茶多酚诱导鼻咽癌细胞cyclin D1表达下调

目的：探索茶多酚及其单体抑制鼻咽癌细胞增殖的分子机制。方法：应用光学显微镜、 MTT测定、流式细胞仪、报告基因和 Western blot分析等方法，研究茶多酚及其单体对细胞增殖和细胞周期的影响及分子机理。结果：茶多酚处理鼻咽癌细胞 CNE1- LMP1 24 h后，分裂相细胞显著减少，细胞增殖受到抑制，细胞的生存率从 100％下降到 38.1％ (200μ g/ml)； S期细胞明显减少，从 22.20％下降至 13.16％ (200μ g/ml)， G0/G1细胞所占百分率增加，从 68.50％上升至 74.08％，细胞出现 G1/S阻滞。同时， cyclin D1基因启动子转录活性显著下调，与对照组比下降 4～ 5倍，但相同浓度的茶多酚与 (－ )- epigallocatechin- 3- gallate(EGCG)处理没有显著性差别， cyclin D1蛋白表达水平明显降低。采用荧光酶双报告基因系统分析，发现茶多酚处理 12～ 14 h后， AP- 1、 NFκ B的反式激活活性均显著下降，与对照组 (0μ g/ml)比分别下降 5～ 6倍、 7～ 8倍，且呈明显的量效关系。结论：茶多酚能抑制鼻咽癌细胞 CNE- LMP1增殖，茶多酚诱导所致 cyclin D1基因的转录和表达下调可能在其中起着重要作用。

茶多酚诱导鼻咽癌细胞caspase-3活化

目的：探讨茶多酚能否诱导鼻咽癌细胞系 CNE1-LMP1凋亡及凋亡发生的分子机制。方法：用不同浓度的茶多酚处理 CNE1-LMP1细胞，分别用荧光显微镜、 DNA琼脂糖凝胶电泳、 MTT和流式细胞仪等方法，观察细胞生化和形态学改变；同时，确定茶多酚诱导细胞凋亡过程中 caspase-3活性的动力学变化。结果：茶多酚处理后，荧光显微镜下可见 CNE1-LMP1细胞在形态学上出现细胞核固缩、核碎裂、凋亡小体等凋亡细胞的形态学改变；琼脂糖凝胶电泳 DNA呈典型的“梯状”条带； MTT测定发现茶多酚处理后细胞生长受到不同程度的抑制。同时， CNE1-LMP1细胞在凋亡过程中 caspase-3活性的升高，呈明显的时效关系。结论：茶多酚能诱导 CNE1-LMP1细胞凋亡，可能通过 caspase-3的活化诱导细胞凋亡。

EB病毒编码的潜伏膜蛋白1参与鼻咽癌恶性演进的转录调控实验研究

探讨EB病毒潜伏膜蛋白 1(LMP1)激活激活蛋白 1(AP1) ,和核转录因子 (NF κB)在鼻咽癌细胞SUNE 1及亚细胞株恶性演进中的作用 .运用报告基因法和凝胶电泳迁移率法 (EMSA)分析AP1和NF κB反式激活活性和DNA结合活性 ,蛋白质印迹检测蛋白质表达 ;裸鼠致瘤实验结合组织制片研究瘤细胞的成瘤和转移能力 .结果显示恶性程度不同的SUNE 1亚细胞株的反式激活活性、DNA结合活性、LMP1蛋白表达及c Jun氨基端激酶 (JNK)活性均存在明显差异 ,且与细胞恶性程度正相关 .这些结果提示LMP1活化AP1和NF κB的信号通路参与了鼻咽癌细胞SUNE 1的恶性演进过程 .

EB病毒LMP-1上调鼻咽癌细胞系AP-1的活性

为了探讨 EB病毒潜伏膜蛋白 1 ( LMP- 1 )通过信号传导途径介导的致瘤分子机制 ,由此首先构建了 AP- 1报告基因 ,用佛波酯诱导确定了其报道 AP- 1的功能 ;通过建立荧光素酶双报道系统 ,研究了 LMP- 1表达对 AP- 1和 NFκB活性的影响 .研究发现 :在 LMP- 1阴性鼻咽癌 ( NPC)细胞系 ,导入 LMP- 1表达质粒后 ,AP- 1和 NFκB的活性均升高 4～ 5倍 ;而在 LMP- 1阳性 NPC细胞系中 ,当导入 LMP- 1反义表达质粒 ,AP- 1和 NFκB的活性则受抑制 ,活性下调 3～ 4倍 .结果表明 ,LMP- 1能上调 NPC细胞系 AP- 1的活性 ,同时再次证实了 LMP- 1能活化 NFκB.

EB病毒LMP-1在鼻咽癌细胞中通过JNK介导AP-1活化

EB病毒潜伏膜蛋白 1 (latentmembraneprotein 1 ,LMP 1 )活化激活蛋白 1 (activatorprotein 1 ,AP 1 )信号传导途径与其致瘤作用密切相关 .为了探讨LMP 1活化AP 1信号传导的分子机制 ,在可诱导调控LMP 1表达的鼻咽癌细胞系L7中 ,首先通过荧光酶双报道系统确定了LMP 1表达能激活AP 1 ;在此基础上 ,用c JunPathDetect系统确定LMP 1表达活化AP 1是通过c Jun的磷酸化 (活化 )介导 .虽然LMP 1不能上调c Jun上游主要调节激酶c JunN端激酶 (c JunN terminalkinase ,JNK)的蛋白表达 ,但能显著促进JNK的磷酸化 (活化 ) ;在L7细胞中导入JNK相互作用蛋白 (JNK interactingprotein ,JIP)基因 ,抑制JNK的核移位能显著抑制LMP 1诱导的AP 1活化 ,同时对NFкВ活化也有部分抑制作用 .结果表明 ,EB病毒LMP 1在鼻咽癌细胞中通过JNK介导AP

参麦对内毒素诱导的小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的保护作用

目的 :本文观察了参麦对小鼠注射内毒素 (LPS)后腹腔巨噬细胞 (MΦ)凋亡的影响。结果显示 :参麦能抑制LPS诱导的腹腔MΦ凋亡减少 ,使DNA琼脂糖凝胶电泳“梯状”带不明显 ,DNA断裂百分率显著降低 ,同时 ,能使MΦ吞噬功能部分恢复。

膳食纤维抗癌作用及其分子机理的研究进展

综述了膳食纤维流行病学和动物实验方面的抗癌证据,以及膳食纤维的量与不同类型癌症发生率的关系,分析了膳食纤维通过排毒、消炎、肠道菌群和脂代谢的调控参与抗癌的机理;在分子细胞水平,总结了膳食纤维对癌细胞周期阻滞和促使癌细胞凋亡的分子机理,以及其对癌变信号通路的调控。近年来的研究发现,膳食纤维具有抗肥胖、抗心脑血管疾病、消炎和抗糖尿病等生理功能,已成为维系人类身体健康、不能被其它物质所替代的一种营养素,被誉为人体的"第七营养素"。本文将为深入研究膳食纤维的抗癌分子机理和进一步开发膳食纤维功能性食品提供参考。

基因芯片技术的出现及对生命科学发展的影响

对于复杂的生命系统，基因芯片技术以一种综合、全面、系统的观点来研究生命现象，打破了以往“一种疾病一个基因”的研究模式，它充分利用了生物科学、信息学等当今带头学科的成果，已成为后基因组时代生命科学研究强有力的工具。随着基因芯片技术的出现，蛋白质芯片等类似新技术也相继发明，生命科学研究的思维方式正经历一场深刻的变革，同时加速了生物信息。

藤茶及二氢杨梅素的生物学功能研究进展

藤茶(vine tea)为葡萄科(Vitacea)蛇葡萄属(Ampelopsis michx.)显齿蛇葡萄(Ampelopsis grossedentata)植物的嫩茎叶经加工而成的茶制品。藤茶中含有丰富黄酮类物质,其中最主要成分为二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)。科学研究发现,藤茶及其主要活性成分具有抗癌、抗氧化、降脂、抗炎、抑菌和抗疲劳等作用,并且向一些重要基因和调控信号传导通路,参与不同的生物学功效,但其作用的分子机理尚不清楚。作者根据近年来国内外的最新研究进展,对藤茶及其主要活性成分的生物活性、调控的信号传导通路和作用的关键靶基因等进行了系统综述,以期为藤茶及其活性成分的深入研究提供理论参考,也有利于今后进一步对藤茶及其主要活性成分的开发利用。

休克与巨噬细胞凋亡

败血症休克及多器官功能衰竭均为临床常见危症 ,近年来的研究发现 ,休克时多器官功能衰竭发生与创伤、烧伤、感染后免疫力降低有关 ,尤其细胞免疫功能受到抑制 ,巨噬细胞作为一种主要的免疫细胞 ,其凋亡会导致细胞免疫功能下降 ,连同其它免疫细胞凋亡 ,使机体免疫功能障碍 ,这可能是败血症甚至多发性器官功能衰竭发生的主要原因。

茶多酚抑制肿瘤细胞增殖的分子机制研究新进展

茶多酚具有抗癌作用 ,但其分子机制尚未明了。近年来 ,茶多酚抑制肿瘤细胞增殖的研究取得了许多突破性进展。茶多酚能下调肿瘤细胞DNA拓扑异构酶与DNA引物酶的活性 ,抑制DNA的复制 ;茶多酚可明显促进WAF1/p2 1,KIP1/p2 7,p16,p18和p5 3蛋白表达 ,抑制cyclinD1,CDK4和CDK6表达 ,使细胞周期发生G1/S与G2 /M阻滞 ;茶多酚也能通过干预AP 1与NF κB信号转导通路、调控细胞内氧化还原状态、抑制端粒酶活性等多种机制导致肿瘤细胞增殖抑制。

AP-1信号转导通路与肿瘤

近年来 ,AP 1信号转导通路与肿瘤的研究取得了突破性进展。血清因子、TPA及许多癌基因均能活化AP 1,促使细胞增殖、转化和癌变。AP 1属多基因家族 ,其活性受多种不同水平的调控。AP 1的活化促使下游靶基因如MMPs、整合素、CD44和VEGF等表达 ,在肿瘤恶性演进过程中参与了细胞基质降解、粘附功能异常、转移瘤新生血管生成、肿瘤细胞运动能力的增强等各个环节。AP 1信号转导通路的活化与肿瘤的发生。

AP-1信号转导通路与肿瘤转移的研究进展

转移是恶性肿瘤最重要的生物学特征之一。近年来 ,激活蛋白 1(AP 1)信号转导通路与肿瘤的研究取得了很多突破性进展 ,许多瘤基因能通过活化AP 1促使细胞的转化和癌变 ,同时 ,AP 1的活化也能促使下游靶基因如MMP、整合素、CD44和VEGF等基因的异常表达 ,参与细胞基质降解、异常粘附、转移瘤新生血管生成等多个侵袭转移环节 ,提示AP 1信号转导通路的活化与肿瘤的侵袭。

JNK相互作用蛋白通过JNK途径影响鼻咽癌的增殖和凋亡(英文)

EB病毒编码的瘤蛋白潜伏膜蛋白 (LMP1)所介导的活化蛋白 (AP 1)信号转导途径在细胞增殖、分化、转化与凋亡方面发挥着重要作用 .越来越多的证据表明 ,AP 1信号转导通路中上游激酶JNK在鼻咽癌的发生发展过程中起着重要作用 .最近克隆出来的JNK相互作用蛋白 (JIP 1)是一种能抑制JNK核移位的胞浆锚蛋白 .为探讨JIP在LMP1调控AP 1信号通路中的作用机制 ,采用间接免疫荧光法和报告基因法 ,发现JIP通过有效地抑制磷酸化的JNK从胞浆移位入核 ,从而抑制LMP1上调的AP 1活性 .同时 ,JIP导入鼻咽癌细胞中 ,MTT法发现JIP能够明显抑制鼻咽癌细胞的生长 .进一步发现转染JIP后细胞的集落形成率与对照组相比大约降低了 5 3 6 % ,也抑制了细胞 .提示JIP可明显抑制细胞的增殖作用 .进一步采用流式细胞术分析 ,结果发现JIP引起细胞G1/S期细胞阻滞 ,说明JIP是抑制细胞增殖的重要调节子 .进一步采用流式细胞术定量发现 ,转染JIP后细胞的 2 4h凋亡百分率由 1 2 5 %上升到 8 2 5 % ,上升约 6 6倍 ,4 8h由 1 0 4 %上升到 31 4 5 % ,上升约 30倍 .采用激光共聚焦显微镜发现 ,转染JIP后细胞核发生显著变化 ,核质由均匀状态固缩成高凝集状态 ,形成了典型的胞膜体 .提示JIP可有效地促进细胞凋亡 .结果表明 ,JIP可通过抑制活化的JNK?

鼻咽癌细胞中EB病毒编码的潜伏膜蛋白1活化cyclinD1的表达

为了探讨EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(EBV LMP1)促进细胞增殖 ,参与EBV相关疾病致瘤的分子机制 ,研究了LMP1在鼻咽癌细胞中调节cyclinD1表达 ,进而影响细胞周期行进及细胞恶性表型改变 ,并初步确定了LMP1发挥该功能的结构域 .利用已建株的Tet on LMP1 HNE2鼻咽癌细胞系 ,蛋白质印迹实验分析LMP1诱导cyclinD1蛋白质表达的表达动力学 ,包括时间效应及剂量效应 ;利用三种LMP1功能区缺失的突变体及野生型LMP1,以载体型细胞为对照 ,确定LMP1活化cyclinD1表达的结构域 .同时结合基因诱导表达及反义寡聚核酸技术阻断基因表达的实验方法 ,进一步确定LMP1上调的cyclinD1功能 ,即对细胞周期行进及细胞恶性表型的影响 .结果表明LMP1确实可以诱导cyclinD1的表达 (2～ 4倍 ) ,且诱导具有时间依赖性及剂量依赖性 ;利用三种LMP1功能区缺失的突变体及野生型LMP1,以载体型细胞为对照 ,结合报道基因分析法 ,确定与空白载体细胞系比较 ,野生型LMP1从转录水平可反式激活cyclinD1报道基因活性约 11 2倍 ,其中CTAR1及CTAR2均可活化cyclinD1表达 ,但以CTAR2为主 ,与野生型LMP1诱导cyclinD1反式激活活性比较 ,CTAR1缺失导致cyclinD1报道基因活性下降 2 3 6 % ,CTAR2缺失导致cyclinD1活性下降约 80 7% ,C端均缺失时cyclinD1活性只?

EB病毒潜伏膜蛋白1通过TRAF/TRADD激活JNK信号途径

为了探讨在鼻咽癌细胞中EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(LMP1)激活c Jun氨基端激酶 (JNK)信号途径的分子机制 ,利用可调控表达LMP1的鼻咽癌细胞系L7,蛋白质印迹检测 ,发现LMP1能够促进JNK的活化 ;利用稳定表达LMP1的鼻咽癌细胞系HNE2 LMP1及其三种突变体HNE2 LMP1ΔCTAR 1、HNE2 LMP1ΔCTAR2、HNE2 LMP1ΔCTAR 1,2及LMP1阴性的HNE2 为材料 ,采用蛋白质印迹和报告基因法分析JNK和活化蛋白 1(AP1)活化情况 ,结果显示HNE2 LMP1和HNE2 LMP1ΔCTAR1中磷酸化JNK蛋白表达量和AP1活性都无显著差异 ,而与HNE2 LMP1ΔCTAR2、HNE2 LMP1ΔCTAR1,2、阴性对照HNE2及空白载体转染细胞的JNK蛋白表达和AP1活性具有显著差异 ;进一步比较转染TRAF、TRADD显性负性突变体鼻咽癌细胞系HNE2 LMP1中磷酸化的JNK量和AP1活性 ,结果显示 :TRAF DN和TRADD DN的导入使活化的JNK蛋白和AP 1活性显著降低 ,二者间无显著差异 ,提示TRAF和TRADD可能参与了LMP1对JNK和AP 1的活化 .以上结果提示在鼻咽癌细胞系中LMP1功能结构域CTAR2通过结合TRAF/TRADD激活JNK从而活化重要的转录因子AP1.

白藜芦醇的提取与检测方法研究进展

综述近年来国内外提取、检测白藜芦醇的技术。目前,白藜芦醇提取方法主要有溶剂提取、酶法提取、超临界流体萃取、超声波辅助提取、微波辅助提取法;白藜芦醇的检测方法:高效液相色谱法、色谱—质谱法、毛细管电泳法、化学发光法、荧光法。文章分析了各技术的优缺点,并对白藜芦醇的发展前景进行展望。

GCG干预LMP1激活的NF-κB信号转导通路中的靶分子

为阐明在鼻咽癌 (nasopharyngealcarcinoma,NPC)细胞中茶多酚干预EB病毒潜伏膜蛋白 1(latentmembraneprotein 1,LMP1)激活的NF κB信号转导通路中的靶分子 ,采用EBV阴性及阳性的鼻咽癌细胞系CNE1和CNE1 LMP1细胞 ,利用噻唑蓝 (MTT)法 ,观察表没食子儿茶素没食子酸酯 (EGCG)对CNE1和CNE1 LMP1细胞生存率的影响 .采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对NF κB活性的作用 .利用间接免疫荧光法 ,观察EGCG对NF κB (p6 5 )核移位的影响 ,再分别提取CNE1和CNE1 LMP1的胞浆及胞核蛋白 ,通过蛋白质印迹分析EGCG抑制NF κB (p6 5 )的核移位后胞浆及胞核蛋白中NF κB (p6 5 )的变化 .采用蛋白质印迹分析EGCG对IκBα的磷酸化水平的影响 .采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对EGFR启动子活性的影响 ,并用蛋白质印迹分析EGCG对EGFR自身磷酸化的作用 .结果表明EGCG对鼻咽癌细胞的抑制作用有剂量依赖性 ,并可抑制NF κB的活性 .EGCG能抑制NF κB (p6 5 )的核移位 ,并抑制IκBα的磷酸化 .EGCG对NF κB信号通路下游的靶基因EGFR的启动子活性及自身磷酸化都有抑制作用 .由上述结果可以推断 ,EGCG对信号转导通路上的NF κB、NF κB (p6 5 )、IκBα、EGFR多个靶点分子具有干预作用 .LMP1是EB病毒编码的蛋白质 ,因此 。

γ-谷维素对脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7炎症因子表达的影响

利用细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激巨噬细胞RAW264.7形成炎症模型,评价γ-谷维素对巨噬细胞炎症因子表达的影响。在LPS刺激的RAW264.7细胞培养基中,添加不同浓度的γ-谷维素,分析培养基中炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量,以及NO_2^-/NO_3^-含量,发现γ-谷维素能抑制炎症因子的分泌;利用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)分析mRNA表达水平,确定γ-谷维素能抑制炎症因子的基因表达;采用Western blotting分析进一步确定γ-谷维素能抑制炎症因子的蛋白表达。综上所述,γ-谷维素能明显抑制炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6、NO等分泌和表达。