BDNF-TAT融合蛋白在大肠杆菌中的表达纯化及脑中分布

目的在大肠杆菌中表达并纯化BDNF．TAT融合蛋白，研究其靶向性及在脑中的分布。方法重组质粒PET-30（a）-BDNF—TAT转染至大肠杆菌BL21（DE3）pLysS中，IPTG诱导其表达后用SP-Sepharose阳离子交换柱纯化，纯化后蛋白用0．4m01／L精氨酸倍比稀释法复性。KM种小鼠采用随机数字表法分为给药组[尾静脉注射复性后BDNF．TAT融合蛋白4μg（适量生理盐水溶解）1、阴性对照组（尾静脉注射等体积生理盐水）和空白对照组（不进行任何处理），每组各3只。3h后提取小鼠脑组织全蛋白．Western blotting检测脑组织中BDNF-TAT表达，SABC免疫组化染色观察BDNF—TAT在脑组织中的分布。结果获得纯度约90％活性的BDNF—TAT融合蛋白。给药组BDNF-TAT蛋白的相对表达量为1．897±0．286，阴性对照组BDNF—TAT蛋白的相对表达量为0．615±0．234。空白对照组BDNF—TAT蛋白的相对表达量为0．335±0．154，比较差异有统计学意义（F=39．019，P=0．000）。免疫组化染色结果显示给药组BDNF-TAT主要分布于小鼠脑组织海马CA1、CA3和DG区．而阴性对照组和空白对照组中没有明显阳性染色。结论BDNF-TAT融合蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式大量表达，并能通过外周给药靶向至小鼠脑组织。