基于铁死亡调节探讨秦皮素对动脉粥样硬化的作用及机制研究

目的:基于秦皮素对铁死亡的调节作用,进一步探讨秦皮素对动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法:通过高脂饮食构建Apo E敲除(Apo E^(-/-))小鼠动脉粥样硬化模型,随机分为正常饮食组(NC组)、高脂饮食组(HFD组)、铁死亡抑制剂组(Fer-1组)、秦皮素组(Fra组)和萝卜硫素组(Sul组);用过氧化氢(H_(2)O_(2))干预人原代脐静脉内皮细胞(HUVECs)构建体外AS模型,随机分为NC组、H_(2)O_(2)组、Fer-1组、Fra组和Sul组。油红O染色用于评估AS病变大小,血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和总胆固醇(TC)测定试剂盒用于评估脂质代谢。细胞计数实验(CCK-8)用于检测秦皮素毒性作用和细胞增殖能力,铁、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)试剂盒用于测定小鼠主动脉组织和HUVECs中铁死亡水平。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-q PCR)和蛋白免疫印迹(western blotting)实验主要通过检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和血红素加氧酶1(HMOX1)表达水平以评估秦皮素的抗铁死亡作用。结果:秦皮素能够减轻AS小鼠血清脂质沉积和主动脉粥样硬化,并且保护HUVECs免受H_(2)O_(2)诱导的细胞死亡。与Fer-1组结果一致,秦皮素在体内和体外均能抑制促铁死亡生物标志物铁和MDA表达水平,上调抗铁死亡生物标志物GSH和GPX4表达水平。此外,秦皮素减轻了H_(2)O_(2)诱导的HUVECs发生铁死亡,而这种保护作用能被HMOX1特异性激活剂萝卜硫素所逆转。结论:秦皮素可能通过下调HMOX1抑制铁死亡,从而减轻AS。

GDF15对氧化应激诱导血管内皮损伤和血管生成的调节作用

目的:探讨生长转化因子15(GDF15)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的内皮细胞损伤和血管生成的影响。方法:用H_(2)O_(2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤模型,分为对照组、H_(2)O_(2)组、小分子干扰RNA(siRNA)靶向沉默GDF15(si-GDF15)组和si-GDF15+H_(2)O_(2)组。采用CCK-8检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)的浓度和凋亡率,划痕实验检测细胞迁移能力,小管形成实验检测内皮细胞成管能力。结果:与对照组比较,H_(2)O_(2)组细胞ROS浓度和凋亡率显著增高,细胞增殖、迁移和小管生成能力显著降低(均P<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,si-GDF15+H_(2)O_(2)组细胞ROS和凋亡率显著增高,细胞增殖、迁移和小管生成能力显著降低(均P<0.05)。结论:沉默GDF15能增强H_(2)O_(2)诱导的内皮损伤,并抑制HUVECs的血管形成能力。

芍药苷通过抑制脊髓Akt-NF-kB信号通路及小胶质细胞激活缓解炎症性疼痛

芍药苷具有抑制炎症和镇痛的作用,在治疗炎症疼痛方面具有重要价值,但其作用机制尚不明确。本研究发现,弗氏完全佐剂诱导小鼠炎症疼痛模型,用80 mg/kg芍药苷腹腔注射能有效缓解疼痛。检测发现芍药苷治疗后,小鼠机械性痛阈与热板痛阈均明显升高(机械性痛阈值:由6.38±1.00 g提高至8.31±0.81 g;热板痛阈值:由5.78±0.76 s提高至9.90±1.58 s);同时抑制外周炎症因子TNF-α等的释放(由708.71±46.55 pg/m L降低至588.65±16.02 pg/m L);免疫组织化学检测发现,芍药苷能有效抑制脊髓背角小胶质细胞的激活;NO检测结果发现,脊髓部位NO合成降低(3.55±0.28μmol/L·g-1Pro降至2.25±0.71μmol/L·g-1Pro);Western印迹检测证实,脊髓部位i NOS在使用芍药苷后,表达恢复正常水平。同时发现,Akt-NF-κB信号可能参与芍药苷的镇痛作用。上述结果提示,芍药苷缓解慢性炎症疼痛可通过抑制炎症因子释放,也通过抑制脊髓小胶质细胞的激活,而此过程依赖抑制Akt-NF-κB信号的激活。

芍药苷通过IL-10-STAT3信号通路抑制脂多糖诱导BV2细胞炎症与吞噬作用

小胶质细胞是中枢神经系统中重要免疫细胞,也是炎症反应中的主要效应细胞。芍药苷被证实能有效抑制炎症反应,在调节免疫方面具有巨大药用价值。本文旨在阐明BV2细胞炎症反应中芍药苷对细胞炎症及吞噬的抑制作用,并探索其中潜在机制。体外实验利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导BV2细胞发生炎症反应,芍药苷能有效抑制BV2细胞TNF-α和NO的产生以及BV2细胞异常增加的吞噬功能,并且在此过程中IL-10-STAT3信号通路被激活;芍药苷的抑制作用在我们使用STAT3抑制剂JSI-124后显著降低,TNF-α和NO的表达量增加、BV2细胞的吞噬功能增强。上述结果表明,芍药苷能有效抑制BV2细胞炎症作用及吞噬作用,这一过程中依赖IL-10-STAT3信号通路的激活。这将加深我们对芍药苷抑制小胶质细胞炎症作用机制的认识。