基于数字微流控技术的上呼吸道易感病毒多靶标快速检测方法的建立

目的建立一种基于数字微流控RT-qPCR芯片技术的上呼吸道易感病毒多靶标快速检测方法。方法根据新型冠状病毒(2019-nCOV)、甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病毒(FluB)、冠状病毒(SARS-CoV)、中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)的保守区域,设计特异性引物和检测探针,通过将引物和探针预存到数字微流控芯片中,建立检测上述5种上呼吸道病毒的数字微流控RT-qPCR芯片检测技术;评价预存了引物的数字微流控RT-qPCR芯片的检测下限和特异性;使用20例临床样本以PCR仪检测结果作为对照组评价数字微流控RT-qPCR芯片的检测性能。结果建立的2019-nCOV、FluA、FluB、SARS-CoV、MERS-CoV的数字微流控RT-qPCR芯片检测下限为12拷贝/反应,而未使用数字微流控的RT-qPCR法检测下限为15拷贝/反应,两个方法的检测下限基本一致。对于临床样本提取的核酸样品,数字微流控RT-qPCR芯片检测结果均是阴性无非特异性扩增。同时使用RT-qPCR法和数字微流控RT-qPCR芯片法对20例临床样本分别进行5个项目的临床对比测试,共100个测试,结果显示为数字微流控RT-qPCR芯片灵敏度达94%,特异性为100%。使用SPSS对两个方法进行一致性分析,结果显示为两个方法具有高度的一致性(Kappa=0.962,P<0.05)。结论基于数字微流控RT-qPCR芯片技术建立了上呼吸道易感病毒多靶标快速检测方法,为临床早期鉴别呼吸道病原体提供了新的检测手段。