅｐａ Ｃ Ｅ Ａ＋ 组各鼠在观察期限内均无肿瘤形成。整个实验过程中实验鼠未表现有毒副反应。结论： Ｃ Ｅ Ａｒ Ｖ 通过诱导机体的免疫系统产生 Ｃ Ｅ Ａ 特异性的细胞和体液免疫应答反应，能有效预防小鼠移植性 Ｃ Ｅ Ａ 阳性肿瘤的形成。

存活素siRNA表达质粒的构建及其对MCF-7细胞细胞周期和增殖的调控(英文)

背景与目的存活素特异地在肿瘤组织中过表达,许多报道表明抑制它的功能对肿瘤治疗有利。RNA干扰被证明是一项能有效而特异地抑制基因表达的新技术。本研究的目的在于构建存活素基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达质粒,并检测该质粒在乳腺癌细胞中的生物学功能。方法应用含有U6启动子的mU6pro载体构建存活素siRNA质粒,RT-PCR和Westernblot法检测该质粒转染MCF-7细胞后存活素表达的变化,流式细胞仪和MTT法分别检测其对细胞周期和对细胞增殖的影响。结果存活素siRNA质粒明显下调MCF-7细胞中存活素的表达,阻断细胞周期在G1期,显著抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。结论通过RNA干扰,存活素的表达在mRNA和蛋白质水平上被下调。

离心机训练对大鼠脑和心脏组织基因表达的影响

分析离心机训练对大鼠脑和心脏组织基因表达的影响 ,并从中筛选正加速度 (forwardaccel eration ,+Gz)高耐力相关基因 .雄性SD大鼠在动物离心机上训练 ,刺激G值从 + 7Gz～ + 12Gz ,每天增加 + 0 5Gz ,第 12d重复 + 12Gz刺激 ,第 13d在离心机上通过测定动物的 +Gz耐力筛选出高耐力动物 ,立即断头处死 ,取全脑和心脏组织 ,分离其mRNA .将此mRNA与未处理动物相应组织来源的mRNA进行抑制性消减杂交 (SSH) ,获得的相关EST(expressionsequencetag ,EST)进行序列测定 ,并经BLAST进行计算机分析 .结果获得 88条与离心机训练相关的EST ,其中 4 4条为已知基因的部分序列 ,4 4条为未知基因的部分序列 .提示离心机训练对大鼠脑和心脏组织基因表达有影响 ;这些相关基因可能与

施万细胞对培养的神经干细胞存活及其分化的影响

目的 探讨施万细胞能否在体外促进神经干细胞的存活和分化。 方法 分离和克隆新生大鼠海马组织的神经干细胞 ;同时获取坐骨神经和臂丛神经 ,从中分离和纯化施万细胞。将施万细胞和神经干细胞进行共培养 ,借助免疫细胞化学技术检测培养的神经干细胞巢蛋白 (nestin)的表达及其分化后神经丝蛋白 (NF)和胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。应用扫描电镜观察神经干细胞的形态变化。 结果 与施万细胞一起培养的神经干细胞存活数量增加 ,分化为神经元样细胞的数量也明显增加。这些神经元样细胞的初级突起比对照组的明显增长。施万细胞能使神经干细胞胞体表面不规则的凹凸变得平整。共培养的施万细胞和神经干细胞可以 3种方式接触生长 :1 胞体与胞体接触 ;2 胞体与突起接触 ;3 突起与突起接触。

应用抑制性消减杂交分析全反式维甲酸和1,25-二羟维生素D_3诱导结肠癌细胞的相关基因

为探讨结肠癌细胞诱导分化的机制 ,采用抑制性消减杂交 (suppression subtractivehybridization,SSH)研究联合使用全反式维甲酸和 1 ,2 5-二羟维生素 D3诱导分化结肠癌 Lo Vo细胞前、后差异表达的基因 .经比较消减 c DNA文库的序列与基因库的序列 ,发现 :有 1个基因的序列与正常鳞状上皮细胞中的 1个表达序列标签 (expressed sequence tag,EST)高度同源 ,同时发现6个新 EST (基因库登录号为 AW2 66492、AW2 66493、AW2 66494、AW58751 8、AW58751 9和AW58752 0 ) .说明诱导分化涉及到多个基因的表达 ,结肠癌的发生是多基因综合作用的结果 .进一步研究这些基因和 EST的功能对于结肠癌的防治将有重要意义 .

飞行(学)员ACE基因的多态性

血管紧张素转化酶 (ACE)第 16内含子的插入 缺失多态性与运动员耐力水平有关 .为了解这一多态性与飞行员飞行耐力的关系 ,对不同阶段飞行人员ACE第 16内含子基因型进行了分析和比较 .结果显示 ,ACEDD基因型百分率在招飞体检应征人员为 12 5 %、基础飞行学院学员 (未飞 )为 11 5 %、飞行学院初教机飞行学员为 10 0 %、歼击机飞行员为 3 0 % .歼击机飞行员组D等位基因频率及DD基因型明显低于其他 3组 (P <0 0 1) ,而后 3组之间无明显差异 (P >0 0 5 ) .进而观察到 ,飞行员体能测试成绩优者 ,无DD基因型 .提示 ,飞行员体能表现与ACE第 16内含子的插入 缺失多态性有关 ,具有I等位基因者 ,体能较好 ,飞行耐力也较好 .