小肠黏膜下层细胞相容性的研究

评价猪小肠黏膜下层与人胚骨膜成骨细胞 (Human embryonic periosteal osteoblasts,HEPOB)、人胚皮肤成纤维细胞 (Hum an em bryonic skin fibroblasts,HESFB)及兔肾血管内皮细胞 (Rabbitrenal vascular endothelialcells,RRVEC)的细胞相容性。制备猪小肠黏膜下层 (Sm all intestinal submucosa,SIS) ,将 HEPOB、HESFB和RRVEC与小肠黏膜下层体外复合培养 ,采用相差显微镜观察细胞的黏附和生长 ,并用 MTT法测定细胞增殖 ,用流式细胞仪检测复合培养细胞在不同培养时间的细胞周期、细胞凋亡。结果表明三种细胞均可在 SIS上黏附生长 ,SIS可促进 RRVEC的增殖 ,SIS对三种细胞的细胞周期和细胞凋亡率无影响。 SIS有良好的细胞相容性 ,其孔径、结构有助于 HEPOB、HESFB和 RRVEC细胞的黏附和生长 ,是良好的组织工程生物衍生材料。

脱细胞羊膜的制备及其生物相容性研究

目的 制备脱细胞人羊膜 (HAAM) ,检测其细胞相容性和组织相容性 ,探讨其作为组织工程支架材料的可行性。 方法 新鲜人羊膜经漂洗后戊二醛交联 ,0 .5 % SDS震摇 2 4小时 ,胰蛋白酶消化 4小时 ,充分漂洗 ,冷冻干燥 ,分装 ,环氧乙烷消毒备用。倒置相差显微镜和扫描电镜观察表面结构 ,测量孔径 ,并作 HE、Mallory染色。体外培养人成纤维细胞并复合于 HAAM,倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞的黏附、生长 ,四甲基偶氮唑盐 (MTT)法测定 HAAM浸提液对培养的人成纤维细胞的细胞毒性。将 HAAM植入 SD大鼠背部皮下 ,观察其组织相容性。 结果 HAAM的一面为网状结构 ,孔径为 10～ 80 nm,另一面为致密纤维结构。HE、Mallory染色表明材料无细胞残留 ,均为胶原组成。成纤维细胞能在 HAAM上黏附、增殖。 MTT示材料细胞毒性为 0或 1级 ,动物埋置实验无异常反应。 结论 应用去垢剂 -酶消化法处理新鲜人羊膜 ,能有效去除组织中的细胞和可溶性成分 ,可进一步降低其免疫原性 ,保留基质及网状结构 ,有良好的细胞相容性和组织相容性 ,可作为组织缺损的修复材料及组织工程的膜支架材料。

生物衍生羊膜对大鼠跟腱粘连影响的实验研究

目的 研究生物衍生羊膜预防 SD大鼠跟腱粘连的效果 ,并为临床预防术后跟腱粘连提供实验数据。方法 以 2 8只 SD大鼠后肢跟腱为实验模型 ,切断并缝合跟腱 ,实验侧跟腱包裹生物衍生羊膜 ,对侧不包裹作为对照 ,术后 1、2、4、6、8和 12周分别取跟腱 ,大体及组织学观察跟腱的粘连、愈合情况。 结果 术后各时间点两侧跟腱吻合处炎性细胞浸润情况、跟腱愈合进程无明显差别 ,跟腱粘连的半定量评分表明实验侧和对照侧差异有统计学意义 ( P<0 .0 5 )。 结论 生物衍生羊膜能有效预防跟腱粘连 ,是一种较为理想的预防跟腱粘连的生物材料。

小肠黏膜下层的制备及其特性的研究进展

目的 追溯近年有关小肠黏膜下层 (SIS)的制备及其特性的研究与进展。 方法 广泛查阅自 1995年以来的相关文献 ,对 SIS的制备及特有的性质 ,其中包括免疫原性、抗微生物活性、生物力学性质及生物相容性等进行综合分析。 结果 SIS来源方便 ,易于制备 ,有良好的生物相容性 ,能促进血管生成 ,并具有部位特异的组织再生能力。 结论 SIS是一种可广泛用于血管、肌腱、膀胱和腹壁等组织工程的良好生物衍生材料。

老年2型糖尿病患者骨密度变化及影响因素

目的 :观察老年 2型糖尿病人骨密度变化及影响因素。方法 :对 94例 (其中男性 4 2例 ,女性 5 2例 )及 10 0例健康者检测其馒头餐前后 C肽和血糖水平 ,及用双能 X线骨密度仪测定 L 2 - 4、Wards区、股骨颈、大转子的骨密度。结果 :1糖尿病各组 L 2 - 4、Wards、股骨颈、大转子骨密度显著降低。 2男性和女性糖尿病患者骨质疏松患病率分别为 38%和 6 5 .3% ,糖尿病患者骨密度与病程、空腹及餐后 2 h血糖呈负相关 ,与平均体重指数呈正相关 ,女性患者骨密度与绝经时间负相关。结论 :2型糖尿病人易患骨质疏松 。

纤维蛋白胶的制备及其在组织工程中的应用

对纤维蛋白胶的制备方法及其在组织工程中的应用进行了综述 ,并提出了有待进一步研究的问题。

小肠黏膜下层在组织修复中的应用

小肠黏膜下层(SIS)已广泛应用于多种组织如膀胱、肌腱、韧带、硬脑膜和血管等的修复,具有部位特异的组织再生能力,在部分组织缺损的修复中,可获得结构和功能上的重建,但在某些组织如输尿管也存在粘连与功能不能重建的问题,尚需进一步的研究。SIS可望作为生物材料广泛应用于组织修复。

组织工程化骨修复猕猴长段骨缺损的实验研究

目的 探讨用生物衍生骨材料和骨髓基质干细胞 (MSCs)复合后构成的组织工程化骨对异体猕猴长段骨缺损的修复作用。 方法 于猕猴胫骨结节抽取 MSCs并使诱导分化为成骨样细胞 ,用 5 -溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U )标记 ,培养后与人源生物衍生骨材料体外复合构成组织工程化骨 ,植入 15只异体猕猴修复桡骨 2 .5 cm长段骨缺损作为实验组 ;用单纯生物衍生骨材料修复对侧同样骨缺损作为对照组 ;另取 2只猕猴双侧桡骨同样部位和大小骨缺损旷置作为空白组。术后 1、2、3、6和 12周时各处死 3只动物取材 ,空白组 12周取材 ,行大体观察、组织学和免疫组织化学检测。 结果 实验组和对照组术后 1、2和 3周移植物周围组织反应较明显 ,6周后明显减轻 ,12周时基本消失。实验组标记成骨样细胞于术后 6周仍存在 ,术后 12周基本消失 ;骨缺损部位骨样组织、软骨、编织骨和板层骨出现时间均较对照组早 ,且骨愈合时间提前 3～ 6周。实验组骨缺损以多点方式直接成骨 ,对照组则从两端以“爬行替代”方式成骨。空白组术后 12周骨缺损均无愈合。 结论 生物衍生骨材料和 MSCs复合构建的组织工程化骨异体植入修复猕猴长段骨缺损可超越骨段移植的“爬行替代”过程 ,使骨缺损能较快愈合。生物衍生骨材料和同种异体 MSCs复合组织工程?

WO-1生物衍生骨缓释材料抗感染的实验研究

目的 研制具有抗感染作用的WO- 1生物衍生骨缓释材料。 方法 应用 型胶原和同种骨制备胶原生物衍生骨复合材料,将WO- 1吸附于胶原生物衍生骨构建成WO- 1生物衍生骨缓释材料,扫描电镜观察其形貌特征;将3H-四环素( 4 5 .1GBq/ mmol)以WO- 1标准品溶液稀释,吸附于胶原生物衍生骨,测定缓释材料中WO- 1的体外释放;将WO- 1生物衍生骨缓释材料置入接种金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌的培养基中,检测其体外抑菌能力。将WO- 1生物衍生骨植入2 4只新西兰大白兔桡骨缺损处,术后9、16、2 3及30 d各处死2只兔测定血中WO- 1的浓度,以及材料周围肌肉与骨中的WO- 1的浓度。 结果 WO- 1生物衍生骨复合材料保留了天然骨的三维结构,表面有胶状膜覆盖;在体外释放实验中第1天呈暴发释放,以后呈恒定释放;对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等骨感染的常见致病菌有持久稳定的抑菌能力。体内实验中周围骨组织及肌肉组织中WO- 1在各时间点均保持较高的浓度,组间比较差异无统计学意义( P>0 .0 5 ) ,而动物血中WO- 1浓度较低,与骨及肌肉组织中WO- 1浓度相比,差异有统计学意义( P<0 .0 5 )。 结论 WO-

小肠黏膜下层复合上皮细胞及成肌细胞构建组织工程食管的初步研究

目的初步探索利用小肠黏膜下层（small intestinal submucosa，SIS）作为支架材料，复合食管鳞状上皮细胞与成肌细胞构建组织工程食管的可行性。方法4周龄无胸腺小鼠20只，体重20．0±2．5g，雌雄不限。体外分离、培养人胚胎食管鳞状上皮细胞、成肌细胞，并行5-BrdU标记；制备SIS材料并切割成1cm×lcm大小，在SIS材料同一表面接种两种细胞，待细胞在材料表面贴附后将其植入裸鼠体内深筋膜下，于术后第3天及l、2、3周取材行组织学和抗角蛋白、平滑肌肌动蛋白（smooth muscle actin，SMA）免疫组织化学观察，以了解食管鳞状上皮细胞、成肌细胞在SIS材料上的增殖、分化情况和复合物在裸鼠体内的血管化情况。结果人胚胎食管鳞状上皮细胞、成肌细胞能够渗透、生长于SIS材料中，并形成数层结构。植入体内第3天可见细胞增殖为多层覆盖于材料表面，并分泌大量细胞间基质。第2周时已经形成7～8层细胞，并伴有血管长入。3周时细胞增殖为十几层，大量血管长入。通过5-BrdU标记抗体染色观察，示SIS支架材料上生长的细胞多为所植入细胞。抗角蛋白，SMA免疫组织化学染色示移植细胞能够在体内分化。结论成肌细胞与鳞状上皮细胞在SIS材料上的复合培养物，在体内能继续增殖分化形成多层细胞结构，并能快速血管化，可用于组织工程化食管的构建。

骨髓基质干细胞与生物衍生骨复合修复山羊胫骨缺损的研究

目的 探讨骨髓基质干细胞 (marrow stromal stem cells,MSCs)与生物衍生骨复合修复山羊胫骨的长段骨 -骨膜缺损的可行性。 方法 将 12月龄山羊 35只双侧胫骨制备成中段 2 0 mm的骨 -骨膜缺损 ,其中 33只 ,将MSCs与生物衍生骨于体外复合培养后 ,将其植入右侧缺损处 ,常规钢板螺钉内固定作为实验组 ,以单纯生物衍生骨植入左侧作为对照组 ,另 2只为空白组不植入任何材料 ,在 2、4、6、8、12、16及 2 4周各时间点分别行大体标本、组织学观察 ,以及生物力学测试 ,比较 3组骨缺损修复的能力。 结果 4周时实验组支架材料部分吸收 ,植入物表面有纤维骨痂形成 ,对照组支架材料少量吸收 ,植入物表面有少量骨样组织形成 ;8周时 ,大体标本、组织学观察 ,实验组中的支架材料已完全降解 ,骨缺损部分修复 ,对照组中植入物两端少量新骨形成 ,材料中为纤维骨样组织 ,但 8周时 ,实验组与对照组的生物力学强度差异无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ;12周时 ,实验组骨缺损完全修复 ,对照组植入物两端有新骨包绕 ,与骨端连接紧密。 12～ 2 4周实验组弯曲应力大于对照组有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ;2 4周时空白组骨缺损未修复。 结论 所构建的组织工程骨修复能力较强 ,成骨迅速 ,且量大 。

不同保存方法对生物衍生骨支架材料细胞相容性的影响

目的 了解不同保存方法对生物衍生骨支架材料细胞相容性的影响。 方法 冻干生物衍生骨用两种不同保存液同等条件 4℃冷藏保存 3个月 ,以保存相同时间冻干生物衍生骨为对照。实验分为 A组 :成骨细胞复合 1号保存液处理材料培养 ;B组 :成骨细胞复合 2号保存液处理材料培养 ;C组 :成骨细胞复合冻干骨培养 ;D组 :单纯成骨细胞培养。以 2× 10 6个 / ml密度的成骨细胞悬液复合材料培养 1、3、5和 7天。用倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞的黏附和生长情况、检测细胞活力、碱性磷酸酶 (alkaline phosphatase,AL P)活性及流式细胞仪分析细胞周期。 结果 成骨细胞与三种不同方法保存的材料均可黏附 ,并在材料孔隙内生长、分化和增殖。复合培养 1和 3天 ,各组间无显著差异 ;复合培养 5和 7天 ,黏附于材料的细胞活力大小依次为 A组 >C组 >B组 (P<0 .0 1,P<0 .0 5 )。复合培养 7天 ,黏附于材料的细胞 AL P活性大小依次为 A组 >C组 >B组 (P<0 .0 1)。各组细胞周期未见明显变化 ,未见异倍体细胞。 结论 选择适宜的保存液对生物衍生骨支架材料的细胞相容性有一定优化作用。

羊膜的基础和临床应用研究进展

目的总结近年来羊膜的基础及临床应用研究进展。方法广泛查阅国内外有关羊膜的基础和临床应用研究文献,总结其研究成果。结果羊膜来源广泛、价格便宜、对细胞相容性好、抗原性低,羊膜上皮层含有羊膜上皮细胞及多种生长因子,基底膜含有、、、、型胶原,纤维连接蛋白及糖蛋白,这些独特的结构使其对多种细胞生长有促进作用,羊膜已在眼科临床中得到广泛应用。结论使用羊膜不违背伦理,随着对羊膜的进一步深入研究,以及组织工程、生物工程对材料需求的进一步加大,其应用会更加广泛。

脱细胞羊膜与脱细胞小肠黏膜下层修复猪创伤性皮肤缺损的比较研究

目的 比较脱细胞羊膜与脱细胞小肠黏膜下层作为创伤性皮肤缺损覆盖物,对创面修复的效果。方法 7只四川长白小猪,每只猪背部两侧各做3个4 cm×4 cm大小的皮肤缺损,深达深筋膜。每侧缺损随机分为3组,用不同敷料覆盖。A组：双层脱细胞羊膜；B组：双层脱细胞小肠黏膜下层；C组：空白,生理盐水纱布覆盖。术后观察创面局部情况、创面愈合率,10 d(2只,各组4个皮肤缺损)、20 d(2只,各组4个皮肤缺损)、30 d(3只,各组6个皮肤缺损)处死动物取材。行组织学观查,炎性细胞、血管内皮细胞及增殖细胞计数,羟脯氨酸含量测定。 结果A、B组覆盖的敷料与创面黏附紧密,与纱布无粘连,更换敷料时创面无渗血。C组纱布与创面黏附紧密,术后22 d前更换纱布时创面出血。组织学观察：术后各时间点A、B组皮下组织内炎性细胞数较C组少；C组皮下组织内胶原分布较A、B组紊乱。术后各时间点A、B组创面愈合较C组高,差异有统计学意义(P<0．05)；C组术后各时间点炎性细胞计数、皮下组织及肉芽组织内增殖细胞数明显高于A、B组,术后20、30 d,羟脯氨酸含量高于A、B组,差异有统计学意义(P<0．05)；3组内皮细胞计数,差异无统计学意义(P>0．05)。A、B组创面局部情况、创面愈合率、病理组织学检查、炎性细胞数计数、血管内皮细胞计数、增殖细胞计数和羟脯氨酸含量,差异均无统计学意义(P>0．05)。 结论 采用脱细胞羊膜、脱细胞小肠黏膜覆盖创伤性皮肤缺损,有提高创面愈合率、减少炎性反应,控制皮下组织及肉芽组织中细胞增殖,使胶原纤维有序排列的作用,能减少创面组织的出血和渗出。脱细胞小肠黏膜覆盖创面具有与脱细胞羊膜覆盖创面相近的修复效果。

脱细胞羊膜预防生物衍生肌腱修复鸡屈趾肌腱Ⅱ区缺损修复后的粘连

背景:羊膜有预防肌腱修复后粘连的作用,但存在一定的免疫排斥反应。目的:探讨脱细胞羊膜对生物衍生肌腱修复鸡屈趾深肌腱Ⅱ区缺损修复后肌腱粘连的预防作用。方法:分别以罗曼鸡右爪的第2,3,4趾将实验分成生物衍生肌腱组,生物衍生肌腱+脱细胞羊膜组以及自体肌腱组,建立屈趾深肌腱Ⅱ区1cm缺损模型。以生物衍生肌腱桥接第2,3趾缺损,以自体肌腱桥接第4趾的肌腱缺损,在第3趾的生物衍生肌腱和上下吻合口周围包裹完整的脱细胞羊膜。结果与结论:生物衍生肌腱组与自体肌腱组移植物为外源性愈合,生物衍生肌腱+脱细胞羊膜组羊膜有效地防止了成纤维细胞向修复区域内浸润,形成内源性愈合。肌腱粘连程度生物衍生肌腱+脱细胞羊膜组优于生物衍生肌腱组和自体肌腱组,生物衍生肌腱组和自体肌腱组相似,移植物周围的炎症反应生物衍生肌腱+脱细胞羊膜组>生物衍生肌腱组>自体肌腱组。证实脱细胞羊膜能通过机械性阻挡周围肉芽组织向修复区域内生长而防止外源性愈合造成的肌腱粘连。

硬组织切片技术在组织工程骨研究中的应用

目的 改进硬组织切片技术以适应骨组织工程研究。 方法 组织工程骨修复兔桡骨的术后标本和四环素标记大鼠股骨标本的观察。通过对硬组织切片中组织包埋、切片的方法、步骤及染色法 ,确定操作过程中的关键技术和需注意的问题 ,重点解决硬组织切片易于脱片的缺点。 结果 经改进后的硬组织切片技术能保持其原有组织结构 ,可进行 HE、Masson法以及免疫组织化学染色 ,染色后组织结构完整 ,细胞形态清晰 ,切片质量好。荧光显微镜观察骨组织结构完整。克服了普通硬组织切片技术容易发生脱片的缺点。 结论 改进的硬组织切片技术适合骨组织工程研究。

WO-1生物衍生组织工程骨支架材料的制备及性能研究

目的制备WO-1胶原生物衍生骨复合支架材料,检测其理化性质及力学强度,为骨组织工程研究和应用提供可选择的支架材料。方法将同种异体骨、I型胶原、WO-1进行系列理化处理,制成单纯生物衍生骨材料、胶原生物衍生骨复合材料及WO-1胶原生物衍生骨复合材料。制备后的材料行大体及扫描电镜观察其形貌特征,X线衍射分析材料成分,并对材料的力学性能进行分析测定。结果单纯生物衍生骨材料具有天然骨的网状孔隙系统;胶原生物衍生骨复合材料具有天然骨的网状孔隙系统,微孔表面覆盖胶原膜;WO-1胶原生物衍生组织工程骨复合支架材料具有骨组织的天然网状孔隙系统,微孔表面可见胶原膜覆盖。3种材料的孔径依次为90～700μm、75～600μm、80～600μm;孔隙率依次为87.96%、80.47%、84.29%,差异无统计学意义(P>0.05);其主要成分为羟基磷灰石,弯曲强度和压缩强度无统计学意义(P>0.05)。结论WO-1胶原生物衍生骨复合材料与其它两种材料相同,可作为一种有效的天然组织工程骨支架材料。

骨髓基质干细胞与生物衍生骨复合修复山羊胫骨缺损的影像学研究

目的 探讨骨髓基质干细胞 (MSCs)与生物衍生骨复合修复山羊胫骨的长段骨 -骨膜缺损 ,以及修复负重骨缺损的可行性。 方法 将 18只 12月龄健康杂种青山羊 (雌雄不限 ) ,制备成双侧胫骨中段 2 0 mm骨 -骨膜缺损模型 ,常规钢板螺钉固定 ;MSCs与生物衍生骨于体外复合培养 ;对同一只山羊将复合物植入右侧胫骨缺损处作为实验组 ,以单纯材料植入左侧胫骨缺损处作为对照组 ,空白组不植入任何材料 ;在 8、12、16和 2 4周各时间点分别行标本的大体观察、X线片观察和骨密度测试 ,比较其修复骨缺损的能力。 结果 大体观察、X线片和骨密度测试显示 :实验组 8周骨缺损部分修复 ,12、16周骨缺损完全修复 ,8、12和 16周其骨密度较对照组高 ,差异有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ;2 4周实验组与对照组骨密度差异无统计学意义 ;空白组骨缺损未修复。 结论 组织工程骨早期修复骨缺损能力较强 ,且较单纯材料成骨量大、迅速 ,能够对负重骨缺损进行有效的修复。

细胞治疗临床应用新进展

目的综述细胞治疗临床应用的新进展。方法广泛查阅近年有关细胞治疗临床应用研究的文献并进行综述。结果在细胞生物学尤其是干细胞生物学飞速发展的基础上,细胞治疗已开始应用于心血管系统疾病、神经系统疾病、肌肉骨骼相关疾病、糖尿病以及压力性尿失禁等多种疾病的临床试验研究,并取得了令人振奋的初步研究成果,展示了广阔的临床应用前景。结论细胞治疗为人类疾病治疗提供了一种新的治疗手段,具体作用机制还有待进一步研究。