ID-LC-MS/MS方法对高糖血症SD大鼠肾组织DNA中8-oxo-dGsn的检测

目的用同位素稀释高效液相-串联质谱法(Isotope-Diluted LC-MS/MS,ID-LC-MS/MS)和免疫组化法检测高糖血症SD大鼠肾组织DNA氧化产物8-羟基脱氧鸟苷(8-oxo-dGsn)的含量,评价高糖血症对大鼠肾组织DNA氧化损伤的影响。方法健康雄性SD(Sprague-Dawley rats)大鼠28只,随机分为4组:3月糖尿病模型组(3DR组)及其对照组(3CR组),6月糖尿病模型组(6DR组)及其对照组(6CR组)。糖尿病模型组接受腹腔单次链脲佐菌素(streptozotosin,STZ)每公斤70mg注射,对照组接受腹腔生理盐水注射。糖尿病模型组造模成功3个月及6个月后,分别抽提大鼠肾组织DNA,用ID-LC-MS/MS方法检测其DNA氧化产物8-oxo-dGsn的含量;用免疫组化法观察肾组织中DNA氧化损伤部位及程度。结果糖尿病模型组造模成功3个月时肾组织DNA中8-oxo-dGsn高于对照组高,造模成功6个月时肾组织DNA中8-oxodGsn含量比正常对照组增加显著(P<0.01);免疫组化结果显示3个月模型组DNA氧化损伤水平高于对照组,6个月时模型组DNA氧化损伤更为严重。结论高糖血症3个月可造成大鼠肾组织DNA的氧化损伤,高糖血症6个月时大鼠肾组织中DNA氧化损伤程度呈显著增加,高糖血症是肾组织中DNA氧化损伤的重要原因。

五味子提取物对氯吡格雷在大鼠体内药代动力学的影响

目的:研究五味子提取物对氯吡格雷在大鼠体内药代动力学的影响。方法:18只SD大鼠随机平均分成3组,分别为:单用组(单用氯吡格雷)、联用1次组(五味子灌胃1次和氯吡格雷联用)和联用6 d组(五味子灌胃6 d和氯吡格雷联用)。单用组禁食12 h;联用1次组大鼠禁食12 h后,灌胃五味子提取物2.4 mg·kg-11次;联用6 d组大鼠禁食12 h后,每日灌胃五味子提取物2.4 mg·kg-1,持续6 d。3组大鼠均予灌胃氯吡格雷30mg·kg-1。给药后尾静脉采血,用HPLC法测定氯吡格雷羧酸代谢物SR26334的血药浓度,DAS(数据采集系统)计算其药代动力学参数,并统计分析。结果:联用1次组SR26334的AUC(0-t)、AUC(0-∞)、C max、Cl z/F、T max、t1/2z与单用组比较,无显著性差别(P>0.05)。联用6 d组SR26334的AUC(0-t)、AUC(0-∞)、C max明显低于单用组(P<0.05),Cl z/F显著高于单用组(P<0.05),两组SR26334的T max、t1/2z比较无统计学意义(P>0.05)。结论:五味子提取物和氯吡格雷联合用于大鼠时,五味子提取物一次给药,不影响氯吡格雷的体内代谢;五味子提取物长期给药,会使氯吡格雷羧酸代谢产物SR26334的AUC和Cmax减少。临床上两药联合使用时,要注意氯吡格雷的用量,并且加强其药学监护。

两种不同类型的胃癌组织中DNA氧化损伤的水平及临床意义

目的检测胃腺癌、印戒细胞癌组织及正常胃黏膜组织中8-羟基脱氧鸟苷(8-oxodGsn)水平,探讨DNA氧化损伤与不同类型胃癌临床指标间的关系。方法提取42例胃癌(腺癌28例,印戒细胞癌14例)及癌旁5cm以外的正常组织的DNA,并采用核酸酶P1和碱性磷酸酶消化成单个核苷,再采用高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)检测其8-oxodGsn的水平;同时联合免疫组化法对组织中的8-oxodGs n进行定位分析。结果不同类型胃癌组织与正常组织中8-oxodGsn水平的差异均有统计学意义(均P<0.05)。8-oxodGsn主要分布于肿瘤细胞的细胞质和细胞核内,腺癌细胞中以细胞核分布居多,印戒细胞癌中以细胞质分布居多。不同类型胃癌组织中8-oxodGsn水平在癌组织浸润深度、淋巴结转移程度、远处器官转移程度、临床病理分期等差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 8-oxodGsn水平在两种类型的胃癌组织中均有不同程度的增加,提示DNA氧化损伤可能是胃癌发生、发展的重要因素。

低剂量饮酒抑制大鼠肝组织DNA中8-oxo-dGsn水平

目的检测低剂量饮酒大鼠肝组织DNA中氧化标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-oxo-dGsn)水平,评价低剂量饮酒对肝脏组织氧化应激的影响。方法 4月龄的健康雄性SD大鼠48只,随机分为对照组和饮酒组,饮酒组每天灌胃56度二锅头酒每天每公斤低于2g(<2g/kg),对照组每天灌胃同等体积的生理盐水。在灌胃4、8、12周时,用放射性核素稀释高效液相-串联质谱(ID-LC-MS/MS)方法检测大鼠肝组织DNA中氧化标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-oxo-dGsn)含量;用分光光度法测定抗超氧阴离子(O2-)能力和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力。结果低剂量饮酒4、8、12周后的肝组织DNA中8-oxo-dGsn含量均较同时间点对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);低剂量饮酒4、8、12周后的肝组织中抗O2-能力与GSH-PX活性均增强,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论低剂量饮酒可抑制大鼠肝组织DNA中的氧化水平,可能与肝脏中抗氧化酶活性的增高有关。

人胃癌及癌旁组织RNA氧化损伤水平的比较及临床意义

目的:通过检测人胃癌组织及其癌旁组织中的RNA氧化损伤程度,探讨RNA氧化与胃癌发生的相关性。方法:分别利用免疫组化方法和液相-串联质谱(LC-MS/MS)方法对61例胃癌组织及其癌旁组织中8-氧鸟苷(8-oxo Gsn)进行定性和定量分析,并统计分析结果。结果:免疫组化结果检测显示8-oxo Gsn在癌旁组织中含量低,而在胃癌组织中含量明显增高,且棕色染色区域主要集中在肿瘤细胞胞浆位置。质谱检测结果显示胃癌组织中8-oxo Gsn含量较对应癌旁组织高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:8-oxo Gsn在胃癌组织中含量增加。RNA氧化损伤可能在胃癌的发生发展过程中起重要作用。

ID-LC-MS/MS方法对被动吸烟大鼠肺组织DNA中8-oxo-dGsn的检测

目的用同位素稀释高效液相-串联质谱(ID-LC-MS/MS)方法检测大鼠肺组织中DNA氧化标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-oxo-dGsn)含量,评价长期被动吸烟的大鼠肺组织DNA的氧化损伤程度。方法健康雄性SD(Sprague-Dawleyrats)大鼠20只,随机分为4组:被动吸烟1个月模型组(Smoke-1M组)及其对照组(Control-1M组),被动吸烟4个月模型组(Smoke-4M组)及其对照组(Control-4M组)。被动吸烟组每次烟熏1h,每天2次,每次用烟5支。被动吸烟1个月、4个月后,分别取大鼠肺组织检测其DNA中的8-oxo-dGsn含量。结果被动吸烟1个月后,大鼠肺组织DNA中8-oxo-dGsn含量高于其正常对照组(P<0.05);被动吸烟4个月后,肺组织DNA中8-oxo-dGsn含量比正常对照组增加显著(P<0.01)。结论被动吸烟1个月即可造成大鼠肺组织DNA的氧化损伤,被动吸烟大鼠肺组织中DNA氧化损伤程度随烟龄增长有积累趋势,被动吸烟是肺组织中DNA氧化损伤的重要原因。

一例缺血性心肌病患者地高辛中毒的药学监护

目的探索临床药师在缺血性心肌病患者地高辛中毒治疗过程中的作用。方法临床药师参与缺血性心肌病患者地高辛中毒的治疗,协助医师监测地高辛血药浓度,根据患者的实际病情提供合理性建议,并对患者用药依从性、安全性进行宣教,分析与地高辛有潜在相互作用的药物及地高辛最适治疗浓度,并对此次患者地高辛中毒的原因进行总结。结果医师采纳临床药师的建议,通过治疗用药调整,患者恶心呕吐症状好转,经过8 d的治疗,患者病情得到了有效控制,之后出院。结论临床药师参与缺血性心肌病患者地高辛中毒的治疗,为患者提供个体化药学服务,并对患者地高辛中毒原因及最适治疗浓度进行全面分析,以最大程度预防或减少类似药物相互作用的发生,确保临床治疗的安全、有效。

冠心宁片对急性心肌梗死PCI患者心功能及氧化因子的影响

目的探讨冠心宁片对急性心肌梗死行冠状动脉介入治疗(PCI)患者心功能及氧化应激的影响。方法将50例行PCI的急性心肌梗死患者随机分成研究组和对照组,各25例。对照组1例患者入院后2 d死亡,实际入组24例。对照组采用PCI术常规治疗,研究组在对照组基础上加用冠心宁片。比较两组术后心功能及血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平。结果两组术前左心室舒张末期内径(LVEDDX)左心室射血分数(LVEF)、B型脑钠肽(BNP)以及血清SOD、MDA水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。两组术后LVEDD较术前缩小,LVEF及BNP较较术前升高(均P<0.05);研究组LVEDD和BNP均低于对照组,LVEF高于对照组(均P<0.05)。两组术后30 d SOD较较术前上升,MDA较术前下降(均P<0.05);且研究组血清SOD高于对照组,MDA低于对照组(均P<0.05)。结论常规治疗基础上加用冠心宁可以改善急性心肌梗死PCI患者氧化应激反应水平,有利于心肌恢复,保护心功能。

ID-LC-MS/MS评估糖尿病大鼠DNA和RNA氧化损伤

目的评估高血糖对DNA和RNA氧化损伤的影响。方法以链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠为模型,运用放射性核素稀释高效液相-串联质谱(ID-LC-MS/MS)法检测大鼠肾性、心性、肝性、肺、脑、睾丸、附睾、血浆和尿中的核酸氧化标志物8-氧化脱氧鸟苷(8-oxo-d Gsn)和8-氧化鸟苷(8-oxo-Gsn)的含量,并进行比较分析。结果虽然不同脏器DNA中8-oxo-d Gsn/106d Gsn和RNA中8-oxo-Gsn/10~6Gsn的基础水平不一致,但是模型组SD大鼠不同脏器中8-oxo-Gsn/10~6Gsn和8-oxo-d Gsn/10~6d Gsn的水平均高于对照组,6月组糖尿病大鼠肾脏、肺脏和睾丸中8-oxo-d Gsn/10~6d Gsn的水平高于对照组相应脏器的水平(P<0.05);3月组糖尿病大鼠肾脏、心脏和睾丸中8-oxo-Gsn/10~6Gsn的水平高于对照组相应脏器的水平(P<0.05);除了脑和肺脏,6月组糖尿病大鼠各脏器中8-oxo-Gsn/10~6Gsn的水平均高于其对照组(P<0.05);糖尿病大鼠血浆8-oxo-d Gsn和8-oxo-Gsn浓度明显高于其同龄对照大鼠,且随着高糖血症的持续而增加。尿液检测结果的趋势与血浆中的检测结果一致,RNA氧化代谢产物8-oxo-Gsn均高于DNA的氧化代谢产物8-oxo-d Gsn。结论高血糖引起的氧化应激增强可以造成多器官DNA和RNA氧化损伤增加,DNA和RNA氧化损伤随着高糖血症的持续而增加;RNA氧化损伤水平高于DNA氧化损伤,其标志物尿液8-oxo-Gsn可以作为评估糖尿病氧化应激状态的良好指标。

高效液相色谱法测定大鼠肝微粒体CYP3A酶的活性

目的以咪达唑仑为探针药用HPLC法测定大鼠肝微粒体CYP3A酶活性。方法用ZORBAX SB-C18色谱柱分离;流动相为乙腈-水-0.1%三氟乙酸;流速为1 mL.min-1;柱温40℃;检测波长为230 nm。肝微粒体加入咪达唑仑孵育5 min后,用乙腈终止反应,加入内标溶液50μL,混匀后离心10 min,取上清进行HPLC分析;计算Km和Vmax。结果 1-羟基咪达唑仑浓度在0.06～3.00 mg.L-1内线性关系良好;日内、日间精密度均<10%,回收率>75%。咪达唑仑羟化反应的Km=7.32μmol.L-1,Vmax=0.59 nmol.min-1.mg-1pro。结论本方法稳定可靠,能准确反映CYP3 A酶的活性。

HPLC法检测大鼠血浆中吡非尼酮的浓度及其药动学研究

目的:建立大鼠血浆吡非尼酮检测的高效液相色谱方法,研究吡非尼酮的药代动力学。方法:血浆经乙酸乙酯,采用ZORBAX SB-C18色谱柱;流动相为乙腈-水-0.1%TFA(三氟乙酸),流速为1.0 mL·min-1;检测波长为318(0～8 min)、246nm(8～10 min)。6只雄性大鼠单剂量灌胃给予15 mg.kg-1吡非尼酮,分别在给药后多点尾静脉采血;用该方法检测血浆中吡非尼酮的浓度。用DAS(数据采集系统)计算药代动力学参数。结果:吡非尼酮浓度在0.025～4.00 mg·L-1范围内线性关系良好(r=0.999 9);定量下限为0.025 mg·L-1;低、中、高3个浓度的相对回收率分别为(100.40±4.66)%、(102.17±4.02)%和(101.12±2.89)%;日内RSD分别为4.6%,3.9%,2.9%,日间RSD分别为5.5%,4.8%,3.7%。大鼠吡非尼酮灌胃后,血浆吡非尼酮在0.39 h达到1.69 mg·L-1的峰值浓度,血浆半衰期为2.21 h。吡非尼酮在大鼠体内符合一级吸收的二室模型。结论:本方法准确可靠、简便快速,适用于大鼠血浆吡非尼酮浓度的测定及其药代动力学研究。

HPLC检测大鼠血浆中姜黄素的浓度及其药动学研究

目的建立大鼠血浆姜黄素检测的高效液相色谱方法,研究姜黄素的药动学。方法血浆经乙酸乙酯萃取,以ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm)为色谱柱;流动相为乙腈-水-0.1%TFA(50∶30∶20),流速为1.0 mL.min-1;检测波长为302(0～5.5 min)、426 nm(5.5～7.5 min)。6只SD大鼠,♂,单剂量静脉给予10 mg.kg-1姜黄素,分别在给药后多点尾静脉采血。用该方法检测血浆中姜黄素的浓度;用DAS计算药动学参数。结果姜黄素浓度在0.05～6.00 mg.L-1内线性关系良好(r=0.999 8);定量下限为0.05 mg.L-1;低(0.10 mg.L-1)、中(1.00 mg.L-1)、高(4.00 mg.L-1)3个浓度的回收率分别为(99.3±5.4)%,(104.2±4.7)%和(99.8±2.0)%;日内RSD分别为4.49%,3.90%和1.72%,日间RSD分别为4.61%,4.27%和2.00%。大鼠姜黄素静脉注射后,姜黄素在大鼠体内符合二室模型;α相和β相消除半衰期分别为0.08 h和0.75 h。结论本方法准确可靠、简便快速,适用于大鼠血浆姜黄素浓度的测定及其药代动力学研究。

HPLC法检测大鼠血浆中氯吡格雷羧酸代谢物SR26334

目的:建立大鼠血浆中氯吡格雷羧酸代谢物SR26334检测的高效液相色谱方法,研究SR26334的药代动力学。方法:血浆经高氯酸沉淀,以ZORBAX SB-C18为色谱柱;流动相为乙腈-水-0.1%TFA(三氟乙酸),流速为1.0 ml/min;检测波长为230 nm(0 min～4.5 min)、280 nm(4.5 min～6 min)。结果:SR26334浓度在0.5 mg/L～50 mg/L范围内线性关系良好(r=0.9999);定量下限为0.5 mg/L;低、中、高三个浓度的相对回收率100.34%～101.78%;日内RSD(相对标准偏差)和日间RSD均小于10%。结论:本方法准确可靠、简便快速,适用于大鼠血浆SR26334浓度的测定。

1例应用万古霉素引发疑似线状IgA大疱性皮病患者的药学监护

目的探索临床药师对药物引发疑似线状IgA大疱性皮病患者的药学服务模式。方法通过参与1例老年患者应用万古霉素导致疑似线状IgA大疱性皮病的药学治疗实践,临床药师根据患者的病情提供合理的治疗建议,协助医师完善患者的治疗方案,调整治疗用药,为患者提供个体化药学服务,并对患者进行药学监护。结果患者体温得到有效控制,全身散在性水泡及热灼痛感得到有效治疗,经过诊治患者病情好转,在药物不良反应症状充分缓解后出院。结论临床药师通过对1例老年患者应用万古霉素引发疑似线状IgA大疱性皮病的药学监护促进了临床合理用药。

2015—2019年丽水地区细菌性腹泻病原分布及耐药性分析

【目的】分析2015—2019年浙江省丽水地区细菌性腹泻病原分布及耐药情况,为细菌性腹泻的防治提供科学依据。【方法】收集2015—2019年丽水市人民医院腹泻患者粪便标本,采用飞行时间质谱仪和血清凝集反应鉴定细菌,使用VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定药敏分析仪对可疑菌进行药敏鉴定。【结果】2015—2019年共检测粪便样本2937份,其中阳性样本191份,男性感染率为6.65%,女性感染率为6.32%。21~30岁年龄段检出率最高,51~60岁次之,细菌性腹泻呈夏季高发。不同菌属检出率分别为沙门氏菌3.98%、副溶血弧菌1.43%、气单胞菌0.48%、志贺菌0.37%及其他3.66%。沙门菌对头孢呋辛、阿米卡星等耐药率高;副溶血弧菌、志贺菌对氨苄西林耐药率高;气单胞菌对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦等耐药率高。【结论】2015—2019年丽水地区细菌性腹泻病原菌有性别、年龄、季节差异,以沙门氏菌为主,多重耐药现象严重,需加强细菌性腹泻病原菌和耐药的监测。

丽水地区女性人乳头状瘤病毒感染基因亚型分布及现状分析

目的了解丽水地区女性不同年龄段人乳头状瘤病毒(HPV)的感染状况,为丽水地区女性宫颈癌的防治提供科学的依据。方法选择2017年1月-2018年8月在丽水市人民医院妇科门诊就诊及体检中心体检的17 983例女性作为研究对象,通过DNA杂交技术检测宫颈脱落细胞的HPV基因亚型,并对HPV感染情况及基因亚型进行统计分析。结果参与研究的17 983例女性中,HPV阳性占25.02%,确定高危型占20.40%,可能高危型占1.01%,确定低危型占3.60%。单一感染占17.72%,双重感染占5.19%,多重感染占2.11%。单一感染以HPV52、HPV58和HPV16较为常见,其中HPV52以40岁-49岁为高发年龄段(32.45%),而HPV58和HPV16分别为50岁-59岁(38.05%)和30岁-39岁(29.39%)。HPV感染的各年龄组中以70岁-79岁(41.03%)的检出率最高,其次为60岁-69岁和≥80岁。结论通过分析21种HPV基因亚型在丽水地区女性不同年龄段中分布,为丽水地区女性宫颈癌的防治提供可靠的流行病学依据及科学的临床指导。

丽水地区2020年住院儿童9种呼吸道病毒病原学特征分析

目的了解丽水地区2020年9种常见儿童呼吸道病毒的病原学分布特点,为儿童呼吸道病毒感染的防治提供参考依据。方法 2020年住院儿童共送检呼吸道病毒标本1 092份,通过RT-PCT法进行鼻病毒(HRV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒(PIV)、偏肺病毒(MPV)、博卡病毒(BoV)、腺病毒(ADV)、冠状病毒(CoV)、甲型流感病毒(IFA)、乙型流感病毒(IFB)检测,并对检测结果进行分析。结果 2020年1 025例住院儿童共检出呼吸道病毒428例;HRV、RSV、PIV、BoV、ADV、CoV、IFA在0.25岁~2.5岁高发;HRV、RSV、PIV、MPV、BoV、ADV在冬季高发;儿童呼吸道病毒主要以单病毒感染为主。结论鼻病毒是引发本地区儿童呼吸道病毒感染的常见病原体,7种呼吸道病毒高发于小儿期,6种高发于冬季,以上呼吸道感染为主要表现,因此在冬季应加强小儿期上呼吸道感染患者呼吸道病毒的监测。

丽水地区2016年—2021年体检人群胃蛋白酶原、胃泌素-17水平的监测分析

目的 通过丽水地区体检人群胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)、胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)、胃泌素-17(G-17)水平的监测分析,为胃癌早期筛查和诊断提供科学的依据。方法 选取2016年1月—2021年12月本院10 095例健康体检者,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中PGⅠ、PGⅡ、PGⅠ/PGⅡ和G-17水平,对结果进行统计分析。结果 Mann-Whitney U检验结果显示男性健康体检人员PGⅠ、PGⅡ、PGⅠ/PGⅡ水平明显高于女性(P<0.001),而G-17则相反(P<0.001)。Kruskal-Wallis H检验结果显示2016年—2021年不同年份间和不同季节的PGⅠ、PGⅡ、PGⅠ/PGⅡ和G-17水平差异有统计学意义(P<0.001)。Spearman秩相关系数结果显示PGⅠ、PGⅡ和G-17水平与年龄成正相关(P<0.001),而PGⅠ/PGⅡ则相反(P<0.001)。结论 通过PGⅠ、PGⅡ、PGⅠ/PGⅡ和G-17对丽水地区健康体检人群进行胃癌早期筛查和诊断时,需考虑不同年份、季节、性别和年龄段对其的影响。