不同生命周期阶段的企业创新行为及风险分析

企业技术创新是企业生存与发展的原动力。应用企业生命周期理论，结合不同阶段的具体特征，对处在不同生命周期阶段的企业技术创新行为的动机、积极性及其风险进行了探讨，

管理类专业案例教学的统计分析

本文运用问卷调查与统计分析 ,对管理类专业的案例教学及其相关问题进行探讨 。

影响企业采用技术创新决策的因素分析

在技术创新扩散中，企业对技术创新的采用是一个关键环节，也是一个复杂的问题。国内外有不少学者，对此问题进行了研究并提出了相应的解说。这些解说从不同角度对企业采用技术创新行为进行了解释。如曼斯菲尔提出的“传染”解说、戴维和戴维斯提出的“刺激—反应”说等。...

企业破产的症兆及识别方法

企业破产是市场经济下一种客观存在的经济现象。企业在面临破产之前都有一些相应的症兆 ,文中分析了多种企业破产的症兆 ,并提出了相应的识别方法。

贵州省某猪场猪瘟病毒感染的诊断

为弄清贵州某猪场猪发病死亡的原因,采用流行病学调查、临床症状观察、病理解剖诊断、猪瘟抗体快速金标检测卡检测和RT-PCR检测核酸确诊等方法,对该猪场发病猪进行了诊断。实验结果表明:流行病学调查、剖检病理和猪瘟抗体快速金标检测卡检测初步诊断该猪场发病猪疑似猪瘟病毒感染,RT-PCR检测核酸确诊为猪瘟病毒野毒感染。

伪狂犬病病毒Guizhou-DY株的分离鉴定及致病性研究

通过采集疑似猪伪狂犬病流产胎儿病料，采用细胞接毒分离培养、病毒蚀斑纯化、病毒的形态结构观察、易感动物接种试验和病毒核酸鉴定分离到1株伪狂犬病病毒（PRV），命名为PRVGuizhou—DY株（GenBank登录号为JX417716）；为了摸清其理化特性，进一步对Guizhou—DY分离株进行了耐热、耐酸及脂溶性敏感性试验、核酸类型鉴定及病毒毒价测定，同时进行病毒致病性试验。分离鉴定结果表明：病料接种Vero细胞盲传至第2代时产生明显CPE，盲传至第4代可出现稳定的CPE；病毒粒子在电镜下呈椭圆形、有囊膜、直径为120～180nm，核内可见呈晶格状排列的病毒包涵体；病毒悬液接种家兔能引起家兔奇痒、麻痹死亡；理化特性研究表明：该病毒是一种耐热不耐酸且对氯仿敏感的DNA病毒，gE全基因序列与PRVGZ—Z1株、Fa株及Ea株的相似性分别为97．60A、98．9％和99．4％，其TCID50为10-9.71·100μL-1，PFu为109·mL-1. 攻毒组猪体温升高，临床症状较为明显，在攻毒后第5天开始出现中和抗体，第21天达到最高。该研究可为PRV病原学研究提供参考。

猪博卡病毒流行病学研究

猪博卡病毒属于细小病毒科细小病毒亚科博卡病毒属单链线性DNA病毒,该病毒于2009年在瑞典发现。作为一种新型病毒,人们对其的研究仍处于初步探索阶段。本文从博卡病毒的由来、猪博卡病毒的发现、分类、基因组结构及流行病学等方面进行阐述,并根据GenBank收录的25条猪博卡病毒的部分基因和全基因序列,利用DNAStar分析软件,通过Jotun-Hein算法,分别从猪博卡病毒的NS、NP、VP以及全基因序列进行相似性临近排组分析,并建立了PBoV系统发育树。结果发现可将猪博卡病毒分为2个大支和若干遗传簇,但这些不同的遗传簇所包含的毒株在核苷酸序列上仍然存在着一定的差异。

区域创新创业能力的综合评价

区域创新创业能力是一个区域利用各种资源 ,进行创新创业活动 ,推动区域经济发展所具备的综合实力和潜力。在建立区域创新创业能力评价指标体系的基础上 ,运用最优脱层法、神经网络法和熵值法等方法 ,对全国各省市的创新创业能力进行了比较分析与综合评价 。

乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达及其免疫原性的研究

收集某猪场1例发病种公猪的睾丸病料,处理后采用细胞培养与乳鼠脑内接毒相结合的方法盲传并结合RT-PCR方法分离鉴定,命名为乙型脑炎病毒(JEV)贵州分离株(GZ株),然后根据GenBank登录的日本乙型脑炎病毒SA14和SA14-14-2株全基因序列设计并合成1对扩增E基因的特异性引物,用RT-PCR方法扩增出JEV贵州分离株E基因,并将E基因克隆到pMD19-T载体上,构建重组质粒pMD19-T-E,经双酶切鉴定、测序及序列分析鉴定后,再将E基因亚克隆到pET-32a(+)原核表达载体上,成功构建乙脑病毒E基因原核表达质粒pET-32a-E,将构建好的原核表达质粒pET-32a-E转化至宿主菌BL21(DH3)中,诱导表达目的蛋白,表达产物经SDS-PAGE电泳和Western blot分析,得到了约59ku条带,与预期大小相符,进一步提取、纯化和浓缩目的蛋白,并将其加入弗氏佐剂后免疫小鼠,免疫后采血检测抗体。结果显示:乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达目的蛋白能诱导小鼠产生一定抗体水平,该研究为乙型脑炎亚单位疫苗的研究奠定了基础。

武汉地区物流业发展水平综合评价

本文从物流业对区域经济发展的作用的角度 ,运用“最优脱层法”和“神经网络法”等综合评价方法 ,对武汉地区物流业的发展水平进行了综合评价 ,分析了武汉地区物流业发展的优势以及存在的问题 ,提出了一些相关建议。

区域创新与创业能力的评价方法

本文系统分析了区域创新与创业的测度及能力评价的指标 ,建立了区域创新与创业能力的评价指标体系 ,并提出了区域创新与创业能力综合评价的三种方法 :最优脱层法、神经网络法和熵值法。

猪瘟病毒贵州流行株E2基因原核表达及其免疫原性的研究

本研究根据GenBank登录的猪瘟病毒Shimen和C株的E2基因序列设计1对特异引物,采集来自贵州的疑似猪瘟病死猪组织,提取总RNA,进行RT-PCR扩增,将扩增产物测序后进行核苷酸序列比较分析。并将RT-PCR产物克隆到pMD18-T载体上,构建重组质粒pMD18-T-E2,经双酶切鉴定、核苷酸序列分析后,将E2基因亚克隆到pET-32a(+)原核表达载体上,成功构建猪瘟病毒E2基因原核表达质粒pET-32a-E2,将构建好的原核表达质粒pET-32a-E2转化至宿主菌BL21中,诱导表达目的蛋白,表达产物经SDS-PAGE电泳、Western blot分析,得到了约58ku的条带,与预期大小相符,进一步提取、纯化目的蛋白,将目的蛋白加入弗氏佐剂免疫小鼠,免疫后采血检测抗体,结果显示目的蛋白能诱导小鼠产生一定抗体水平,该研究为猪瘟亚单位疫苗的研究奠定了基础。

伪狂犬病病毒gE基因DNA疫苗在动物体内诱导的免疫应答及IL-2对其作用影响的研究

为探讨伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白DNA疫苗在动物体内诱导免疫应答的能力以及猪白细胞介素-2对其免疫作用的影响,构建pcDNA3.1(+)-gE1和pcDNA3.1(+)-gE2-IL-2重组真核表达质粒,将其转染Vero细胞后,采用间接免疫荧光、RT-PCR和Western blotting技术检测gE基因和IL-2基因在Vero细胞中的表达;并将构建的重组质粒、空载体、灭活病毒对照及生理盐水对照分别免疫小鼠和仔猪,通过间接ELISA方法和流式细胞技术监测血清中特异性抗体及T淋巴细胞亚群含量进行免疫学评价。结果表明,pcDNA3.1(+)-gE1和pcDNA3.1(+)-gE2-IL-2重组质粒在Vero细胞中获得较高水平的表达,且表达蛋白具有较好的反应原性。重组质粒可明显提高动物机体的体液免疫应答和细胞免疫应答水平,IL-2对PRVgEDNA疫苗的免疫效果存在明显的增强作用。动物攻毒试验表明,在PRV强毒攻击下融合表达质粒和混合质粒免疫可以给小鼠提供80%以上的保护,可给免疫仔猪提供60%以上的保护,表明融合蛋白和混合蛋白对PRV的攻击具有一定的免疫保护作用。

猪细小病毒非结构蛋白NS1基因的克隆、序列分析及蛋白质结构预测

根据GenBank登录的猪细小病毒NADL-2株和China株序列,利用Oligo 6.0软件设计1对扩增NS1全基因的特异性引物,对从贵州省安顺地区检测到的PPV的NS1基因进行扩增、克隆、测序、序列分析和蛋白质结构预测分析。测序结果表明,扩增的目的基因长度为1986bp,共编码659个氨基酸,其中NS1基因的1287、1288和1298位碱基发生了缺失,导致429、430和433位氨基酸发生缺失。系统发生树结果表明,本试验测序的NS1基因与NADL-2弱毒株处在同一进化分支;氨基酸同源性与NADL-2弱毒株和Kresse毒株最高,均为98.6%。蛋白质结构预测分析结果表明,非结构蛋白NS1的分子质量为75269.76u,理论等电点pI为7.25,不稳定系数为41.57,推测其为不稳定蛋白质;脂肪指数为73.58,总体平均亲水性为-0.565,推测该蛋白质是一种亲水性蛋白质;该蛋白质含有丰富的α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲,柔性区域较多,呈连续分布;非结构蛋白NS1无跨膜区和信号肽;预测非结构蛋白NS1含有3个N-糖基化位点、3个cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点、5个蛋白激酶C磷酸化位点、22个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、1个酪氨酸激酶磷酸化位点、8个N-肉豆蔻酰化位点、1个酰胺化位点及1个ATP/GTP结合位点基序A(P-环);该蛋白质抗原表位较多,存在10个主要的抗原表位。

猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪副嗜血杆菌混合感染的诊断

为弄清贵州某场猪发病猪的死亡原因,采用流行病学调查、临床症状观察、病理解剖诊断和RT-PCR检测核酸确诊等方法,对该场猪发病猪死亡原因进行了诊断。结果表明:流行病学调查和剖检病理初步诊断该猪场发病猪疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒和细菌混合感染,RT-PCR检测核酸确诊发病猪为猪繁殖与呼吸综合征病毒感染,细菌培养、分离和生化特性鉴定确诊为猪副嗜血杆菌。造成该猪场猪发病死亡的原因为猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪副嗜血杆菌混合感染所致。

某猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒和副猪嗜血杆菌混合感染的诊治

笔者于2011年2月对发生在贵州省某猪场发生的猪繁殖与呼吸综合征病毒和副猪嗜血杆菌混合感染的疫情进行了诊治，结果报告如下。

猪圆环病毒Ⅱ型在育肥猪机体内的残留时间检测

为弄清猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)对其正常生长及繁殖性能的影响,采用ELISA及PCR检测方法,对1例感染PCV病毒的长白猪进行PCV2的抗体水平检测及其在猪机体的残留时间研究。结果表明:ELISA检测,2月龄、4月龄、6月龄和8月龄的血清抗体值分别为0.445、0.522、0.396和0.225,PCV2抗体水平呈先增高后降低的趋势;PCR检测诊断,不同时期的检测结果均为阳性,但病情逐渐恢复到正常状态,生产性能有所下降。该猪感染PCV2后患病猪病情即使逐渐好转,但PCV2仍在机体内长期存留,使猪群长期不断地向外界排毒,给周围的环境造成严重危害。

猪细小病毒GZ株NS1基因主要抗原区的克隆与序列分析

为了解猪细小病毒（PPV）的分子流行病学和遗传变异等，对送检的疑似猪细小病毒感染病料进行了病毒分离鉴定，将分离毒株同步接种于ST细胞，并对分离病毒分别进行了血凝试验、中和试验、病毒理化特性和病毒核酸类型检测等鉴定；同时设计1对扩增PPVNS1基因主要抗原区的特异性引物，扩增、克隆和分析了分离毒株的NS1基因主要抗原区序列。结果表明：从送检的疑似猪细小病毒感染病料中成功分离出1株PPV贵州毒株，并将其命名为Gz株；扩增的NS1基因主要抗原区序列长度为1131bp；遗传进化分析表明，PPVGZ株与国内分离的GX株、N株、SR-1株、PPV2010株、s-1株和YL株的核苷酸序列同源性达到98．3％以上，推导的氨基酸序列的同源性为97．9％～100％，表明NS1基因序列比较保守，PPV的NS1基因主要抗原区基因克隆测序可以作为诊断猪细小病毒感染的依据。