高渗对多重耐药大肠杆菌外排泵和外膜孔道蛋白基因表达及其生长的影响

为了探究高渗对多重耐药菌外排泵和外膜孔道蛋白基因表达及其生长的影响,试验应用生长曲线和相对适应性测定,对比考察不同盐胁迫条件对多重耐药大肠杆菌QL15和敏感大肠杆菌ATCC 25922的生长差异,采用RT-PCR方法考察2种盐胁迫条件下外排泵与外膜孔道蛋白基因表达差异。结果表明,大肠杆菌QL15为高水平多重耐药菌,其中对大观霉素和恩诺沙星耐药最为严重,可达耐药标准MIC的32倍;独立培养时大肠杆菌QL15对NaCl胁迫的敏感性大于大肠杆菌ATCC 25922,并且在6.0%NaCl胁迫下,大肠杆菌QL15在10 h内生长缓慢,但是在24 h细菌峰值浓度更高;混合培养时大肠杆菌QL15在6.0%NaCl胁迫时具有更高的适应性,在体外培养中更具竞争优势。大肠杆菌QL15共携带5大类、15种耐药相关基因,其中含8种外排泵基因和3种外膜孔道蛋白基因;大肠杆菌ATCC 25922在6.0%NaCl浓度下的5种基因表达量较3.5%NaCl均出现约50%的显著下调(P<0.05),大肠杆菌QL15在6.0%NaCl浓度下除acrB、ompF基因下调外,其余3种外排泵与外膜孔道蛋白基因的表达量则显著上调(P<0.05)。推测大肠杆菌QL15对盐胁迫具有更高的适应性的原因可能与细胞膜相关蛋白的表达相关。

烟草可溶性蛋白提取工艺优化及抗氧化活性研究

使用碱溶法对烟草进行处理,酸沉法沉淀得到可溶性蛋白。以可溶性蛋白提取率为指标,对蛋白提取条件进行优化,并对烟草可溶性蛋白抗氧化活性进行测定。结果表明:通过料液比、提取液、pH、提取时间的单因素试验,确定了响应面试验的中心点参数,在此基础上进行响应面优化,蛋白提取的最佳工艺条件为:0.05 mol/L磷酸缓冲液添加1.1%PVP、料液比1∶10.5(g/mL)、pH值8.6,此时烟草可溶性蛋白提取率为84.95%。烟草可溶性蛋白均有ABTS^(+)·和DPPH·自由基清除能力,在蛋白浓度为1.0 mg/mL时可达最大清除率,分别为58.57%和45.97%。采用响应面法优化后的烟草可溶性蛋白提取率高,明确了烟草可溶性蛋白的抗氧化活性,为烟草蛋白的多用途开发利用提供了理论依据。

烟草FI蛋白纯化、鉴定及营养安全性研究

应用葡聚糖凝胶层析法对烟草FI蛋白进行纯化,通过SDS-PAGE、PAGE电泳进行组分鉴定及质谱分析,并对FI蛋白进行小鼠限量试验。结果表明:(1)通过热沉法得到FI粗蛋白,经过凝胶层析法分离收集到3个组分。在凝胶电泳图中,明确组分1有两个亚基,分别为55、13.6 kD,经过与标准品对比确定组分1为FI蛋白。(2)质谱分析结果中FI蛋白含有20种氨基酸及人体8种必需氨基酸,且已达到FAO/WHO的优质蛋白评分标准。(3)限量试验表明FI蛋白对小鼠的临床行为学、体重、脏器系数均影响不显著(P>0.05),说明FI蛋白对小鼠生长发育和健康没有抑制作用,属于基本无毒。本试验通过蛋白质谱对FI蛋白的氨基酸组成进行评估分析及小鼠限量试验,明确了FI蛋白的营养价值及食用安全性,为烟草FI蛋白的多用途开发利用提供理论依据。

蝉拟青霉产镇痛组分的培养条件优化

[目的]研究蝉拟青霉产镇痛组分的最佳液体发酵培养条件。[方法]采用Plackett-Burman试验设计对液体培养基中葡萄糖、蛋白胨、酵母浸膏、KH2PO4和MgSO4以及发酵过程中p H、温度和接种量8个因素进行变量分析,筛选出了重要的影响因子为培养基p H、发酵温度和接种量;通过最陡爬坡试验得到这些因子的最大响应值区域。[结果]应用响应面方法分析得到最佳培养条件为:葡萄糖20 g/L、蛋白胨3 g/L、酵母浸膏2 g/L、KH2PO41 g/L、MgSO40.5 g/L、p H 7.96、温度16.05℃及接种量9.27%。[结论]优化后得到的镇痛组分含量是原条件的7.633倍,为该菌株镇痛组分的工业化发酵生产奠定了较好的基础。

蝉拟青霉菌丝体降血糖组分确证

[目的]考察蝉拟青霉5704s菌丝体提取液的降血糖作用,探索发挥降血糖作用的主要功能组分。[方法]制备蝉拟青霉5704s菌丝体提取液,分离提取液中峰1、峰2蛋白,采用小鼠试验和体外试验测定菌丝体提取液以及不同活性组分的降血糖作用,SDS-PAGE电泳测定主要降血糖组分分子量。[结果]蝉拟青霉5704s菌丝体提取液具有较好的降血糖作用,血糖下降率为36.85%;体外试验中,提取液峰1蛋白的α-糖苷酶抑制率为71.23%,峰2蛋白的抑制率为63.17%;小鼠试验中,提取液峰1蛋白的血糖下降率为40.23%,峰2蛋白的血糖下降率为25.70%;体外试验和小鼠试验均表明提取液峰1蛋白的降血糖效果优于峰2蛋白,峰1蛋白的分子量为57781 Da。[结论]确定蝉拟青霉5704s菌丝体提取液中发挥主要降血糖功效的组分是峰1蛋白。