基因疫苗干预对感染小鼠心肌组织病理及超微结构的影响

目的探讨基因疫苗干预对柯萨奇病毒B组3型(coxsackie virus group B type 3,CVB3)感染后,小鼠心肌组织病理及细胞超微结构的变化及意义。方法将BALB/C小鼠随机分为3组,每组11只,用空质粒pcDNA3、基因疫苗pcDNA3/VP1和融合基因疫苗pcDNA3/MDC-L19-VP1分别免疫,共3次,每次间隔4周。末次免疫后第3周,每组随机取3只小鼠,腹腔注射含3倍半数致死量(3 half lethal dose,3LD50)的CVB3病毒液,感染后第7天将小鼠处死,用于检测血中病毒滴度,并取心脏组织进行病理观察和细胞超微结构观察。每组剩余8只小鼠,腹腔注射致死量病毒液,观察并记录动物存活情况。结果预防性接种重组基因疫苗后,CVB3感染的小鼠生存率pcDNA3/MDC-L19-VP1组为37.5%,pcDNA3/VP1组12.5%,pcDNA3组11 d内全部死亡,3组生存率比较差异有统计学意义(P<0.01);3组小鼠血中的病毒滴度依次降低,且差异有统计学意义(P<0.01);光镜观察显示pcDNA3/MDC-L19-VP1组小鼠心肌组织细胞未出现严重的水肿和炎细胞浸润,电镜显示心肌细胞未出现核周水肿,肌原纤维未见断裂溶解,线粒体、肌浆网等细胞器未见明显异常,仅有少量炎性细胞浸润。结论融合基因重组疫苗可以有效的预防CVB3感染对心肌的损伤。

柯萨奇病毒B3的VP1 DNA疫苗与蛋白或重组腺病毒疫苗不同组合免疫方式的免疫效果观察

目的观察柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)衣壳蛋白VP1DNA疫苗初免后VP1蛋白或重组腺病毒rAd/VP1加强的prime-boost策略的免疫效果。方法用CVB3VP1的真核表达质粒pcDNA3/VP1初次免疫小鼠后,分别用VP1蛋白或重组腺病毒rAd/VP1加强免疫2次。检测免疫小鼠血清特异性IgG抗体、中和抗体滴度以及脾脏细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocytes,CTLs)杀伤活性;致死量CVB3攻击后,检测小鼠血中病毒滴度并观察动物的存活情况。结果 pcDNA3/VP1+VP1蛋白组小鼠血清IgG抗体、中和抗体滴度以及动物生存率明显高于pcDNA3/VP1+rAd/VP1组和pcDNA3/VP1质粒组(P<0.05);pcDNA3/VP1+rAd/VP1组和pcDNA3/VP1+VP1蛋白组小鼠脾脏CTLs杀伤活性明显高于pcDNA3/VP1质粒组(P<0.05)。结论质粒pcDNA3/VP1初次免疫后,VP1蛋白或重组腺病毒rAd/VP1加强的prime-boost策略有较好的免疫效果,两者比较pcDNA3/VP1+VP1蛋白prime-boost免疫策略的效果更为明显。

基质金属蛋白酶2的表达及其与胃癌临床生物学行为和预后的关系

目的探讨在胃癌组织、胃癌区域淋巴结及正常胃黏膜中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)的表达情况,分析其与胃癌临床生物学行为、侵袭转移能力及预后的关系。方法选取行胃癌根治术并经病理证实的胃癌标本96例,胃癌区域淋巴结96例,正常胃黏膜60例,全部病例均随访5年以上。应用免疫组织化学方法检测上述标本中MMP-2的表达情况。结果胃癌组织中MMP-2的阳性表达率明显高于正常胃黏膜,并随分化程度的降低、浸润深度的加深表达增加,随临床分期的增加、淋巴结的转移而明显增强(P<0.05或P<0.01)。胃癌区域淋巴结组织中,有转移淋巴结组MMP-2的阳性表达率明显高于无转移淋巴结组(P<0.01)。胃癌患者生存期≥5年组MMP-2表达阳性率明显低于生存期<5年组(P<0.01)。结论 MMP-2的表达差异与胃癌的侵袭转移及预后关系密切。检测MMP-2对胃癌侵袭转移的预测、预后评估及指导合理的综合治疗等具有重要的临床意义。

CVB3腺病毒载体Ad/sVP1-C3d3的构建及免疫效果研究

目的:构建柯萨奇病毒B3(CVB3)VP1基因重组腺病毒Ad/sVP1-C3d3,并观察对小鼠的免疫效果。方法:利用AdEasy-1系统构建、包装重组腺病毒Ad/sVP1-C3d3。BALB/c小鼠随机分为Ad/sVP1-C3d3、Ad/VP1、Ad和PBS4组,肌肉注射免疫,共免疫2次,每次间隔16d。用ELISA法和微量中和试验法分别检测血清CVB3VP1IgG和中和抗体滴度;CCK-8法检测特异性CTL杀伤活性;用致死量CVB3攻击小鼠后,检测血中病毒滴度。结果:成功构建、包装了重组腺病毒Ad/sVP1-C3d3。免疫小鼠后,Ad/sVP1-C3d3组血清CVB3VP1IgG滴度和中和抗体水平明显高于Ad/VP1(P<0.01),CTL杀伤活性明显高于Ad和PBS对照组(P<0.01)及Ad/VP1组(P<0.05),血清病毒滴度低于Ad和PBS对照组(P<0.05)。结论:重组腺病毒Ad/sVP1-C3d3能明显提高小鼠的细胞和体液免疫应答并降低血液病毒载量。

胃癌患者基质金属蛋白酶组织抑制因子2的表达与其临床检测的意义

目的探讨在正常胃黏膜组织、胃癌组织及胃区域淋巴结中基质金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP-2)的表达情况。方法选取经病理证实的胃癌标本96例,胃癌区域淋巴结96例,正常胃黏膜60例,全部病例均随访5年以上。采用免疫组织化学方法的链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法检测上述标本中TIMP-2的表达。结果各病理因素TIMP-2表达阳性率:高中度分化与低分化69.0%vs 18.4%(P<0.01);浸润深度T1+T2与T3+T465.9%vs 36.4%(P<0.01);临床分期Ⅰ～Ⅱ型比Ⅲ～Ⅳ型71.1%vs 34.5%(P<0.01);无淋巴结转移与有淋巴结转移64.3%vs 37.0%(P<0.01);生存期≥5年与<5年73.0%vs 33.9%(P<0.01)。结论胃癌组织中TIMP-2表达的下降在胃癌的侵袭转移及预后中发挥着重要的作用。TIMP-2的表达对预测胃癌侵袭转移、评估患者预后状况及合理指导胃癌的综合治疗等具有重要的临床意义。

肺孢子菌肺炎3例

肺孢子菌肺炎3例均为2008年本院ICU住院患者,女性,年龄29～52岁,平均（ 44 ±11）岁.原发病为艾滋病﹑天疱疮﹑大颗粒淋巴细胞白血病并系统性红斑狼疮各1例.患者均出现不同程度的肺间质性病变,其中大颗粒淋巴细胞白血病并系统性红斑狼疮患者伴胸膜肥厚.

医学微生物学实验教学对医学生创新能力培养的研究

创新教育是教学活动的核心,是高等医学院校实施素质教育的重点。实验教学在培养医学生创新意识方面有着得天独厚的优势。医学微生物学是与临床结合紧密,实践性很强的一门基础课。在医学微生物学实验教学中,我们采用了基础性验证性实验、综合性设计性实验、探索性创新性实验、开放性科研性实验四段式教学模式,探讨通过该实验教学方法培养医学生创新能力的效果。教学效果评价显示:四段式教学模式有效地激发了学生的学习兴趣、培养了学生独立思考的习惯、锻炼了学生的实践动手能力,其在培养学生创新思维、创新精神及创新能力方面亦起到了明显作用。

联系疫情和相关知识在医学微生物学教学中的应用

医学微生物学是一门理论性、实践性、应用性很强的基础医学课程,但在教学上,医学微生物学却有知识繁杂、信息量大以及教学内容模式化等特点。理论联系实际开展教学并把医学微生物学与其他基础医学和临床医学课程相联系,能提高学生对医学微生物学重要性的认识,激发学生的学习兴趣,取得更好的教学效果。

CVB3腺病毒载体疫苗Ad/VP1的构建及免疫小鼠的效果

目的构建柯萨奇病毒B3(CVB3)VP1基因重组腺病毒疫苗Ad/VP1,并观察其对小鼠的免疫效果。方法利用AdEasy-1系统构建、包装重组腺病毒Ad/VP1,Western blot法检测目的蛋白的表达。BALB/c小鼠随机分为Ad/VP1、Ad和PBS 3组,肌肉注射免疫,共2次,间隔16 d。用ELISA法和微量中和试验法分别检测血清CVB3 VP1IgG和中和抗体滴度;CCK-8法检测特异性CTL杀伤活性;用致死量CVB3攻击小鼠后,检测血中病毒滴度并观察小鼠的存活率。结果成功构建、包装了重组腺病毒Ad/VP1,并在293细胞中检测到VP1蛋白的表达。末次免疫小鼠后,Ad/VP1组血清CVB3 VP1 IgG滴度为168.3±1.4、中和抗体水平为31.8±1.4,均明显高于PBS和Ad对照组(P<0.01),CTL杀伤活性和对小鼠的保护率也高于对照组(P<0.05),血清病毒滴度低于两对照组(P<0.05)。结论重组腺病毒疫苗Ad/VP1能显著提高小鼠的细胞和体液免疫应答及免疫保护作用。

肠道菌群与恶性肿瘤的研究进展

寄生于黏膜表面的微生物与宿主细胞共同构成“超级生物体”,过去普遍认为人体内细菌与自身细胞数量比约为10∶1,但近来有研究根据粪便细菌含量及结肠体积,重新估计人体结肠细菌数量约为3.8×1013个,比身体内其他部位细菌总量高至少2个数量级,故可以将结肠的细菌数量近似看做人体细菌的总量;对红细胞、胶质细胞、内皮细胞、皮肤成纤维细胞、血小板及骨髓细胞(共占细胞总数约97%)进行估计,人体自身细胞约有3.0×10^13个,所以对于70kg、20~30岁、身高170cm的男性,体内细菌/自身细胞比例约为1∶1,细菌总质量约为0.2kg[1]。

接头长度对MDC与CVB3VP1融合基因疫苗免疫效果的影响

目的构建表达不同接头(linker)长度的巨噬细胞源趋化因子(MDC)与CVB3VP1融合基因疫苗,观察接头长度对融合基因疫苗免疫效果的影响。方法构建表达接头长度分别为10、15和19个氨基酸的重组质粒pcDNA3/MDC-L-VP1;将6～8周龄雄性BALB/c小鼠随机分为A～E5组,分别肌肉注射pcDNA3、pcDNA3/VP1、pcDNA3/MDC-L10-VP1、pcDNA3/MDC-L15-VP1和pcDNA3/MDC-L19- VP1,每次接种100μg/只,4周注射1次,共3次,每次免疫后第14天眼眶静脉采血,用微量中和试验滴定血清中和抗体效价。第3次免疫后3周,每组取3只小鼠,制备脾细胞,用CCK-8法检测特异性CTL杀伤活性;每组取3只小鼠以3LD_(50) CVB3病毒攻击,第7天取血处死,检测血中病毒滴度。结果成功构建了3种不同接头长度的质粒;第3次免疫后,E组中和抗体滴度和小鼠脾淋巴细胞特异性CTL杀伤活性显著高于其他各组,血中病毒滴度显著低于其他各组(P<0.01)。结论融合基因疫苗pcDNA3/MDC-L19-VP1能诱导小鼠对CVB3VP1产生较强的体液和细胞免疫,有效地抑制了病毒的增殖。