硫酸吲哚酚通过TGF-β1诱导腹膜间皮细胞转分化

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)在硫酸吲哚酚诱导腹膜间皮细胞转分化中的作用。方法对人腹膜间皮细胞株HMrSV5进行体外培养,先用含10%胎牛血清的RPMI1640培养液培养,分别在培养液中加入1000μmol/L的硫酸吲哚酚,4.25%腹膜透析液(PDF),2μmol/L TGF-β1受体抑制剂LY364947(TRI)+PDF,TRI+1000μmol/L的硫酸吲哚酚共培养。用免疫荧光法观察细胞在0、4、24、48、72 h的形态改变,用qRT-PCR方法测得各组各时间点TGF-β1、Twist1和E-钙粘蛋白(E-cadherin)基因相对表达量。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。结果硫酸吲哚酚剌激细胞后,细胞由铺路石样变细变长,呈长梭形改变,而TRI+1000μmol/L硫酸吲哚酚干预的细胞变化不明显。免疫荧光染色结果显示,硫酸吲哚酚干预细胞后,从24 h开始α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达量增加,48 h表达最明显,而同时段硫酸吲哚酚+TRI干预细胞后,α-SMA表达相对减少。qRT-PCR结果显示,与对照比较,加入硫酸吲哚酚或PDF干预48 h后TGF-β1、Twist基因相对表达量(1.03±0.01,1.07±0.01比0.28±0.01)升高,E-cadherin基因相对表达量(0.86±0.02,0.88±0.02比3.34±0.02)下降(P<0.05);与硫酸吲哚酚培养液比较,加入硫酸吲哚酚+TRI培养48 h后细胞TGF-β1、Twist1基因相对表达量(0.14±0.00比1.03±0.01)降低,E-cadherin基因相对表达量(1.69±0.03比0.86±0.02)升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与PDF培养比较,加入PDF+TRI培养48 h后细胞中TGF-β1、Twist1基因相对表达量(0.14±0.00比1.07±0.01)降低,E-cadherin基因相对表达量(1.80±0.03比0.88±0.02)升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论硫酸吲哚酚可通过上调TGF-β1基因表达来促进腹膜间皮细胞EMT,Twist1参与其中。