脂肪干细胞外泌体传递miR-145调控增生性瘢痕成纤维细胞生物学特性的实验研究

目的:探究脂肪干细胞(Adipose-derived stem cells,ADSCs)来源的外泌体(Exosome,Exo)传递miR-145对增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophic scar fibroblasts,HSF)生物学功能的影响。方法:从增生性瘢痕组织中分离培养HSF细胞,从脂肪组织中分离培养ADSCs,流式细胞术检测其表面标记物表达情况;采用含miR-145过表达慢病毒及阴性对照miR-NC慢病毒感染ADSCs,实时荧光定量PCR测定转染效果,并提取各转染组ADSCs上清液中Exo,获得含miR-145过表达的ADSCs来源Exo,利用透射电镜观察其形态、纳米颗粒跟踪分析仪检测粒径分布以及Western blot检测表面标志性蛋白CD63、CD81、CD9和TSG101的表达情况对提取的外泌体进行鉴定;添加外泌体培养HSF细胞,具体分组包括对照组、Exo组、miR-NCExo组、miR-145-Exo组,PKH26荧光标记的ADSC来源的Exos与HSF细胞培养,共聚焦荧光显微镜观察外泌体能否被细胞摄取,EdU检测各组HSF细胞的增殖能力,AnnexinⅤ-FITC/PI法检测各组HSF细胞的凋亡水平,Western blot检测各组细胞内凋亡相关蛋白(cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-2)及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原(COL-Ⅰ、COL-Ⅲ)的蛋白表达水平。结果:成功分离到ADSCs,其表面标志物CD44、CD90及CD105均呈阳性表达;经miR-145过表达的慢病毒转染的miR-145-ADSCs组细胞中miR-145相对表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。分离到直径约100 nm、呈双层膜结构的杯状或球状以及外泌体标志蛋白CD63、CD81、CD9和TSG101均为阳性表达的ADSCs来源Exo;将ADSCs来源Exo与HSF细胞共培养后,Exo可被HSF细胞摄取,miR-145过表达的ADSCs来源Exo能够明显抑制HSF细胞增殖(P<0.05),促进其凋亡(P<0.05),上调促凋亡蛋白cleavedcaspase-3和Bax的蛋白相对表达量(P<0.05),抑制抗凋亡蛋白Bcl-2及COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的蛋白相对表达量(P<0.05)。结论:脂肪干细胞来源的外泌体可通过传递miR-145抑制增生性瘢痕皮肤中成纤维细胞的增殖活性并促进其凋亡,其分子机制可能与上调cleaved-caspase-3和Bax的蛋白表达以及抑制Bcl-2、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的蛋白表达有关。

老年慢阻肺急性加重期患者睡眠障碍对焦虑抑郁状态和短期预后的影响

目的调查老年慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)急性加重期患者睡眠障碍状况,分析睡眠障碍对焦虑抑郁状态和短期预后的影响,并探讨睡眠障碍的影响因素,为老年慢阻肺急性加重期患者睡眠障碍管理提供参考依据。方法收集256例老年慢阻肺急性加重期患者作为观察对象,采用匹茨堡睡眠量表(PSQI)、疲乏程度量表(FSS)、焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS)评估睡眠质量、疲乏程度、焦虑和抑郁状态。比较睡眠障碍组(n=142)和非睡眠障碍组(n=114)患者SAS评分、SDS评分和预后。采用Pearson或Spearman相关分析PSQI评分与SAS评分、SDS评分、预后的相关性。采用Logistic回归分析睡眠障碍的影响因素。结果睡眠障碍组SAS评分、SDS评分及预后不良比例高于非睡眠障碍组(P均<0.05)。相关性分析显示,PSQI评分与SAS评分、SDS评分及预后不良呈正相关(r=0.550,0.465,0.408),(P均<0.05)。Logistic回归分析显示,经济条件、呼吸困难指数、疲乏、吸入药物治疗依从性、肺康复锻炼意愿、SAS评分和SDS评分均是老年慢阻肺急性加重期患者发生睡眠障碍的影响因素(OR=3.975,3.953,4.131,4.618,4.910,1.149,1.256,P均<0.05)。结论老年慢阻肺急性加重期患者睡眠障碍会加重患者的焦虑、抑郁状态,而且会增加短期预后不良发生率。经济条件、呼吸困难指数、疲乏、吸入药物治疗依从性、肺康复锻炼意愿、焦虑和抑郁均是其发生睡眠障碍的影响因素。

探讨抑郁症患者的危险行为分析

目的 探讨分析抑郁症患者的危险行为,以便及时干预.方法 选取我院收治的130例抑郁症患者,按有无危险行为记录分为对照组和观察组,采用汉密顿抑郁量表,外显攻击量表和明尼苏达人格测验表对患者进行检测.结果 两组患者通过数据检测,观察组患者的阻滞、绝望感及认知障碍这些因子分比对照组要高,说谎量和诈病量值也较对照组高,观察组的主要危险行为是自我伤害.结论抑郁症患者的主要危险行为是自我伤害,及时预测其危险行为进行干预,能有效减少危险行为的发生.

脂肪间充质干细胞外泌体通过miR-145抑制小鼠增生性瘢痕血管生成及纤维增生

目的探究miR-145在脂肪间充质干细胞(ADSCs)来源外泌体(Exo)抑制小鼠增生性瘢痕(HS)血管生成与纤维增生中的作用。方法从人皮下脂肪组织分离培养ADSCs,经成脂或成骨分化诱导培养基诱导后,采用油红O染色或茜素红染色检测细胞成脂、成骨分化能力,流式细胞术测定ADSCs表面标志物CD29、CD34、CD45、CD90和CD105表达;使用含miR-145过表达的慢病毒感染ADSCs后提取Exo,透射电镜观察颗粒物的形态,纳米颗粒跟踪分析仪分析粒径大小,Western blot检测Exo表面标志性蛋白Alix、Tsg101和CD81表达,实时荧光定量PCR检测miR-145的相对表达量。将40只SPF级健康雄性C57/BL6小鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、Exo组和miR-145-Exo组,每组10只,除对照组外,其余3组小鼠均构建HS模型,Exo组和miR-145-Exo组小鼠分别在背部伤口处皮下注射100μL Exo与转染miR-145的Exo,对照组和模型组注射等体积PBS;14 d后处死各组小鼠并切取瘢痕组织,HE染色和Masson染色观察皮肤组织病理学变化及胶原沉积情况,免疫组化染色测定血管内皮生长因子(VEGF)表达,Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)及Ⅲ型胶原蛋白(Collagen Ⅲ)的蛋白表达水平。结果分离的细胞经茜素红染色和油红O染色后,可见细胞内沉积钙盐,有明显脂滴形成,CD105、CD90、CD29呈阳性表达,而CD34、CD45呈阴性表达,说明成功分离获得ADSCs;透射电镜观察到颗粒物为球形囊泡,粒径峰值约为128 nm,Exo标志性蛋白Alix、Tsg101和CD81均呈阳性表达,说明成功分离到Exo,且经miR-145慢病毒转染的ADSCs来源Exo中miR-145相对表达水平升高(P<0.05)。相较于模型组,Exo组和miR-145-Exo组的小鼠皮肤组织损伤减轻,HS区域减少,且真皮层变薄,胶原沉积减少,组织纤维化得到缓解,VEGF阳性表达率降低,α-SMA、TGF-β1、Collagen Ⅰ及Collagen Ⅲ的蛋白表达水平均下调,差异均具有统计学意义(P<0.05);与Exo组比较,miR-145-Exo组小鼠皮肤组织病理学表现改善更明显,纤维化缓解更明显,真皮层厚度更小,VEGF阳性表达率更低,α-SMA、TGF-β1、Collagen Ⅰ及Collagen Ⅲ的蛋白表达水平均下调更明显,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论miR-145能够促进ADSCs来源Exo对小鼠HS形成的抑制作用,该作用与抑制瘢痕血管生成、纤维增生以及相关因子TGF-β1、α-SMA、Collagen Ⅰ及Collagen Ⅲ的表达有关。