二重PCR检测猪、鸡源致病性大肠杆菌、沙门氏菌磺胺类耐药基因(Sul1、Sul2、Sul3)的研究

利用二重PCR对临床分离的猪、鸡源致病性大肠杆菌103株和沙门氏菌33株的3个磺胺类药主要耐药基因Sul1、Sul2、Sul3进行了检测。结果表明,在19株耐SD的沙门氏菌中有17株检测出Sul1或Sul2基因,检出率为89.47%,与药敏试验的结果相比,符合率为89.47%;在56株耐SD的大肠杆菌中有53株检出耐药基因,与药敏试验的符合率为94.64%。二重PCR方法与常规PCR的结果符合率为98.5%,具有很高的一致性;与药敏试验也有很好的符合率,具有较高的特异性。整个试验过程只需7 h,比常规PCR节约7 h,检测速度有了较大的提高。

川西北草原牦牛、藏羊肠道寄生虫流行病学调查及防治措施

采用粪便内蠕虫虫卵检查法,对四川红原县牧区采集的39份粪样品,其中牦牛30份,藏羊9份,对6种常见寄生虫进行了流行病学调查,结果表明这几种寄生虫的检出率为:球虫牦牛57%;藏羊67%、线虫牦牛57%;藏羊100%、前后盘吸虫牦牛43%;藏羊22%、肝片吸虫牦牛23%,藏羊11%、鞭虫牦牛7%及绦虫牦牛3%等。在此基础上,结合川西北草原畜牧业的生产实际,提出了主要寄生虫病的防治措施。

猪源致病性沙门氏菌耐药基因的分析

采用平板稀释法,选用氨基糖苷类、四环素类、磺胺类和氯霉素类4大类抗生素的11种药物,对30株猪源致病性沙门氏菌进行了药敏试验,结果有28株菌(93.3%)至少对一种药物有耐药性;对四环素、强力霉素、磺胺甲基异口恶唑、复方新诺明、链霉素、卡那霉素和氯霉素有耐药性的菌株较普遍,在所有菌株中占比例分别为83.3%、80%、80%、76.7%、60%、56.7%和56.7%。设计了25对引物,对耐药基因进行了扩增及序列测定,结果扩增到13种耐药基因,与GenBank中的相应基因有很高的同源性(≥98.1%)。30株猪源致病性沙门氏菌中至少含有一种耐药基因的菌株有28株(93.3%),sulⅠ、aph(3′)-Ⅱat、etC、Cat1t、etA和aadA1耐药基因较为普遍,检出率分别为76.7%、60%、60%、43.3%、40%和36.7%。药敏试验结果与耐药基因检测结果有很高的一致性(≥88%)。

大肠埃希氏菌和沙门菌氨基糖苷耐药基因PCR检测方法的建立

采用平板稀释法,选用氨基糖苷类药物链霉素、庆大霉素、卡那霉素和新霉素对22 株猪、鸡大肠埃希氏菌和30株猪、鸡沙门菌进行了药敏试验。结果显示,在4种药物中大肠埃希氏菌对卡那霉素的耐药率最高,达81.8%,而沙门菌则对链霉素的耐药率最高,达60%,两类细菌都对新霉素的耐药率最低。设计了5对引物,对耐药基因aph(3′) Ⅱ、aadA1、aadA2、aadB和aac(3) Ⅰa进行了扩增,获得的基因片段与预期的大小一致;序列分析表明,扩增产物与GenBank中的相应序列有很高的同源性(>99.8%)。采用建立的PCR技术,对22株猪、鸡大肠埃希氏菌和30 株猪、鸡沙门菌的耐药基因进行了检测,证实耐药基因普遍存在,在大肠埃希氏菌中aadA1 基因的检出率最高(12/22),在沙门菌中aph(3′) Ⅱ基因的检出率最高(18/30),在所有的菌株中都未能检测出aac(3) Ⅰa基因。

多重耐药鸡致病性沙门氏菌I类整合子的检测研究

采用药敏纸片法（NCCLS2004），对19株鸡致病性沙门氏菌进行了药敏试验，结果19株菌对丁胺卡那霉素、卡那霉素、庆大霉素、新霉素、链霉素、氨苄青霉素、强力霉素、氟哌酸、头孢三嗪、氯霉素、磺胺异恶唑、四环素、先锋V13种药物的耐药率分别是：5．26％、63．16％、47．37％、36．84％、84．21％、84．2％、100％、57．9％、5．26％、52．6％、89．47％、100％、26．3％。19株菌多为多重耐药：其中耐5种、6种、7种、8种、9种、10种药物的分别为10．53％、5．26％、15．79％、21．05％、15．79％、15．79％，多重耐药率84．21％（16／19）；根据Ⅰ类整合子的结构设计了3对引物，对Ⅰ类整合子的intⅠ1、可变区、3’保守端进行扩增，检测鸡致病性沙门氏菌Ⅰ类整合子，分析Ⅰ类整合子与多重耐药的关系，扩增出了750-2000bp的基因盒片段，检出率为73．68％（14／19），多重耐药菌的Ⅰ类整合子检出率为87．5％（14／16），Ⅰ类整合子PCR阳性菌株多重耐药率为100％（14／14）。研究结果表明，Ⅰ类整合子与多重耐药之间有明显的相关性。

RNA干扰(RNAi)的现象和作用机制以及在猪病防控中的应用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)即双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)介导的同源mRNA特异性降解过程。RNAi的分子机制的研究也不断取得进展,目前研究得最多的是转录后基因沉默机制,RNAi发生过程主要分为起始阶段、沉默信号的放大和转移阶段、效应阶段。RNAi目前已经用于许多动物病毒性疾病的研究中,其中以在猪病治疗中的应用较为突出。

非洲猪瘟环境下规模化猪场“六部曲”生物安全体系的构建

自2018年8月份我国首例非洲猪瘟发生以来,国内生猪存栏与出栏量大幅下降,猪肉供需矛盾加剧,导致猪肉价格飞涨,对消费者的生活和我国生猪产业造成巨大影响。笔者就非洲猪瘟防控提出"一场布局、二段饲养、三级洗消、四流管控、五区划分、六色线路"的"六部曲"生物安全体系建设,以期为非洲猪瘟的综合防控提供参考。