基于平行模板的重叠延伸PCR优化策略

基于平行模板的一步法重叠延伸PCR是传统基因定点突变的简化方案,其瑕疵是不完全延伸片段交叉互补会产生野生型干扰。为寻找原方案下形成交叉互补的关键因素,提高其定点突变效率,对诸多相关因素进行了分析。发现调整中介引物浓度稀释比可以增加目标突变体含量,但难以彻底消除野生型干扰;而基因长度则明显影响终产物构成。据此提出两步法重叠延伸PCR优化策略,先分别在两个小管中扩增突变位点上、下游片段,再直接混合继续PCR扩增目标基因突变体。以克隆细胞周期蛋白E的定点突变为例进行验证,得到90%阳性率。优化的两步法重叠延伸PCR方案既保持了相对简化的操作步骤,又明显提高了突变效率,是对传统重叠延伸PCR定点突变技术的重要改进。

海南体育赛事志愿者现状与发展对策研究

本文采用查阅文献资料法、问卷调查法、数理统计法等研究方法,对海南体育赛事志愿者的基本状况、管理、招募与体育赛事志者的潜在资源进行分析,旨在探求海南体育赛事志愿者队伍的特点与制约因素,为完善管理提供依据,推动海南体育赛事志愿服务事业健康发展。

海南社区体育志愿者的现状及发展对策研究

采用问卷调查法对海南社区体育志愿者的性别结构、年龄结构、职业结构、学历结构、家庭经济状况、志愿参与动机等问题进行调查,分析海南社区体育志愿者的特征,探索海南社区体育志愿者队伍发展的规律及发展趋势。